新型耐热耐酸普鲁兰酶的分离纯化与酶学特性分析

论文摘要

从泡盛曲霉（Aspergillus awamori） XF发酵液中分离纯化普鲁兰酶（PulXF）并研究其酶学性质。通过硫酸铵沉淀、阴离子交换层析、凝胶过滤层析和疏水层析,纯化得到一种电泳纯的PulXF。纯化倍数8.16倍,比活力为309.28 U/mg。SDS-PAGE检测得单条带,表明PulXF为单亚基蛋白,分子量63.7 kDa。在50-80℃,pH4.58.0范围内,酶能保持高活性,最适反应温度60℃,最适pH5.0。在较广的pH范围内（pH3.08.0）,28℃下,经过24 h酶活能保持80%以上活性。Km值和Vmax分别为0.92 mg/mL和11.90μmol/min。酶活测定及TLC分析显示PulXF对普鲁兰多糖有强水解活性,终产物麦芽三糖;对支链淀粉和可溶性淀粉有较弱活性,对直链淀粉、α-环糊精、β-环糊精和糖原无活性。表明从泡盛曲霉XF分离的PulXF属于Ⅰ型普鲁兰酶。Ca2+、Zn2+和Mg2+能够促进酶的活性,其中Ca2+激活作用最强。而PulXF在5%浓度的SDS、CTAB、Tween 80和30%的乙醇中保持高稳定性。基于PulXF在苛刻环境下的高稳定性及高活性,很有希望在淀粉加工、食品饮料等领域以及需要在高温、高酸环境下使用的生物技术工业中使用。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料与仪器
•   1.2 实验方法
•     1.2.1 产普鲁兰酶菌株的鉴定
•     1.2.2 粗酶液的制备
•     1.2.3 Pul XF活力及蛋白质浓度测定
•       1.2.3. 1 PulXF活力的测定
•       1.2.3. 2 蛋白质浓度测定
•     1.2.4 Pul XF的分离纯化
•       1.2.4. 1 硫酸铵分级盐析
•       1.2.4. 2 离子交换柱层析
•       1.2.4. 3 分子筛凝胶过滤层析
•       1.2.4. 4 疏水层析
•     1.2.5 酶纯度分析及活性电泳
•     1.2.6 酶学性质研究
•       1.2.6. 1 最适反应温度及热稳定性
•       1.2.6. 2 最适反应pH及其pH稳定性
•       1.2.6. 3 金属离子以及常见抑制剂对PulXF的影响
•       1.2.6. 4 Pul XF
•       1.2.6. 5 PulXF动力学参数的测定
•   1.3 数据处理
• 2 结果与分析
•   2.1 菌株XF的鉴定
•   2.2 Pul XF的分离纯化
•     2.2.1 离子交换柱层析
•     2.2.2 分子筛凝胶柱层析
•     2.2.3 疏水层析
•     2.2.4 蛋白电泳检验纯度
•   2.3 Pul XF最适反应温度及热稳定性
•   2.4 Pul XF最适反应p H及p H稳定性
•   2.5 金属离子和抑制剂对Pul XF活性的影响
•   2.6 Pul XF底物特异性及水解产物分析
•   2.7 Pul XF反应动力学性质分析
• 3 讨论
• 4 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 高兆建,陈雪莲,王先凤,许祥,李宝林,焦魏,芦宁,尚业成

关键词: 普鲁兰酶,泡盛曲霉,分离纯化,酶学性质

来源: 食品工业科技 2019年04期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑

专业: 轻工业手工业

单位: 徐州工程学院食品(生物)工程学院

基金: 江苏省重点研发计划项目(BE2016316),江苏省苏北科技计划项目(BC2013417,BN2015021)

分类号: TS201.25

DOI: 10.13386/j.issn1002-0306.2019.04.012

页码: 75-81

总页数: 7

文件大小: 469K

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