导读:本文包含了嗜热葡聚糖内切酶论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:嗜热,葡聚糖内切酶,毕赤酵母,GH7
嗜热葡聚糖内切酶论文文献综述
Karnaouri,AC,许俊[1]（2015）在《来源于嗜热毁丝菌的葡聚糖内切酶GH7的克隆、表达及鉴定》一文中研究指出在毕赤酵母(Pichia pastoris)中功能表达一种来自嗜热毁丝菌(Myceliophthora thermophila)的葡聚糖内切酶,该酶属于糖苷水解酶家族7。在毕赤酵母X-33中成功克隆该酶,经纯化得到均一性成分(65 000)并进行了鉴定。底物专一性分析表明(本文来源于《中国医药工业杂志》期刊2015年01期）
蒋海芹,毕云枫,华欣春,陈丽丽,徐雪霏[2]（2012）在《一株嗜热梭菌β-1,4-葡聚糖内切酶基因的克隆及表达》一文中研究指出以嗜热梭菌(Symbiobacterium thermophilum IAM 14863)基因组DNA为模板克隆了编码葡聚糖内切酶的基因,同时将该酶基因构建于表达载体pET32a(+)中,获得重组表达载体pET32a-Glu,转化至E.coli BL21(DE3)PLYS中并进行表达。结果表明:该基因大小为1 101 bp,共编码366个氨基酸;SDS-PAGE电泳结果表明该基因在E.coli BL21(DE3)PLYS中得到了有效表达,相对分子质量约为60 kDa,纯化后重组酶活力为103 U/mL;酶学性质实验结果表明:酶最适pH值为5左右,最适反应温度为55℃,且此酶具有良好的耐热性(75℃左右)和pH值稳定性。(本文来源于《纺织学报》期刊2012年08期）
蒋海芹[3]（2012）在《一种嗜热梭菌β-1，4-葡聚糖内切酶基因的克隆和表达》一文中研究指出纤维素是植物生物质的重要组成部分,在当今资源和能源日益枯竭的情况下,大力开发、转化、利用木质纤维素,将其转化成可发酵糖、饲料或是生物燃料,以应用于人类急需的能源、食物、化工原料,这对解决人类社会的食物短缺和能源危机具有重大现实意义。纤维素酶中β-葡聚糖酶对各个领域都有积极的作用,比如食品、纺织、洗涤、酿酒、医药等行业,都有广泛的应用价值。目前国外对来源于嗜热梭菌所产p-葡聚糖酶的研究技术比较成熟,而我国对β-葡聚糖酶的研究还处于起步阶段,酶产量和比活低,耐热性较差,不适合工业化生产的要求。本研究首次将嗜热梭菌(Symbiobacterium thermophilum IAM14863)中的β-1,4-葡聚糖内切酶基因重组到表达载体pET32a(+)中,并在E.coli BL21(DE3)PLYS中进行表达,成功构建了耐热且酶活高的基因工程菌,并研究了诱导表达重组酶的影响因素,并对纯化后的酶进行了酶学性质上的初步研究。结果如下：目的基因与其他细菌所产的葡聚糖内切酶同源性很高。首先将β-1,4-葡聚糖内切酶基因celGlu成功连接到pMD(?)18-T Simple Vector上,测序结果表明,该基因读码框碱基长度为1101bp,编码366个氨基酸。经Blast比较分析,该酶基因与Bacillus amyloliquefaciens、 Bacillus clausii、S.rochei、S.lividans、S.coelicolor、S.ambofaciens、Oceanobacillus iheyensis、 Listeria monocytoqenes报道的葡聚糖内切酶基因的同源性都高于95%。目的基因成功构建到了表达质粒pET32a中。重组表达质粒pET32a-celGlu的鉴定试验采用了叁种方法,即抗性检测、PCR鉴定、酶切鉴定,结果重组质粒pET32a-celGlu能在Amp抗性条件下生长,能扩增出与目的基因大小一致的条带,且酶切后能得到与目的基因和质粒大小都分别一致的条带。目的基因转化至表达菌体BLP中,并实现了高效表达。将重组表达质粒pET32a-Glu成功转化到表达菌BLP后,经IPTG诱导培养,目的蛋白表达成功,电泳检测产生一条相对分子质量约为60kDa的特异性蛋白条带,但相对分子量比计算的理论值约大20kDa,此值与表达载体pET32a中Trx和His等融合标签大小一致。随着诱导时间的延长,目的蛋白的表达量呈增加趋势,占总蛋白的60%～80%,实现了该酶的超表达。利用刚果红染色试验对酶活进行了定性检测,菌落周围具有清晰的透明水解圈,说明该工程菌产纤维素酶且具有酶活。不同因素对重组菌发酵条件的影响不同。结果表明诱导温度对酶活的影响很大,随着温度的上升,酶活也随之增大,当温度在30℃时,酶活最高,诱导时间越长表达产物越多,考虑杂蛋白影响产物和诱导效率等原因,选择4h为最佳诱导时间。IPTG的浓度对表达产物的酶活并无太大的影响,选择了1mmol/L。接种量对产物的酶活有促进作用。诱导后的培养基中的酶活性可达268U/mL,是优化前的1.15倍。经超声破碎试验证明该重组酶主要为胞内酶,属于细胞间质表达。纯化过程采取离心,超声破碎,热变性,盐析,透析和浓缩等处理,然后经HisTrap HP亲和层析纯化后活力高达103U/mL。重组酶学性质实验表明,重组酶的最适反应温度为55℃,在50-65℃范围内酶活较高。耐热性实验表明该酶在低于75℃温度下保温时酶的活性比较稳定,保温1h后相对残余酶活仍在50%以上,70℃保温1h后残余酶活为75%且比65℃略有提高,说明高温对该酶有热激活作用,表明该重组酶具有稳定的蛋白质高级结构和良好的热稳定性。该酶的最适反应pH为5.0,为中性纤维素酶,适合在动物肠道内消化分泌,相同pH下不同种类的缓冲液对该酶的活性及稳定性影响不大。(本文来源于《吉林农业大学》期刊2012-06-01）
郑柏松[4]（2008）在《嗜热β-1，4-葡聚糖内切酶和酰基肽水解酶突变体的晶体结构和功能研究》一文中研究指出来源于嗜热菌的酶类具有极好的高温反应活性和稳定性,在能源、化工、食品和医药等行业展现出越来越广阔的应用潜力。解析嗜热酶及酶-底物复合物的晶体结构,研究其结构特征,将有助于揭示酶超常生物学稳定性以及高温催化反应机制的分子基础,为发掘嗜热酶的新功能、指导酶分子设计和改造等工作提供必要的理论依据。论文第一部分运用分子生物学技术克隆、表达、纯化了来源于嗜热菌Fervidobacterium nodosum Rt17-B1的嗜热β-1,4-葡聚糖内切酶FnCel5A及其N末端截短突变体FnCel5AND,并运用蛋白质晶体学的技术进行结晶,最终使用单波长反常散射法解析了分辨率达1.7 ?的FnCel5A和2.2 ?的复合物FnCel5AND:Glucose的晶体结构。结构分析表明,该酶具有糖基水解酶第五家族典型的(β/α)8形式TIM桶状结构;与中温和低温结构同源物比较,FnCel5A在氨基酸组成和分子内相互作用等方面具备高稳定性酶的结构特征;确定了Glu283-His126和Glu167-His226双催化活性中心,以及底物结合残基;结合分子模拟,提出了FnCel5A与底物结合的模型,阐明了该酶水解直链糖底物的催化机理。论文第二部分克隆、表达、表征了来源于嗜热古菌的酰基肽水解酶N末端截短突变体ApAPH-ΔN21;结晶并利用分子置换法解析了2.5 ?分辨率的突变体结构。结构分析和性质测定结果显示,ApAPH-ΔN21较野生型的最适反应温度降低18℃,对热和化学变性剂抗性降低;平均结构B因子由野生型的19.4 ?2升高到突变体的28.4 ?2。以上证据表明保守的N末端的对于保持ApAPH或家族中其他成员的稳定性具有重要作用。(本文来源于《吉林大学》期刊2008-10-01）
嗜热葡聚糖内切酶论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
以嗜热梭菌(Symbiobacterium thermophilum IAM 14863)基因组DNA为模板克隆了编码葡聚糖内切酶的基因,同时将该酶基因构建于表达载体pET32a(+)中,获得重组表达载体pET32a-Glu,转化至E.coli BL21(DE3)PLYS中并进行表达。结果表明:该基因大小为1 101 bp,共编码366个氨基酸;SDS-PAGE电泳结果表明该基因在E.coli BL21(DE3)PLYS中得到了有效表达,相对分子质量约为60 kDa,纯化后重组酶活力为103 U/mL;酶学性质实验结果表明:酶最适pH值为5左右,最适反应温度为55℃,且此酶具有良好的耐热性(75℃左右)和pH值稳定性。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
嗜热葡聚糖内切酶论文参考文献
[1].Karnaouri,AC,许俊.来源于嗜热毁丝菌的葡聚糖内切酶GH7的克隆、表达及鉴定[J].中国医药工业杂志.2015
[2].蒋海芹,毕云枫,华欣春,陈丽丽,徐雪霏.一株嗜热梭菌β-1,4-葡聚糖内切酶基因的克隆及表达[J].纺织学报.2012
[3].蒋海芹.一种嗜热梭菌β-1，4-葡聚糖内切酶基因的克隆和表达[D].吉林农业大学.2012
[4].郑柏松.嗜热β-1，4-葡聚糖内切酶和酰基肽水解酶突变体的晶体结构和功能研究[D].吉林大学.2008