导读:本文包含了精子介导基因转移论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:精子,基因,体外,蜜蜂,家蚕,转染,转基因。
精子介导基因转移论文文献综述
吴斌,戴建军,张廷宇,张树山,吴彩凤[1]（2013）在《纳米化聚酰胺-胺型树枝状聚合物对猪精子介导基因转移效率的影响》一文中研究指出为优化猪精子介导的基因转移(SMGT)技术,提高转基因效率,本试验利用纳米化聚酰胺-胺型树枝状聚合物(PAMAM-D)为载体介导猪精子转染外源DNA,经原位杂交检测其阳性率,体外受精(IVF)分析外源基因的表达。结果显示,0.5μg线状质粒DNA中加入PAMAM-D(质量比20∶1)阳性率最高(P<0.05);孵育时间为90、120min时,阳性率显着高于30、60min组(19.94%、18.57%与8.50%、13.87%;P<0.05);以此条件处理精子,阳性率显着高于无载体和脂质体处理组(23.93%与7.25%、13.25%;P<0.05)。各处理精子经IVF后,PAMAM-D组EGFP表达率显着高于其他2组(9.19%与4.81%、3.43%;P<0.05),各组绿色荧光胚胎经基因组PCR分析均能检测到EGFP基因。结果表明,PAMAM-D可有效介导猪精子转染外源DNA,并通过体外受精将外源基因导入胚胎中。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2013年03期）
宋成义,吴晗,周辉云,谢雨琇,李庆平[2]（2012）在《影响猪精子介导基因转移效果的因素研究》一文中研究指出为优化猪精子载体法技术参数,利用荧光定量PCR、荧光显微镜检测和精液常规检测方法,分析不同DNA转染剂、不同孵育温度和不同形态DNA对猪精子转染外源DNA的影响。结果表明,PEI和TransFast转染剂能极显着提高猪精子转染效果,且PEI优于TransFast,而NanoFect转染剂包裹DNA不能转染精子。随着转染温度的升高,精子的活力和活率均明显下降,而转染率和内化外源DNA量基本保持稳定,而吸附外源DNA量呈下降趋势。环状DNA和线性化DNA在与精子共孵育后,两者的精子活力、活率、转染率和内化外源DNA量差异均不显着,精子吸附线性化DNA量极显着高于环状DNA量。综合分析表明,外源DNA形态对猪精子转染效果无显着影响;PEI和TransFast能够显着提高猪精子转染效果;共孵育温度以17℃为最佳,本结果为开展精子载体法制备转基因猪研究提供了基础试验依据。(本文来源于《家畜生态学报》期刊2012年01期）
周辉云[3]（2011）在《猪精子介导基因转移技术优化研究》一文中研究指出精子载体法是生产转基因动物的一种简单有效的方法,近年来研究报道越来越多,越来越具有吸引力。精子与DNA混合培养能否捕获外源DNA是精子载体法是否可行的关键。精子与外源DNA的结合受多方面因素影响,本试验设立不同DNA形态(环状和线性化)、不同转染剂(PEI、Transfast、Nanofect)、不同转染时间(30min、60min、90min)以及不同转染温度(17℃、22℃、27℃、32℃、37℃)四种转染方案,通过比较精子活力、活率、转染率、DNA吸附内化率等参数,从而优化猪精子转染体系和条件来探索最佳转染方案,进行猪精子介导基因转移技术优化研究,为用精子介导法制备转基因猪提供实验依据。试验结果显示：线性化DNA转染组与环状DNA转染组无论是在精子活力、活率还是转染率上差异均不显着,线性化DNA转染组活率83.53±1.34、活力52.73±0.92、转染率43.22±1.93,环状DNA转染组活率83.53±0.99、活力52.62±1.77、转染率43.07±1.26,证明外源DNA的不同形态对猪精子共孵育转染效果没有影响。该结果为转座子系统在精子介导基因转移技术中的应用提供了便利,转座质粒在应用中可以不用线性化直接应用,从而节省时间和费用。转染剂PEI和Transfast确实具有促进精子吸附外源DNA的作用,同时在相同条件下PEI的转染效果(46.99±1.99)显着高于Transfast组(33.12±2.02),但是在活力上PEI组(56.03±1.31明显低于Transfast组(66.02±1.31),而转染剂Nanofect对转染完全没有促进作用,相反还阻止了精子对外源DNA的吸附(转染率为0)。转染共孵育的时间并非越长越好,以30min为佳(转染率为43.07±1.26),此时精子吸附外源DNA的能力基本饱和,达到稳定状态,随着时间的延长,转染率不见明显增加,但精子活力、活率均明显下降,综合受精成功率考虑,转染孵育时间以30min为最佳。猪精子与外源DNA的最佳孵育温度为17℃,随着转染温度的升高,精子活力、活率明显降低,同时其转染率基本稳定,不随温度变化而变化,综合受精成功率考虑,转染孵育温度以17℃为最佳。综合结果看来,猪精子共孵育中外源DNA形态对转染效果无影响；转染剂以PEI最优,Transfast次之；共孵育时间以30min为最佳；共孵育温度以178为最佳。(本文来源于《扬州大学》期刊2011-05-01）
郭战军,马毅,李叁华,韩瑞发,李胜芝[4]（2010）在《利用精子介导法建立hHT/hDAF双基因转移小鼠模型》一文中研究指出为探讨超急排斥反应(Hyperacute rejection,HAR)及延迟性异种排斥反应(Delayed xenograft rejection,DXR)的分子调控机制,采用优化的精子介导法(Sperm-mediated gene transfer,SMGT)对建立hHT/hDAF双基因转移小鼠模型进行了研究。结果表明,应用树枝状聚合物(Dendrimers)优化SMGT后,2细胞胚GFP+RFP的阳性率达到4.51%,同对照组相比差异极显着(P<0.01)。选取标记基因GFP+RFP双阳性的胚胎进行移植后获得36只仔鼠,PCR及Southern Blot检测结果表明,17只小鼠PCR结果呈hHT+hDAF双阳性,其中5只小鼠Southern Blot结果呈hHT+hDAF双阳性。上述结果表明,成功建立了Hht/hDAF双基因转移小鼠模型。(本文来源于《华北农学报》期刊2010年03期）
郭冬生,孙亮先,曾志将,张巧利[5]（2007）在《中华蜜蜂精子介导egfp基因转移》一文中研究指出中华蜜蜂Apis cerana cerana是一种真社会性昆虫,也是我国重要的经济昆虫。本实验目的是为了检测精子是否可以作为载体将外源egfp基因介导转入中华蜜蜂。首先将雄蜂精子与线性化的质粒DNA共浴,然后通过人工授精技术将精子导入处女王,再对实验蜂群后代进行分析。结果显示EGFP蛋白在一群实验组蜂的1~2日龄小幼虫中表达较强,能检测到0.01%~0.02%荧光阳性小幼虫个体;通过PCR和RT-PCR技术分析,证实转入的外源egfp基因获得表达。实验结果表明精子载体法能够用于中华蜜蜂外源基因的转移和表达。(本文来源于《昆虫学报》期刊2007年09期）
郭冬生,张巧利,孙亮先[6]（2007）在《蜜蜂精子介导GFP基因转移研究》一文中研究指出将pGFP-2质粒线性化,利用精子介导,通过人工授精技术导入意大利蜜蜂处女王,然后将授精王介绍到无王群繁殖后代。结果:试验群产生了一群绿色荧光阳性蜜蜂;对阳性蜂群后代分析发现,1~2日龄幼虫能检测到荧光,提取蜜蜂DNA进行PCR扩增得到预想的片断,通过RT-PC分析,从转录水平上证实转导的外源基因获得表达。结论:以绿色荧光蛋白(GFP)基因为报告基因,通过精子介导法能够生产克隆转基因蜜蜂。(本文来源于《江西农业大学学报》期刊2007年01期）
李福兵[7]（2005）在《睾丸内注射精子载体法介导基因转移实验研究》一文中研究指出精子载体法介导基因转移是以精子为载体,在受精时将外源目的基因导入卵母细胞,制备转基因动物的简单而高效的方法之一。该方法不仅操作方便,不需要昂贵的仪器设备,而且对操作人员的技术要求也不高。目前研究者主要采用将精子与外源DNA简单共孵育即体外精子载体法进行转基因方法和转基因动物的制备的研究。由于精浆等多种因素的影响以及处理方式的不同,采用该法得到的转基因阳性率不稳定,不同实验室得到的结果差异很大,甚至矛盾。睾丸内注射外源DNA进行基因转移的方法(体内精子载体法)可以有效的避开精浆作用,同时避免了精子由于复杂处理而造成的损伤,对保证精子的受精能力和受精后的胚胎发育有十分重要的作用。山羊是进行乳腺生物反应器的首选动物,但是山羊进行睾丸注射转基因的研究国外还没有报道,更没有建立稳定、有效的睾丸内注射精子载体法介导基因转移的转染体系。该研究可以丰富精子载体法基因转移的内容,对其他动物应用该方法进行转基因研究可以提供有价值的参考。本实验针对可能影响睾丸内注射精子载体法介导基因转移中的主要因素,探讨不同注射部位、不同DNA注射剂量,注射后不同作用时间对转染后精子阳性率的影响,并且用转染的山羊精子制备转基因胚胎,研究睾丸内注射精子载体法的可行性以及建立优化睾丸内注射技术体系。本实验将地高辛标记的pEGFP-N1质粒DNA分别进行输精管注射和睾丸组织多点注射,于注射后20、30、40天采集精液,提取精子基因组DNA,PCR和Southern杂交检测基因在精子中的整合,原位杂交方法检查精子转染外源基因的阳性率。然后分别将3、4、5,6 ml质粒DNA用睾丸组织多点注射方法处理4头川东白山羊,注射后20、30、40,50天进行精子原位杂交和表达GFP的荧光检测,利用睾丸内注射后40天的4头山羊精液,体外获能后,分别与20枚体外成熟培养的卵母细胞行体外受精,检测胚胎荧光表达。注射后50、60、90,120天检测GFP在左侧长轴中部睾丸组织的表达。结果PCR和Southern杂交检测为阳性,表明外源基因整合到精子基因组上;睾丸内多点注射优于输精管注射;睾丸内多点注射后40天的精液行体外受精实验结果分别有1、3、12、6枚胚胎表达GFP,PCR检测荧光胚胎为阳性胚胎;将5 ml(本文来源于《第叁军医大学》期刊2005-05-01）
袁进,安靓[8]（2004）在《精子介导基因转移建立转基因动物的研究进展及展望》一文中研究指出精子介导基因转移技术制备转基因动物是在传统的转基因技术的基础上建立起来的一种新技术。由于该技术具有技术路线简单、操作方法简便、所需仪器设备少等优点,因而具有广泛的应用前景。本文主要介绍了精子介导基因转移制备转基因动物的基本原理、最新研究进展、目前存在的问题以及该技术的应用前景。(本文来源于《中国比较医学杂志》期刊2004年06期）
叶华虎[9]（2003）在《山羊精子介导基因转移的实验研究》一文中研究指出精子介导基因转移（Sperm-mediated gene transfer, SMGT）是以精子为载体，在受精时将外源目的基因导入卵母细胞，是目前转基因动物研究中简单而高效的方法学之一。SMGT的核心是高效、稳定的体外受精技术和精子转染技术，前者不仅有利于获得大量的胚胎来源，而且还对胚胎质量以及胚胎移植后的胎儿发育和动物个体获得有重要影响，后者是提高转基因动物成功率的关键和保证。由于国内外目前在山羊体外受精和精子转染方面的研究尚不成熟，影响了我们即将开展的以精子介导方法为基础的转基因山羊乳腺生物反应器课题进程。为此，本实验对山羊体外受精技术和精子转染技术展开研究，以建立SMGT技术平台，为转基因山羊乳腺生物反应器的研制奠定基础。本研究共分为5部分，第一、二、叁部分分别就体外受精技术中的3个关键环节：卵母细胞成熟、精子获能和受精、早期胚胎体外培养进行研究，探讨体外受精影响因素，优化培养系统，建立稳定的体外胚胎生产体系。第四部分对精子供体选择、外源DNA转染精子的影响因素、精子内化转运机制以及转染方法的优化组合进行探讨，建立山羊精子高效转染方法。第五部分利用已建立的体外受精技术和精子转染技术，生产转基因胚胎，探讨精子介导基因转移的可行性、效率及稳定性。第一部分的卵母细胞成熟实验中，首先利用Hoechst33342染色检查了山羊卵巢卵泡发育特征，发现70%以上的直径>2mm卵泡卵母细胞处于GVⅡ~GVBD期，根据Hyttle的卵母细胞发育理论，这些卵已完成“获能”，是体外成熟的首选卵源；而直径<2mm卵泡卵母细胞主要处于GVⅠ期（70.8~73.1%），“获能” 过程尚未完成，体外成熟和继续发育能力有限，培养价值不高。本实验选择直径>2mm卵泡卵母细胞为卵源，比较在不同培养液中的成熟发育率，以优化成熟培养系统。发现M199+10% EGS (estrous goat serum , EGS)+ 10% GFF (goat follicles fluid, GFF)+ 15 IU/ml FSH (follicle stimulating hormone, FSH) + 30 IU/ml LH (luteinizing hormone , LH) + 1μg/ml E2 (17-β estradiol , E2)培养液中的成熟率和卵裂率最高，分别为73.1%和38%，显着高于其他培养系统；超微结构进一步证实，在该培养液中成熟的卵母细胞，结构与自然成熟卵基本一致。表明该系统不仅提高成熟率，而且促进胞质充分成熟。第二部分的精子获能实验中，主要研究了不同钙离子载体（calcium ionophre A23187,IA）浓度对精子顶体反应率和精子存活时间的影响，实验设置了0.2、0.5、0.8、<WP=10>1.1μmol/L 4个实验组，其中0.2μmol/L处理组的精子寿命最长，达到13 h左右，顶体反应发生率高（超过60%）；受精实验结果表明，0.2μmol/L IA作用8min处理的获能精子，受精率（68.6%）和卵裂率（40%），均显着高于传统的肝素获能处理组（分别为57.8%和24.3%），超微结构进一步证实，IA处理后的精子培养5 h，67.5%的获能精子已完成顶体反应，具有正常受精能力。IA获能系统的建立，避免了肝素对精子结合外源DNA的干扰，为精子高转染方法的建立奠定了基础。第叁部分的早期胚胎培养实验中，探讨了简单培养基mSOF（modified synthesis oviduct fluid, mSOF）和组织培养基M199、共培养系统以及卵裂发生时间对胚胎发育的影响。结果表明，mSOF提高卵裂率和8-cell胚胎发育率，而M199能有效支持8-cell以后的胚胎发育，共培养系统是克服胚胎体外发育阻断的有效方法。因此，本实验建立了分阶段共培养体系：即在受精后1~3天以mSOF+BSA（bovine serum albumin, BSA）+CC（cumulus cell monolayer，CC）为培养基，4~7天更换为M199+EGS+CC。在该系统培养的受精卵，2-cell、8-cell和桑胚率分别为46.5%、55.8%和40.8%；早期卵裂胚（受精后30 h内）在该培养系统中的桑胚率高达47.5%，提示分阶段共培养方法是提高山羊早期胚胎体外发育的良好体系。根据以上实验结果，我们建立了如下山羊体外受精技术体系：选择直径>2mm卵泡卵母细胞，在M199+10% EGS + 10% GFF + 15 IU/ml FSH + 30 IU/ml LH + 1μg/ml E2中培养27 h，与0.2μmol/L IA作用8min处理的获能精子共孵育12~14 h，受精卵1~3天培养于mSOF+BSA+CC，4~7天更换培养液为M199+EGS+CC。该系统具有稳定、高效等特点，卵母细胞成熟率超过70%，卵裂率为38.7%~46.3%，桑胚率40.8%~47.3%，卵裂率和桑胚率高于国内同类报道。第四部分的精子转染实验中，我们利用DIG末端标记技术和免疫组化技术研究精子转染效率。预实验发现，4只种公羊精子转染阳性率有明显差异，其中1号最低，2号最高，3、4号居中。因此，实验重点对1号和2号进行了研究，结果表明，山羊精子具有自发结合外源DNA能力，结合部位集中在精子头部核后帽区，结合的外源DNA首先“挂”在膜表面，继而被内化转运到细胞内，但并非所有的结合DNA都被内化。死精子特别是质膜破裂的死亡精子对外源DNA的结合能力显着高于质膜完整的精子（79.4%~81.1% vs 54.8%~58.6%），但死精子不能完成外源DNA的内化转运过程，DNaseⅠ消化后的阳性率低于1%。活精子的转染效率受多重因素影响，其中精浆、动物个体和精子质膜是最重要的叁大因素。精浆主要抑制结合，同时也影响内化转(本文来源于《第叁军医大学》期刊2003-05-01）
吴春旭[10]（2002）在《家蚕精子介导基因转移技术的研究》一文中研究指出本文探讨了家蚕精子介导基因转移技术(交配囊注射法)能否有效地将外源基因导入并整合于家蚕基因组中使之稳定遗传，以及转移的外源DNA浓度、线性化与否等对外源基因转移效率的影响。在同源重组绿色荧光蛋白表达载体pG350的基础上，以pMD18-T为质粒载体，用egfp基因替换gfp基因，构建了家蚕核型多角体病毒早期即刻蛋白基因启动子BmNPV-IE控制下的增强型绿色荧光蛋白表达载体pMD-Fib-IE-EGFP。采用本实验室建立的蚕蛾交配囊直接注射法(将外源DNA直接注入处女蛾交配囊中再与同种雄蛾交配产卵)，历时3年，先后进行了2次家蚕精子介导基因转移实验。2000年用线性化的pG350进行家蚕精子介导基因转移实验，在14个G0代实验蛾区的DNA样品中有5个DNA样品PCR检测为阳性，阳性率35． 7％，对G1代的PCR与杂交检测证明导入的GFP基因存在于G1代的家蚕基因组中；2002年实验用了pMD-Fib-IE-EGFP和pEGFP-N3两个质粒进行基因转移实验，pMD-Fib-IE-EGFP以线状和环状两种构象分别用了2． 0、 1． 4、0． 7mg/mL 叁个浓度共6组进行外源基因转移实验，pEGFP-N3以1． 2mg/mL环状的条件进行外源基因转移实验。对得到的G0代97个蛾区DNA样品进行了PCR和杂交检测。在注射pMD-Fib-IE-EGFP的6组(X20、 X14、 X07、 H20、 H14、 H07) 中PCR阳性率分别为55． 0％(11／20) 、78． 6％(11／14) 、53． 3％(8／15) 、50． 0％(8／16) 、58． 3％(7／12) 和71． 4％(5／7) ，注射pEGFP-N3的一组PCR阳性率46． 2％(6／13) ，对PCR阳性的DNA样品进一步做杂交检测的结果表明导入的EGFP基因整合在G0代家蚕基因组中。 紫外灯荧光检测，2次实验都未看到实验组与对照组家蚕间有显着 差异，而2002年实验取家蚕4龄幼虫生殖细胞观察，有部分实验家蚤的 生殖细胞在紫外光下发绿色荧光。 本研究的结果证明了精于介导基因转移方法（交配囊注射法）能将 外源基因有效地导入并整合于家蚕基因组，导入的外源基因可能是以串 联多拷贝的形式整合于家蚕基因组中，整合的外源基囚叶＠传午G；代。(本文来源于《厦门大学》期刊2002-07-01）
精子介导基因转移论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为优化猪精子载体法技术参数,利用荧光定量PCR、荧光显微镜检测和精液常规检测方法,分析不同DNA转染剂、不同孵育温度和不同形态DNA对猪精子转染外源DNA的影响。结果表明,PEI和TransFast转染剂能极显着提高猪精子转染效果,且PEI优于TransFast,而NanoFect转染剂包裹DNA不能转染精子。随着转染温度的升高,精子的活力和活率均明显下降,而转染率和内化外源DNA量基本保持稳定,而吸附外源DNA量呈下降趋势。环状DNA和线性化DNA在与精子共孵育后,两者的精子活力、活率、转染率和内化外源DNA量差异均不显着,精子吸附线性化DNA量极显着高于环状DNA量。综合分析表明,外源DNA形态对猪精子转染效果无显着影响;PEI和TransFast能够显着提高猪精子转染效果;共孵育温度以17℃为最佳,本结果为开展精子载体法制备转基因猪研究提供了基础试验依据。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
精子介导基因转移论文参考文献
[1].吴斌,戴建军,张廷宇,张树山,吴彩凤.纳米化聚酰胺-胺型树枝状聚合物对猪精子介导基因转移效率的影响[J].中国兽医学报.2013
[2].宋成义,吴晗,周辉云,谢雨琇,李庆平.影响猪精子介导基因转移效果的因素研究[J].家畜生态学报.2012
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[4].郭战军,马毅,李叁华,韩瑞发,李胜芝.利用精子介导法建立hHT/hDAF双基因转移小鼠模型[J].华北农学报.2010
[5].郭冬生,孙亮先,曾志将,张巧利.中华蜜蜂精子介导egfp基因转移[J].昆虫学报.2007
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[8].袁进,安靓.精子介导基因转移建立转基因动物的研究进展及展望[J].中国比较医学杂志.2004
[9].叶华虎.山羊精子介导基因转移的实验研究[D].第叁军医大学.2003
[10].吴春旭.家蚕精子介导基因转移技术的研究[D].厦门大学.2002
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