嗜热甘露聚糖酶毕赤酵母工程菌的表达及该酶在果汁澄清中的应用

论文摘要

探究嗜热真菌Neosartorya sp. HBFH9中甘露聚糖酶NsMan5B的酶学性质及其在果汁加工中的应用潜力。本研究从菌株HBFH9中获得nsMan5B基因,该基因全长1 491 bp（2个内含子）,cDNA全长1 371 bp,编码456个氨基酸和1个终止密码子。NsMan5B酶分子由1个信号肽序列、碳水化合物结合序列、linker序列和催化区组成。重组NsMan5B的最适反应温度为60℃,最适反应pH 4.0,在pH 2.0～10.0和50℃条件下稳定。NsMan5B成熟蛋白分子质量约为49 kDa,不存在糖基化修饰。金属离子和化学试剂对该酶活性的影响差异较大,其中K+、Mg2+和Cu2+等离子对酶活性促进较明显,分别使酶活力提高了271%、123%和100%。随着醇类分子碳链的延长和浓度的增加,醇类物质对重组酶NsMan5B活性的抑制作用增强,其中在正丁醇体积分数为2.5%条件下,使该酶活性降低了86%。重组NsMan5B酶对柿子汁、苹果汁、桃子汁、葡萄汁和橘子汁澄清实验结果显示,除橘子汁外,重组酶对其他果汁的澄清度都有不同程度的提高,其中柿子汁澄清度提高了31.8%,其他3种果汁的澄清度分别提高7%、4%和4%。综上所述,甘露聚糖酶NsMan5B在果汁加工中具有较好的应用前景。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料与试剂
•   1.2 仪器与设备
•   1.3 方法
•     1.3.1 甘露聚糖酶基因的克隆
•     1.3.2 序列信息分析
•     1.3.3 重组菌株的构建
•     1.3.4 重组菌株诱导表达及十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE）分析
•     1.3.5 甘露聚糖酶酶学性质分析
•       1.3.5. 1 pH值对重组酶NsMan5B的影响
•       1.3.5. 2 温度对重组酶NsMan5B的影响
•       1.3.5. 3 金属离子和化学试剂对重组酶NsMan5B活性的影响
•       1.3.5. 4 重组酶NsMan5B动力学参数测定
•     1.3.6 重组酶NsMan5B在果汁澄清中的应用
•   1.4 数据分析及处理
• 2 结果与分析
•   2.1 nsMan5B基因序列分析
•   2.2 重组菌nsMan5B基因诱导表达及产物的SDS-PAGE分析
•   2.3 重组酶NsMan5B酶学特性分析
•   2.4 金属离子和化学试剂对重组酶活力的影响及动力学参数测定
•   2.5 重组甘露聚酶NsMan5B对5种果汁澄清品质的影响
• 3 讨论
• 4 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 陈伟,谷新晰,黄蕾,李晨,田洪涛,卢海强

关键词: 甘露聚糖酶,果汁澄清,异源表达,食品酶,嗜热酶

来源: 食品科学 2019年22期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学

专业: 生物学,轻工业手工业

单位: 河北农业大学食品科技学院

基金: 国家自然科学基金青年科学基金项目(31501417),河北省食品科学与工程学科“双一流”建设资金项目(2016SPGCA18)

分类号: TS255.44;Q789

页码: 81-87

总页数: 7

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