耐热α-半乳糖苷酶的高效表达及酶学性质初探

论文摘要

[目的]实现耐热α-半乳糖苷酶在毕赤酵母中的高效表达,并初步研究其酶学性质。[方法]克隆来源于埃默森篮状菌（Talaromyces emersonii）的α-半乳糖苷酶基因TEgal,构建p AO815-TEgal重组表达载体,采用DNS法测定其水解活性及酶学性质;通过薄层层析研究其水解底物谱;并构建TEgal基因多拷贝表达框,实现了该基因的高效表达。[结果]TEgal对棉籽糖水解活性最高9. 5 U/m L,最适温度75℃,最适pH值3. 5; Na+、K+对TEgal有促进作用,Mg2+、Co2+、Mn2+、Ca2+、Fe2+、Zn2+均能抑制酶活,多拷贝重组表达菌株活性最高为22. 4 U/m L。[结论]成功构建耐热α-半乳糖苷酶高效表达菌株,通过提升基因剂量将酶活和蛋白含量提高了135%和356%。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 实验材料
•     1.1.2 试剂
•     1.1.3 仪器
•     1.1.4 培养基
•   1.2 方法
•     1.2.1 α-半乳糖苷酶TEgal重组子的构建
•     1.2.2 多拷贝毕赤酵母重组子的构建
•     1.2.3 毕赤酵母工程菌的诱导表达及活性测定
•     1.2.4 酶学性质分析
•     1.2.5 底物水解能力测定
•     1.2.6 多拷贝毕赤酵母重组子诱导表达
• 2 结果与分析
•   2.1 α-半乳糖苷酶TEgal重组子的构建
•   2.2 多拷贝重组子的构建
•   2.3 毕赤酵母工程菌pAO-TEgal的蛋白表达分析
•   2.4 α-半乳糖苷酶TEgal酶学性质分析
•   2.5 底物水解能力测定
•   2.6 多拷贝毕赤酵母重组子的诱导表达
• 3 讨论
• 4 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 蒋晓芳,周波,杨江科

关键词: 半乳糖苷酶,耐高温,多拷贝,高效表达,水解活性

来源: 生物技术 2019年02期

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 武汉轻工大学生物与制药工程学院

基金: 中国大洋矿产资源开发协会项目(“深海生物资源计划”,DY135-B2-07)

分类号: Q55

DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2019.02.0021

页码: 116-121+115

总页数: 7

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