代谢改造熊蜂生假丝酵母提高酸型槐糖脂产量

论文摘要

【目的】槐糖脂是一类生物表面活性剂,不仅具有常规表面活性剂所具有的增溶、乳化、润湿、发泡、分散、降低表面张力等通用性能,且对环境的耐受性极强。熊蜂生假丝酵母（Starmerella bombicola）能够发酵生产槐糖脂,但槐糖脂具有酸型、内酯型和乙酰化型等不同类型,结构多样,难以分离。本文拟通过代谢工程改造,构建高产酸型槐糖脂的熊蜂生假丝酵母工程菌株。【方法】利用潮霉素抗性基因构建了标记基因重复利用系统Rec-six基因编辑系统,在此基础上将合成内酯型槐糖脂的关键基因——内酯酶基因SBLE敲除获得一株只产酸型槐糖脂的工程菌株Δsble,进一步同源过量表达葡萄糖基转移酶基因UGTB并敲除过氧化物酶体膜转运蛋白编码基因PXA1,构建了高产酸型槐糖脂的酵母工程菌。【结果】与出发菌株相比,重组熊蜂生假丝酵母发酵油酸能够合成单一的酸型槐糖脂,而不再合成内酯型槐糖脂,同时酸型槐糖脂的产量由20 g/L提高到44 g/L,提高了2.1倍。【结论】通过敲除PXA1、SBLE和过表达UGTB来改造熊蜂生假丝酵母,能够有效提高重组菌的酸型槐糖脂产量,为发酵法生产酸型槐糖脂奠定了基础。

论文目录

• 1 材料和方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 菌株和质粒：
•     1.1.2 主要试剂和仪器：
•     1.1.3 培养基：
•   1.2 含潮霉素自弹出系统的敲除盒构建
•   1.3 基因的敲除及潮霉素标记基因的弹出
•   1.4 过表达质粒的构建及转化
•   1.5 qRT-PCR对熊蜂生假丝酵母m RNA转录水平分析
•   1.6 酵母菌株的发酵培养
•   1.7 重组菌株酸型槐糖脂含量的测定
• 2 结果和分析
•   2.1 含潮霉素自弹出系统的敲除质粒构建
•   2.2 基因缺失菌株的构建
•   2.3 UGTB基因的整合表达
•   2.4 菌株摇瓶发酵生长测定
•   2.5 重组菌株酸型槐糖脂含量测定
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 张疆睿,张利华,石依博,沈微,樊游,陈献忠

关键词: 熊蜂生假丝酵母,酸型槐糖脂,内酯酶,代谢工程

来源: 微生物学报 2019年11期

年度: 2019

分类: 基础科学,工程科技Ⅰ辑

专业: 生物学,有机化工,一般化学工业

单位: 江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室

基金: 江苏省自然科学基金(BK20171138)~~

分类号: TQ920.6;TQ423;Q78

DOI: 10.13343/j.cnki.wsxb.20180521

页码: 2094-2106

总页数: 13

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