六种核酸提取试剂盒对粪样中小鼠肝炎病毒核酸提取效率的比较

论文摘要

目的比较六种商品化试剂盒在小鼠粪便中提取小鼠肝炎病毒(MHV)RNA的效率,筛选出效率高、耗时短的核酸提取方法。方法采集感染MHV小鼠的新鲜粪便样本,分别用液氮研磨法、磁珠匀浆法以及PBS溶解离心法进行处理,通过同一核酸提取试剂盒比较病毒核酸提取效率,明确最佳样本前处理方法;之后,用6种试剂盒进行RNA提取,经反转录后进行TaqMan实时定量PCR检测,以Ct值评价6种试剂盒的提取效率,结合产物测序和血清抗体ELISA结果,筛选MHV的最佳核酸提取方法。结果对于粪便样本的前处理,液氮研磨法的RNA提取效率显著高于磁珠匀浆法。对于6种试剂盒的提取效果,TIANGEN DP422[总RNA浓度:(549.70±52.38) ng/μL,Ct值:(24.51±0.10)]核酸提取效率最高;TIANGEN SD101[总RNA浓度:(274.13±6.87) ng/μL,Ct值:(2.39±0.017)]和QIAGEN 52904[总RNA浓度:(288.13±15.11) ng/μL,Ct值:(2.40±0.012)]用时最短;XS VRL[总RNA浓度:(348.80±15.85) ng/μL,Ct值:(24.70±0.13)]操作最为方便。结论粪便样本前处理建议采用液氮研磨法。针对粪便中MHV RNA的提取,TIANGEN DP422提取效率最高,推荐用于小鼠肝炎病毒的分子生物学检测。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•   1.2 方法
•     1.2.1 引物与探针的设计:
•     1.2.2 样品的收集及前处理:
•     1.2.3 核酸提取:
•     1.2.4 实时荧光定量TaqMan-PCR检测:
•   1.3 统计方法
• 2 结果
•   2.1 样本前处理方法比较
•   2.2 6种试剂盒提取MHV核酸效率的比较
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 桂飞,杨伟伟,俞利平,戴方伟,杜江涛,宋晓明

关键词: 小鼠肝炎病毒,病毒提取,探针,实时荧光定量

来源: 实验动物科学 2019年01期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学,基础医学

单位: 杭州师范大学实验动物中心,浙江省医学科学院实验动物中心

基金: 浙江省科技计划项目(No.2015C37107,2016C37106),杭州市重大科技专项(No.20142013A62)

分类号: R373.21

页码: 31-35

总页数: 5

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