基于碘乙酸功能化树枝状聚合物的硫巯化肽段选择性富集新方法

论文摘要

蛋白质的硫巯化是一种重要的氧化翻译后修饰,在细胞衰老、内质网应激、血管舒张、细胞凋亡等过程中扮演重要角色。利用蛋白质组学技术表征硫巯化修饰具有十分重要的意义。该文发展了一种基于碘乙酸功能化的聚酰胺-胺树枝状聚合物（PAMAM-INS）,并结合滤膜辅助的样品预处理技术用于硫巯化肽段的富集（简称FADE策略）,利用FADE策略能从100倍质量干扰的牛血清白蛋白酶解产物中选择性地富集出硫巯化标准肽段。将细胞培养稳定同位素标记技术引入到FADE策略中,并将其应用于不同浓度梯度硫氢化钠刺激的SHSY5Y细胞硫巯化蛋白质组分析,共鉴定到163条硫巯化肽段。生物信息学的结果表明,硫巯化修饰可能在中枢神经系统中扮演着重要角色。

论文目录

• 1 实验部分
•   1.1 仪器与试剂
•   1.2 PAMAM-INS的合成
•   1.3 PAMAM-INS中碘乙酰基固载量的测定
•   1.4 硫巯化标准肽段的合成
•   1.5 标准蛋白BSA的酶解
•   1.6 FADE策略的抗干扰能力评价
•   1.7 SHSY5Y细胞的培养和蛋白质提取
•   1.8 eFADE策略用于SHSY5Y细胞中硫巯化肽段的选择性富集
•   1.9 MALDI-TOF MS分析
•   1.10 Nano-RPLC-ESI-MS/MS分析及数据处理
•   1.11 生物信息学分析
• 2 结果与讨论
•   2.1 PAMAM-INS的制备及FADE策略的建立
•   2.2 PAMAM-INS的红外光谱表征
•   2.3 PAMAM-INS中碘乙酰基固载量的测定
•   2.4 FADE策略抗干扰能力的评价
•   2.5 eFADE策略用于实际样品中硫巯化肽段的鉴定
•   2.6 生物信息学分析
• 3 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 吴琼,袁辉明,翁叶靖,随志刚,张晓丹,胡晔晨,梁振,张丽华,张玉奎

关键词: 选择性富集,滤膜辅助,蛋白质组学分析,硫巯化修饰,聚酰胺胺

来源: 色谱 2019年08期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学

专业: 生物学

单位: 中国科学院分离分析化学重点实验室中国科学院大连化学物理研究所,中国科学院大学

基金: 国家自然科学基金项目(91543201,91753110)~~

分类号: Q51

页码: 836-844

总页数: 9

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