单宁酸对雄性布氏田鼠生殖腺细胞自噬的影响

论文摘要

研究表明抗氧化剂会影响动物细胞自噬相关蛋白的表达,生殖细胞自噬的变化会影响动物的繁殖性能。单宁酸（Tannic acid,TA）属于水解单宁,大量研究证实TA具有抗氧化功能,但TA的抗氧化性是否会影响动物生殖细胞自噬进而影响动物的繁殖至今鲜有报道。本论文以雄性布氏田鼠为研究对象,在其出生28天后,以不同浓度的TA溶液（0 mg·mL-1、3 mg·mL-1和6 mg·mL-1,分别为对照组、低剂量组和高剂量组）处理至8周龄和13周龄。隔天称量动物摄食量,每周记录动物体重。用酶联免疫吸附（Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）测定血清超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathione peroxidase,GSH-Px）和过氧化氢酶（Catalase,CAT）的活性,丙二醛（Malondialdehyde,MDA）、睾酮（Testosterone,T）、卵泡刺激素（Follicle-stimulating hormone,FSH）与黄体生成素（Luteinizing hormone,LH）的含量。光学显微镜下观察睾丸组织结构变化并统计附睾精子浓度、死亡率和畸形率。实时荧光定量PCR（Real-time quantitative PCR,RT-qPCR）检测雄性布氏田鼠睾丸组织中自噬相关蛋白的基因LC3,Beclin1 和p62mRNA的表达,免疫组化（Immunocytochemistry,IHC）检测雄性布氏田鼠睾丸组织中自噬相关蛋白LC3,Beclin1和p62（分别在自噬的起始,延伸和降解阶段发挥重要作用）的表达,同时采用透射电镜（Transmission electron microscopy,TEM）观察睾丸组织内部的自噬状况。探讨TA对雄性布氏田鼠抗氧化功能、生殖腺自噬和生殖腺功能的影响,丰富动植物间的协同进化理论。研究表明:1、高剂量TA处理至13周龄,雄性布氏田鼠摄食量和体重均较对照组显著增加,其他各组间未见显著差异。2、与对照组相比,低剂量TA处理雄性布氏田鼠至8周龄和13周龄,血清SOD,GSH-Px和CAT的酶活性均显著增加;处理至8周龄,高剂量组三种抗氧化物酶活性显著下降,继续处理至13周龄三种抗氧化物酶活性显著上升;TA处理组血清中MDA的含量较对照组均呈下降趋势,且高剂量组存在统计学差异。表明TA可以作为抗氧化剂提高雄性布氏田鼠的抗氧化能力。3、TEM观察发现,高剂量TA导致8周龄雄性布氏田鼠的精子损伤明显,13周龄雄性布氏田鼠的精子畸形比率上升。从分子水平进一步检测自噬程度,RT-qPCR结果表明:低剂量TA降低雄性布氏田鼠起始和延伸阶段自噬相关基因的表达,处理至13周龄发现,起始阶段的自噬基因显著增加;高剂量组较低剂量组各基因表达均有所上升,但未见显著差异;降解阶段自噬基因的表达未见异常。免疫组化结果也表明,低剂量TA降低自噬起始阶段自噬相关蛋白的表达,高低剂量TA提高自噬起始阶段自噬相关蛋白的表达;延伸阶段的主要蛋白未见显著差异,但自噬相关蛋白的表达存在高剂量组升高,低剂量组降低的趋势;分解蛋白的表达也无明显积累,表明TA并未导致雄性布氏田鼠生殖腺自噬功能障碍,但具有一定的调控作用。4、TA会提高雄性布氏田鼠的性腺指数,处理至13周龄发现,增加TA剂量,性腺指数随之上升;HE染色结果表明,高剂量TA会破坏8周龄雄性布氏田鼠睾丸组织结构组织;低剂量TA提高精子浓度,降低死亡率和畸形率,高剂量组处理至8周龄,其精子死亡率和畸形率显著上升;生殖相关激素的结果也表明,低剂量TA提高雄性布氏田鼠生殖相关激素的水平。综上所述,低剂量TA可以增加8周龄和13周龄雄性布氏田鼠生殖相关激素、睾丸和附睾指数、附睾精子浓度,降低精子畸形率和死亡率;同时低剂量TA也增加8周龄和13周龄布氏田鼠的抗氧化能力,降低其生殖腺细胞自噬水平。因此在一定的剂量范围内,TA可以通过影响布氏田鼠生殖腺抗氧化能力和细胞自噬水平提高布氏田鼠的生殖腺功能。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 缩略语词汇表
• 1 文献综述
•   1.1 植物单宁
•     1.1.1 植物单宁影响动物繁殖
•     1.1.2 植物单宁影响动物细胞自噬
•   1.2 细胞自噬
•     1.2.1 细胞自噬的定义及分类
•     1.2.2 细胞自噬的形成及过程
•     1.2.3 细胞自噬的检测
•   1.3 布氏田鼠
• 2 研究目的与意义
• 3 研究方法
•   3.1 实验动物筛选与分组
•   3.2 常用仪器
•   3.3 试剂购买
•   3.4 试剂配置
•   3.5 实验流程
•     3.5.1 ELISA实验
•     3.5.2 RT-qPCR实验
•     3.5.3 免疫组化实验
•     3.5.4 HE染色及附睾精子计数
•     3.5.5 TEM观察实验
•   3.6 数据分析说明
• 4 结果
•   4.1 TA影响雄性布氏田鼠摄食量和体重
•   4.2 TA影响雄性布氏田鼠抗氧化性能
•   4.3 TA影响雄性布氏田鼠睾丸组织中细胞超微结构自噬
•     4.3.1 8周龄雄性布氏田鼠睾丸组织中细胞超微结构自噬的变化
•     4.3.2 13周龄雄性布氏田鼠睾丸组织中细胞超微结构自噬的变化
•   4.4 TA影响雄性布氏田鼠睾丸组织自噬相关基因转录水平
•   4.5 TA影响雄性布氏田鼠睾丸组织自噬相关蛋白表达水平
•   4.6 TA影响雄性布氏田鼠的生殖腺功能
•     4.6.1 生殖腺指数的变化
•     4.6.2 睾丸组织结构的变化
•     4.6.3 附睾精子质量的变化
•     4.6.4 生殖相关激素的变化
• 5 讨论
• 6 结论
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 攻读学位期间论文发表和参加课题情况

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 周玲玉

导师: 杨生妹,戴鑫

关键词: 单宁酸,布氏田鼠,抗氧化,自噬,性腺

来源: 扬州大学

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 扬州大学

分类号: Q492

DOI: 10.27441/d.cnki.gyzdu.2019.000843

总页数: 66

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