一种强力霉素诱导型白念珠菌基因敲除与筛选标记再循环工具包（英文）

论文摘要

【目的】在白念珠菌中建立一个快捷方便经济的基因敲除与筛选标记再循环的DNA操作系统。【方法】通过ExoIII介导的不依赖于连接酶的克隆策略,在异源筛选标记基因CmLEU2、CdHIS1和CdARG4基因的两侧分别插入了loxP位点,成为筛选标记基因盒扩增的模板。全基因合成了经过白念珠菌密码子优化的rTetR元件,并组装成Tet-on启动子。将密码子优化的重组酶Cre基因置于该启动子控制下。然后将他们插入筛选标记基因CdHIS1和CdARG4的CDS区域,形成筛选标记基因再循环载体。【结果】构建了3个用于白念珠菌基因敲除的侧翼含有loxP位点的筛选标记基因载体,以及2个含有Tet-on启动子控制的Cre酶的载体用于筛选标记基因的再循环。【结论】成功构建了一个白念珠菌中可诱导的基因敲除和筛选标记再循环的载体系统并成功应用于多个基因缺失株构建。这个系统有助于快速构建白念珠菌的单基因和多基因敲除菌株。

论文目录

• 1 Materials and Methods
•   1.1 Strains and growth conditions
•   1.2 Plasmid construction and PCR conditions
•   1.3 Primers
•   1.4 C.albicans transformation and mutant validation
• 2 Results
•   2.1 Components and strategy for marker cassettes amplification
•   2.2 Components and concepts for marker recycling
•   2.3 A detailed protocol for this approach
•   2.4 Gene deletions using the Tet-on promoter controlled Cre/loxP system
• 3 Discussion

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 常鹏,尹华,王文娟,陈江野

关键词: 白念珠菌,基因敲除,筛选标记再循环

来源: 微生物学报 2019年01期

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 西南大学资源环境学院生物能源与环境修复研究中心,中国科学院上海生物化学与细胞生物学研究所

基金: Supported by the Fundamental Research Funds for the Central Universities(XDJK2017C083),by the Chongqing Postdoctoral Science Foundation(Xm2017023)~~

分类号: Q78

DOI: 10.13343/j.cnki.wsxb.20180071

页码: 68-78

总页数: 11

文件大小: 839K

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