沙粒病毒聚合酶C端的表达纯化与结晶条件筛选

论文摘要

拉沙病毒和马秋波病毒同属于沙粒病毒科,人类感染后病死率很高,对人类生命健康造成了严重威胁。沙粒病毒在基因组转录过程中存在与其他分节段负链RNA病毒相似的抢帽机制,位于病毒聚合酶N端的核酸内切酶结构域负责切割宿主mRNA,而其C端负责结合宿主mRNA帽子。目前对哺乳动物沙粒病毒聚合酶C端的特征知之甚少。为此构建了拉沙病毒和马秋波病毒聚合酶C端的重组表达载体,并利用E. coli原核系统进行表达和后续纯化,获得了不同聚体形式的C端蛋白,通过分析超速离心实验和负染电镜观察对其不同的聚体形式进行了表征。最后通过大量筛选结晶条件,得到了拉沙病毒聚合酶C端的晶体,为进一步研究其三维结构和功能机制奠定了基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•   1.2 方法
•     1.2.1 重组表达载体构建
•     1.2.2 重组蛋白诱导表达
•     1.2.3 重组蛋白质纯化与鉴定
•     1.2.4 重组蛋白性质分析
•     1.2.5 重组蛋白结晶条件筛选
• 2 结果与讨论
•   2.1 重组表达载体构建
•   2.2 重组菌株的诱导表达
•   2.3 重组蛋白纯化与鉴定
•   2.4 重组蛋白性质分析
•   2.5 重组蛋白结晶条件筛选
• 3 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 景佳美,徐欣,王敏,彭如超,施一

关键词: 拉沙病毒,马秋波病毒,聚合酶端,表达纯化,结晶

来源: 中国生物工程杂志 2019年12期

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 中国科学院微生物研究所,中国科学院大学存济医学院

基金: 中国科学院战略性先导科技专项(B类)(XDB29010000),中国科学院青年促进会项目(2015078)资助项目,国家科技重大专项(2018ZX10101004),国家自然科学基金优秀青年科学基金(81622031)

分类号: Q936

DOI: 10.13523/j.cb.20191203

页码: 18-23

总页数: 6

文件大小: 2910K

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