黄瓜绿斑驳花叶病毒辽宁营口分离物基因组测定及分段基因克隆

论文摘要

黄瓜绿斑驳花叶病毒Cucumber green mottle mosaic virus（CGMMV）是葫芦科作物的重要检疫性病毒。本研究以田间自然感病的西瓜叶片为试材,采用RT-PCR获得该病毒（CGMMV-LNYK）基因组全长（登录号MG745849）,以pBluescriptⅡSK（-）为载体,分别克隆其所编码的4段基因,并采用人工接种验证它们的体外侵染活性。结果表明:该病毒与韩国分离物KW（登录号AF417242）亲缘关系最近,相似度达99.8%,并成功克隆了CGMMV-LNYK编码的4段基因,分别记为RNA1～RNA4。经人工接种,发现RNA1和RNA4能侵染葫芦,表现明显花叶症状,与该病毒接种葫芦症状一致,且接种RNA1后的症状较RNA4明显,4种RNA混合接种症状最为明显,经RT-PCR检测,发病植株可扩增到与接种的RNA大小相等的片段。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 供试毒原及载体
•     1.1.2 试剂
•     1.1.3 引物的设计与合成
•   1.2 方法
•     1.2.1 RT-PCR扩增
•     1.2.2 病毒的提纯和电镜观察
•     1.2.3 基因克隆
•     1.2.4 体外转录
•     1.2.5 体外侵染
• 2 结果与分析
•   2.1 CGMMV全基因序列的测定
•     2.1.1 RNA的提取与检测
•     2.1.2 RT-PCR检测及全基因组序列测定
•   2.2 CGMMV-LNYK分段基因克隆
•     2.2.1 CGMMV的提取及病毒总RNA的提取
•     2.2.2 RT-PCR扩增结果
•     2.2.3 重组载体的构建
•   2.3 体外转录
•     2.3.1 酶切产物回收
•     2.3.2 体外转录产物电泳检测
•   2.4 体外侵染
•     2.4.1 症状观察
•     2.4.2 RT-PCR检测
• 3 结论与讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 李立梅,毛赫,左彤彤,赵秀香,刘庆珍,吴元华

关键词: 黄瓜绿斑驳花叶病毒,基因组全长,克隆

来源: 植物保护 2019年03期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,植物保护

单位: 吉林省林业科学研究院,沈阳农业大学植物保护学院

基金: 辽宁省科技攻关项目(2006215003)

分类号: S432.41

DOI: 10.16688/j.zwbh.2018222

页码: 60-66

总页数: 7

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