导读:本文包含了特异性片段论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:特异性,法医,病理学,基因,线粒体,片段,绵羊。
特异性片段论文文献综述
李秀义,高冬梅,张守柱,潘继文,温和[1]（2019）在《风疹病毒E1抗原特异性片段在酵母系统中重组表达及应用》一文中研究指出目的 利用真核系统对E1蛋白进行表达并纯化,建立一种以重组E1蛋白为包被抗原的风疹病毒抗体ELISA检测方法。方法 通过生物信息学预测E1优势抗原表位,根据真核系统表达的特点进行序列优化,全基因合成获得风疹病毒E1优势片段核酸序列,构建真核表达载体,在真核系统内进行诱导表达并纯化,用Western blot证实E1蛋白的抗原性。建立ELISA检测系统,并初步检测100份临床血清标本。结果 SDS-PAGE证实重组E1蛋白在酵母中高表达,Western blot证实该E1蛋白具有良好的抗原性,成功建立了检测IgM间接ELISA方法,对临床血清标本的初步检测显示该试剂盒具有较好的敏感性和特异性。结论 本ELISA检测试剂有较高敏感性和较强的特异性,可进一步开发用于检测风疹病毒的早期感染的试剂盒。(本文来源于《安徽医科大学学报》期刊2019年08期）
袁文勇,汤晓蕙,周顺平,俞卫东[2]（2018）在《藻类rDNA特异性片段长度多态性在溺死鉴定中的应用》一文中研究指出目的通过检验水体和人体器官中硅藻核糖体DNA(rDNA) 5.8S部分序列、第二内转录间隔区(second internal transcribed spacer,ITS2)序列(5.8S+ITS2)的长度多态性差异,判断溺水死亡案件中受害人的落水地点以及受害人系生前落水还是死后被抛尸入水。方法以南京市公安局法医中心受理的2例硅藻检验鉴定案例为对象,利用5.8S+ITS2分子标记的长度多态性,分析藻类生物在水体、人体组织中种群结构的差异。结果案例1中,在受害人肺、肝组织和水体样本中均检出种类相近的硅藻,利用5.8S+ITS2分子标记在死者肺组织和水体样本中均检出330 bp和376 bp两种DNA片段,确定受害人系生前溺水。案例2中,在死者肺、肝组织中均未检出硅藻,利用5.8S+ITS2分子标记在死者肺组织中仅获得1条DNA片段,长度为331 bp,相对荧光单位值非常低,确定受害人系死后抛尸入水。结论本方法检验两案例的实验结果符合实际案情和硅藻镜检的结论,利用5.8S+ITS2分子标记研究水体和人体组织中特定微生物的种群结构差异,从而判断溺水死亡的落水地点以及受害人系生前落水还是死后被抛尸入水等问题具有可行性。(本文来源于《法医学杂志》期刊2018年05期）
桂子昌,李猛,张晓东[3]（2018）在《滇龙胆GrDXR基因特异性片段的克隆》一文中研究指出GrDXR基因功能分析是揭示滇龙胆中MEP途径的基础,试验提取滇龙胆总RNA,通过RT-PCR技术进行进行扩增,所获得片段连接T载体后,进行测序,并进行序列分析。结果获得了279 bp的基因片段,将测序结果与原基因序列进行比对,确认序列为GrDXR基因特异片段,为阐明其基因功能奠定基础。(本文来源于《天津农业科学》期刊2018年03期）
李鹏[4]（2016）在《PCR技术检测藻类16SrDNA特异性片段在溺死诊断中的应用》一文中研究指出目的溺死(drowning)是机械性窒息导致死亡的原因之一,由于液体媒介阻塞呼吸道(鼻和口)而引起的机体缺氧,二氧化碳潴留,最终因窒息死亡的过程。我国河道水网密集,在水中发现的尸体较多,广州地区每年在水中发现的尸体就可达上千具。而水中发现的尸体死亡原因可能有多种,如属于意外溺水死亡,也可能是自杀、他杀、死后抛尸入水伪造意外溺水死亡的刑事案件。因此,确定水中尸体是否是溺死是解决上述问题的关键。目前,国内外对判断水中尸体是否为溺死的方法一般根据尸表检查、尸体解剖以及相关实验室检查、硅藻检验等综合分析结果的基础上做出的判定。其中硅藻检验在溺死的诊断中一直被认为是诊断溺死不可缺少的方法,尤其是在有些案例中,由于外界因素的综合作用下,导致尸体腐败甚至白骨化,溺死征象的消失,尸表检查、尸体解剖等工作对于诊断溺死往往不能奏效,此时硅藻检验可为诊断水中尸体是否为溺死诊断提供有力的证据。随着法医学者对溺死诊断研究的深入,硅藻检验经过改良和发展,目前方法有很多种,包括提取硅藻时脏器消化方法的不同,分为化学消化法、物理消化法,以及硅藻提取后观察方法的不同包括多种类形态学观察方法,如光镜、电镜观察方法等,硅藻检验的形态学观察主要步骤是对水中尸体脏器样本进行不同的方法处理后通过离心或滤膜富集的方法收集硅藻,经过光镜或电镜直接观察硅藻的形态与种类来辅助诊断溺死及溺死地点。硅藻检验中最经典且使用范围最广泛的方法即是强酸消化法,因其所需设备经济,操作简单,易于普及,在许多基层单位得以使用,但此种方法的局限性是对脏器中的硅藻破坏性较大,在操作的过程中由于强酸加热沸腾较为危险,而且硅藻富集的离心过程中损失了一些体积较小的硅藻,操作环境开放,易污染,容易导致假阴性、假阳性结果。为弥补溺死尸体脏器中硅藻检验方法存在上述的不足,本课题组在前期建立的微波消解-真空抽滤-自动电镜扫描法大大增加了硅藻检验的特异性及灵敏度,操作安全,检材消解效率高,若对硅藻检验进行定量与定性分析可进行溺死地点的推断,在溺死诊断中已发挥重要作用。但同时该方法在强酸消化、微波消解的过程中破坏了缺少硅质外壳保护的蓝藻、绿藻等藻类,这些藻类经过研究证实同样存在溺死尸体脏器中,属于溺死相关藻类。近年来,除上述对硅藻进行形态学检查方法有所发展外,一些法医学者为给溺死诊断提供快速、灵敏的方法,分子生物学方法应用到溺死诊断中成为研究热点,有报道称使用针对在水域中存在且分布广泛绿藻、蓝藻等藻类基因的特异性引物来进行溺死诊断的研究,同时也有研究使用针对硅藻基因的特异性引物来检测溺死尸体脏器中的硅藻来诊断溺死。如1996年,Kane[1]等人使用针对单一门类的超微浮游生物蓝藻的引物来诊断溺死；2003年,Abe等使用针对编码硅藻EG1、EG2, SKI、SK2蛋白基因的特异性引物来诊断溺死；2013年,Tie J[3]等人使用针对蓝藻的16SrDNA片段特异性引物诊断溺死；2014年,余政梁[4]等人使用检测硅藻的SSU基因特异性引物来诊断溺。目前,上述使用PCR技术检测藻类DNA特异性片段的相关报道大多使用针对一种门类的藻类特异性引物来诊断溺死,不能同时扩增多种与溺死相关藻类(如硅藻、蓝藻、绿藻等)。本研究主要通过酶消化法联合MoBio强力土壤DNA提取试剂盒(PowerSoilTM DNA Isolation Kit)提取藻类DNA,可直接用于下游实验；选用针对蓝藻、硅藻、绿藻等多种藻类特异性引物,扩增藻类16SrDNA中V3,V4区特异性片段,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳及PCR产物测序,验证引物特异性。微波消解-真空抽滤-电镜扫描法是一种可靠的灵敏度高、特异性强的硅藻形态学检验方法,检测溺死样本具有较高的阳性率,但在检验的过程中破坏了蓝藻、绿藻的溺死相关藻类。本研究使用针对多种随溺液进入体循环的溺死相关藻类16SrDNA的特异性引物,检测微波消解-真空抽滤-电镜扫描法检测过的案例样本,并与微波消解-真空抽滤-电镜扫描法检测结果作比较,希望通过联合使用两种方法在水中尸体样本中发现多种溺死相关藻类,为溺死诊断提供新的思路。本研究同时应用毛细管电泳检测溺死相关藻类16SrDNA基因,由于毛细管电泳法应用广泛、操作简单,在溺死鉴定中易普及推广,希望为溺死诊断提供一种新方法。方法实验材料(1)实验动物样本35只实验兔随机分为3组：生前入水组(溺死组)15只,死后入水组(空气栓塞致死后入水)15只,以及对照组(空气栓塞死后不作处理)5只；(2)水中尸体样本共64份包括20例微波消解-真空抽滤-自动电镜扫描法检测水中尸体硅藻阳性样本(58份样本,其中肺脏、肝脏、肾脏样本分别为18、20、20份),6份微波消解-真空抽滤-自动电镜扫描法检验的水中尸体阴性肝脏样本,同时记录案例样本的腐败程度。(3)引物特异性验证样本7种已知溺死相关的藻类(直链藻、菱形藻、针杆藻、舟形藻,铜绿微囊藻,小环藻,小球藻)及白色念珠菌(真菌)、肉毒梭状芽孢杆菌(细菌)样本,人基因组DNA、兔基因组DNA,用于验证引物特异性。DNA提取使用酶消化法与PowerSoilTM DNA Isolation Kit试剂盒提取组织样本(实验兔、人体案例组织),水样中的藻类DNA及引物特异性验证样本DNA。PCR产物的检测及检验方法的比较(1)使用PCR-聚丙烯酰氨凝胶电泳法(PCR-PAGE)检测各组实验兔脏器中溺死相关藻类DNA,比较3组实验兔各脏器之间藻类检出率(2)使用PCR-毛细管电泳法(PCR-CE)检测溺死组实验兔脏器中溺死相关藻类,比较PCR-PAGE与PCR-CE两种方法在检测溺死组实验兔PCR产物阳性率,记录并比较两种电泳方法检测PCR产物电泳过程中电泳前准备时间、电泳后结果分析时间,同时比较两种方法检测PCR产物的各自特点；(3)PCR-CE检测收集的微波消解-真空抽滤-电镜扫描法检测的水中尸体脏器硅藻阳性样本共58份,6份水中尸体硅藻阴性肝脏样本,同时记录每份样本中硅藻数量,将PCR-CE法与微波消解法结果进行比较。结果实验兔样本结果：PCR-PAGE法检测3组实验兔生前入水组肺检出率最高,肝、肾检出率次之,分别为100%,86%,86%；实验兔死后入水组肺、肝、肾检出率分别为13%,O%,0%；对照组肺、肝、肾藻类未检出。PCR-PAGE法检测生前入水组与死后入水组各种脏器中藻类检出率经统计学检验差异显着(P<0.05)。PCR-CE法检测溺死组实验兔肺脏、肝脏、肾脏藻类检出率分别为100%,86%,86%,PCR-PAGE与PCR-CE法检测溺死组实验兔结果相比,两者在肺脏、肝脏、肾脏之间具有相同的阳性率,不具统计学意义(P>0.05)；PCR-CE法与PCR-PAGE法检测PCR产物在电泳前准备用时及电泳结果后分析用时相比,明显少于PAGE电泳法(P<0.05),且操作更加方便、简洁,处理多份样本有较好优势,结果容易储存。水中尸体样本藻类检出率结果：PCR-CE法检测经微波消解-真空抽滤-电镜扫描法检测过的20例共58份水中尸体硅藻阳性样本藻类检出率分别为：肺脏检出率最高为100%,肝,肾次之,分别为60%,60%。PCR-CE法在肾脏、肝脏样本的藻类检出率与微波消解-真空抽滤-电镜扫描法(肺、肝、肾均为100%)相比,两种方法阳性率比较具有统计学差异(P<0.05),即微波消解-真空抽滤-电镜扫描法阳性率明显高于PCR-CE法,其中PCR-CE法检测腐败程度较高的肝脏、肾脏样本中不易检出藻类DNA；两种方法在肺脏之间藻类检出率不具有统计学差异(P>0.05)；通过对PCR-CE法检测的部分阳性样本进行测序表明,在硅藻含量较少的一些样本中同时存在蓝藻。PCR-CE法检测微波消解-真空抽滤-电镜扫描法检测后6份硅藻检验为阴性样本1份新鲜检材藻类检测为阳性,测序结果显示为蓝藻。引物特异性检测结果：PAGE法检测7种溺死相关藻类DNA(直链藻、菱形藻、针杆藻、舟形藻,铜绿微囊藻,小环藻,小球藻)检测结果为阳性；检测人基因组DNA、兔基因组DNA,白色念珠菌(真菌)DNA,肉毒梭状芽孢杆菌(细菌)DNA均为阴性。结论实验兔结果表明PCR-PAGE法检测溺死相关藻类16SrDNA基因片段可以区分生前入水和死后入水；2例死后入水组实验兔肺脏中检测结果为阳性可能由于水的压力作用下经呼吸道进入肺脏中所致,因此只有肺脏中含有藻类时,对于进行溺死诊断要谨慎。PCR-PAGE与PCR-CE法检测溺死实验兔结果相比,虽然两者具有相同的阳性率,但实验过程中PCR-CE法与PCR-PAGE法检测PCR产物相比,电泳前准备时间及电泳后结果分析时间均较为省时,且操作更加方便、简洁,结果容易储存等优点,对于处理多份样本有较好的优势。对20例水中尸体样本研究结果表明,较新鲜的检材使用PCE-CE法检测溺死相关藻类易检出,而腐败较为严重的检材不易检出,导致本方法检测案例尸体脏器样本中肝脏、肾脏中的藻类检出率低于微波消解-真空抽滤-电镜扫描法。使用PCE-CE法检测水中尸体案例样本研究表明,对一些水中尸体案例样本中硅藻检测数量含量较少(通过微波消解-真空抽滤-电镜扫描法检测记录脏器中硅藻数量)的样本,也含有其它的溺死相关藻类如蓝藻(通过对PCR-CE法检测为阳性的样本进行产物测序)。因此,通过PCR技术检测多种溺死相关藻类同时联合微波消解-真空抽滤-电镜扫描法检验硅藻,有望为溺死的诊断提供可靠的信息,为溺死诊断提供新思路。(本文来源于《南方医科大学》期刊2016-05-03）
晏华春,马晓燕,刘艳芳,依明·苏来曼[5]（2015）在《PCR方法扩增种属特异性片段检测牛羊肉成分》一文中研究指出为建立市场上各种熟肉制品成分的检测方法,利用PCR方法比对牛、鸡、羊、猪的DNA基因组序列,确定了针对4种常见肉类的特异性检测引物。结果表明:获得的引物具有特异性强的特点,建立的PCR检测方法样品用量少、结果准确,适合应用于特异性检测。(本文来源于《中国草食动物科学》期刊2015年04期）
李鹏,徐曲毅,陈玲,刘超,赵建[6]（2015）在《检测藻类16SrDNA特异性片段在溺死诊断中的应用》一文中研究指出目的建立藻类16Sr DNA特异性片段扩增方法,探讨其在溺死诊断中的应用价值。方法 35只实验兔随机分组:生前入水组(溺死组)15只,死后入水组(空气栓塞致死后入水)15只,对照组(空气栓塞死后不作处理)5只;微波消解-真空抽滤-电镜扫描法检测过的20例水中尸体肝脏样本20份(硅藻阳性14份,阴性6份)。7种已知藻(直链藻、菱形藻、针杆藻、舟形藻,铜绿微囊藻,小环藻,小球藻)作为对照。提取组织样本及藻类DNA,扩增产物银染显带。结果生前入水组肺、肝、肾检出率分别为100%,86%,86%;死后入水组肺、肝、肾检出率分别为13%,0%,0%。对照组肺、肝、肾藻类未检出。生前入水组与死后入水组各种脏器中藻类检出率差异显着(P<0.05)。20份经微波消解-真空抽滤-电镜扫描法检测的水中尸体肝脏样本中,使用本方法15份样本结果为阳性(包括1份硅藻阴性样本)。7种藻类DNA扩增结果为阳性。结论本文所建立的PCR法检测藻类16Sr DNA灵敏度高,可对多种溺死藻类同时检测,有较好的应用前景。(本文来源于《南方医科大学学报》期刊2015年08期）
杜春红,王鹏,Tiffany,CHo,张建中,宋志忠[7]（2012）在《鼠疫菌caf1基因特异性片段的克隆表达及其抗原与抗体反应》一文中研究指出目的克隆表达鼠疫菌caf1基因上的特异性片段并检测。方法分别选取F1上C端(caf1-C)及N端(caf1-N)两段B细胞表位进行克隆表达;PCR扩增目的基因,并与表达质粒pET32a(+)进行连接,重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3)并诱导表达;表达产物经NiNTA亲和层析柱纯化,并以Westernblot法检测其抗原与抗体反应。结果分别诱导表达出大小为26000的Caf1-C和25000的Caf1-N两个片段,2个重组蛋白均以可溶形式存在,并与鼠疫免疫血清有良好的反应。结论克隆表达出具有抗原与抗体反应的鼠疫菌F1抗原上的两段B细胞表位,为鉴定是否是F1位点交叉奠定了基础。(本文来源于《中国媒介生物学及控制杂志》期刊2012年06期）
游荷花,沈敬华[8]（2012）在《Myo5a特异性片段原核表达重组质粒的构建》一文中研究指出为了构建Myo5a特异性片段的原核表达重组质粒PGEX-4T-3/Myo5a,采用PCR扩增出Myo5a基因特异性片段的蛋白编码序列,经BamH I和Xho I双酶切后,将片段插入原核表达载体pGEX-4T-3,构建重组子PGEX-4T-3/Myo5a。最后重组质粒PGEX-4T-3/Myo5a经鉴定完全正确。(本文来源于《山西农业大学学报(自然科学版)》期刊2012年05期）
陈睿赜,张英杰,刘月琴[9]（2012）在《绵羊线粒体DNA细胞色素B基因特异性片段PCR反应条件优化》一文中研究指出根据绵羊线粒体DNA的序列设计引物,试用PCR扩增细胞色素b基因的一段序列,退火温度、Mg~(2+)浓度对扩增体系没有影响,只有引物浓度对扩增产物有影响,说明引物的特异性和灵敏性较好,可初步用作绵羊的种属鉴别。(本文来源于《中国畜牧兽医学会养羊学分会2012年全国养羊生产与学术研讨会议论文集》期刊2012-08-25）
陈睿赜,张英杰,刘月琴[10]（2012）在《绵羊线粒体DNA细胞色素B基因特异性片段PCR反应条件优化》一文中研究指出根据绵羊线粒体DNA的序列设计引物,试用PCR扩增细胞色素b基因的一段序列,退火温度、Mg~(2+)浓度对扩增体系没有影响,只有引物浓度对扩增产物有影响,说明引物的特异性和灵敏性较好,可初步用作绵羊的种属鉴别。(本文来源于《中国草食动物科学》期刊2012年S1期）
特异性片段论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的通过检验水体和人体器官中硅藻核糖体DNA(rDNA) 5.8S部分序列、第二内转录间隔区(second internal transcribed spacer,ITS2)序列(5.8S+ITS2)的长度多态性差异,判断溺水死亡案件中受害人的落水地点以及受害人系生前落水还是死后被抛尸入水。方法以南京市公安局法医中心受理的2例硅藻检验鉴定案例为对象,利用5.8S+ITS2分子标记的长度多态性,分析藻类生物在水体、人体组织中种群结构的差异。结果案例1中,在受害人肺、肝组织和水体样本中均检出种类相近的硅藻,利用5.8S+ITS2分子标记在死者肺组织和水体样本中均检出330 bp和376 bp两种DNA片段,确定受害人系生前溺水。案例2中,在死者肺、肝组织中均未检出硅藻,利用5.8S+ITS2分子标记在死者肺组织中仅获得1条DNA片段,长度为331 bp,相对荧光单位值非常低,确定受害人系死后抛尸入水。结论本方法检验两案例的实验结果符合实际案情和硅藻镜检的结论,利用5.8S+ITS2分子标记研究水体和人体组织中特定微生物的种群结构差异,从而判断溺水死亡的落水地点以及受害人系生前落水还是死后被抛尸入水等问题具有可行性。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
特异性片段论文参考文献
[1].李秀义,高冬梅,张守柱,潘继文,温和.风疹病毒E1抗原特异性片段在酵母系统中重组表达及应用[J].安徽医科大学学报.2019
[2].袁文勇,汤晓蕙,周顺平,俞卫东.藻类rDNA特异性片段长度多态性在溺死鉴定中的应用[J].法医学杂志.2018
[3].桂子昌,李猛,张晓东.滇龙胆GrDXR基因特异性片段的克隆[J].天津农业科学.2018
[4].李鹏.PCR技术检测藻类16SrDNA特异性片段在溺死诊断中的应用[D].南方医科大学.2016
[5].晏华春,马晓燕,刘艳芳,依明·苏来曼.PCR方法扩增种属特异性片段检测牛羊肉成分[J].中国草食动物科学.2015
[6].李鹏,徐曲毅,陈玲,刘超,赵建.检测藻类16SrDNA特异性片段在溺死诊断中的应用[J].南方医科大学学报.2015
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[8].游荷花,沈敬华.Myo5a特异性片段原核表达重组质粒的构建[J].山西农业大学学报(自然科学版).2012
[9].陈睿赜,张英杰,刘月琴.绵羊线粒体DNA细胞色素B基因特异性片段PCR反应条件优化[C].中国畜牧兽医学会养羊学分会2012年全国养羊生产与学术研讨会议论文集.2012
[10].陈睿赜,张英杰,刘月琴.绵羊线粒体DNA细胞色素B基因特异性片段PCR反应条件优化[J].中国草食动物科学.2012
论文知识图
![轻链基因及其重组[12]](/uploads/article/2020/01/05/ca03874e1baa8e3ccce2fd37.jpg)
