VX-11e抑制Zika病毒复制的机制研究

论文摘要

研究背景和目的寨卡病毒（ZIKV）是目前几种新兴的虫媒传播病毒之一,1947年首次在乌干达寨卡森林发现,同时也是巴西和波多黎各脑炎和胎儿小头畸形暴发的原因。寨卡病毒可通过伊蚊传播,但与其他蚊媒传播的黄病毒（FVs）不同的是,寨卡病毒具有其独特的特性,即可通过性传播甚至导致持续性传播（1至6个月）。2015年在美洲暴发流行的寨卡病毒已经引发全球公共卫生紧急状况,据预测,在美洲,每年可出现由寨卡病毒引起的400万例临床病例。胎盘和血脑屏障内皮细胞（ECs）通常能阻止母体和胎儿血液的混合,并限制一些物质进入成人和胎儿的神经细胞室。而寨卡病毒则是可以穿过这些细胞,进而感染胎儿和母体。所感染的细胞包括神经干细胞、星形胶质细胞、神经祖细胞、小胶质细胞和Hofbauer细胞。据报道,系统进化树分析发现,同样能在人和蚊子中共同传播的登革病毒（DENVs）与寨卡病毒具有惊人的同源性。目前仍不清楚引发最近暴发流行和严重疾病的原因,迫切需要实验系统来解决这些关键的科学问题。新近研究发现寨卡病毒感染与丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路存在一定的联系,而且MAPK-ERK信号通路目前仍然是目前的研究热点。因此本课题主要研究ERK2抑制剂VX-11e抑制寨卡病毒的复制、增殖的机制。从而为临床寨卡病毒病的药物治疗研究提供新的思路。研究方法1.VX-11e对寨卡病毒复制的影响寨卡病毒在Vero细胞中扩增和滴度测定后,感染HBMEC和Vero细胞。不同浓度的VX-11e作用于感染病毒的细胞后,应用实时荧光定量PCR（Real-Time PCR,qPCR）等技术分别检测病毒在细胞内的复制情况,以及相对应的细胞外调节蛋白激酶（ERK）和核糖体S6蛋白激酶（RSK）的表达量,确定VX-1 1e对寨卡病毒复制的影响。2.RSK对寨卡病毒复制的影响运用RNA干扰（RNA interference,RNAi）技术对RSK和ERK进行沉默后,检测RSK和ERK的表达量,确证沉默相应基因后RSK和ERK表达量减少。应用qPCR技术对寨卡病毒的复制增殖量进行检测,明确病毒复制与RSK和ERK表达量之间的关系。3.寨卡病毒NS5蛋白表达载体的构建运用真核表达载体pEGFP-N1构建寨卡病毒NS5蛋白表达载体。结果（1）寨卡病毒可以在HBMEC中扩增,与新近的报道结果一致。尤其是ZIKV可以感染HBMEC,为ZIKV导致神经系统感染解释了跨越血脑屏障的途径。（2）VX-11e在一定浓度范围内对FHBMEC和Vero细胞无明显毒性,对寨卡病毒具有明显的抑制增殖的作用,具有浓度依赖性。这种抑制作用不影响病毒对细胞的粘附,主要是通过抑制病毒在细胞内的复制作用。（3）VX-1 1e在mRNA和蛋白质水平上具有抑制RSK表达的作用。（4）初步实验结果提示抑制RSK的表达对病毒的复制具有抑制作用。（5）成功构建pEGFP-NS5蛋白表达载体。（6）VX-11e对寨卡病毒全长克隆Z0E2-GFP转染后产生的寨卡病毒有抑制作用,而突变后Z0E2-mute不表达NS5蛋白,VX-11e对其抑制效果消失,重新加入pEGFP-NS5表达载体表达NS5蛋白后,抑制效果恢复。结论VX-11e通过抑制细胞内RSK的表达,进而影响寨卡病毒NS5蛋白,最终达到抑制寨卡病毒在细胞中复制的作用。通过本文的研究,为临床寨卡病毒病的药物治疗研究提供新的思路线索。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 第一章 VX-11e对寨卡病毒的吸附和复制的影响
•   1.1 研究背景
•   1.2 细胞株、病毒株、试剂及器材
•   1.3 实验步骤
•   1.4 实验结果
•   1.5 讨论
•   1.6 小结
• 第二章 RSK对寨卡病毒复制的影响
•   2.1 研究背景
•   2.2 细胞株、病毒株、试剂及器材
•   2.3 实验步骤
•   2.4 实验结果
•   2.5 讨论
• 第三章 寨卡病毒NS5表达载体的构建及应用
•   3.1 研究背景
•   3.2 细胞株、病毒株、试剂及器材
•   3.3 实验步骤
•   3.4 实验结果
•   3.5 讨论
• 全文小结
• 参考文献
• 硕士期间成果
• 中英文缩略词表
• 致谢

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 陆维智

导师: 张宝

关键词: 寨卡病毒,细胞外调节蛋白激酶,核糖体蛋白激酶,寨卡病毒非结构蛋白

来源: 南方医科大学

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学,基础医学

单位: 南方医科大学

基金: 广东省科技计划项目

分类号: R373

总页数: 81

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