猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒M蛋白/N蛋白间与N蛋白/3’UTR引入重复序列的反向遗传操作

论文摘要

为获得一种经全长cDNA突变体拯救出的、随着传代次数的增多而最终致死的突变病毒,以嵌合感染性克隆p7AX12为骨架,分别在猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）M蛋白与N蛋白间或（和）N蛋白/3’UTR之间插入32 nt,依次构建4个嵌合突变体pBJ327、pBJ732、pBJD32和pBJD32R,经DNA转染Marc-145细胞后4个嵌合突变体均能拯救出病毒,且拯救病毒中的突变或插入的碱基具有遗传稳定性。突变病毒传代5次,没有最终致死的原因还有待于进一步研究分析。获得的4个突变病毒也为研制PRRSV基因标识疫苗及PRRSV复制转录机制研究奠定了基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 细胞与质粒
•   1.2 主要试剂
•   1.3 引物
•   1.4 全长突变体的构建
•   1.5 转染
•   1.6 间接免疫荧光试验 （Indirect immunofluores-cence, IFA）
•   1.7 突变病毒基因组 （genomic RNA, gRNA） 的提取及鉴定
• 2 结果与分析
•   2.1 4个全长突变体构建成功
•   2.2 全长突变体转染细胞结果
•   2.3 突变病毒基因组RT-PCR鉴定

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 郑海红,孙竹筠,丛雁方,张可煜,高飞,童光志

关键词: 蛋白,反向遗传操作

来源: 湖北畜牧兽医 2019年03期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 中国农业科学院上海兽医研究所

基金: 国家自然科学基金面上项目(31670158)

分类号: S852.651

DOI: 10.16733/j.cnki.issn1007-273x.2019.03.002

页码: 10-13

总页数: 4

文件大小: 1327K

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