不同浓度Cd2+胁迫下烟草实时荧光定量PCR内参基因的筛选

论文摘要

【目的】筛选出镉（Cd）胁迫下烟草的最佳内参基因,为后续研究与Cd2+相关的功能性基因提供理论依据。【方法】分别以0、250和500 mg/L氯化镉（CdCl2）溶液对本生烟草进行胁迫处理,利用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测不同浓度Cd2+胁迫处理下肌动蛋白基因（ACT）、微管蛋白基因（TUB）、蛋白磷酸酶2基因（PP2A）、18S rRNA、甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因（GAPDH）及转录延伸因子基因（EF1a）6个候选内参基因的表达情况,并利用geNorm和NormFinder综合评价Ct各内参基因表达的稳定性。【结果】以不同浓度Cd2+胁迫处理的本生烟草c DNA为模板均可PCR扩增出ACT、TUB、18S rRNA、PP2A、GAPDH和EF1a等6个内参基因。6个内参基因的qRT-PCR扩增曲线走势正常,平行性好,无引物二聚体和非特异性条带产生,且绘制的标准曲线上各点基本分布在一条直线上,扩增效率在要求范围（90.00%～105.00%）之内,符合下一步评价要求,且斜率的回归系数（R2）>0.9800,说明线性关系较好。GAPDH和EF1a基因的表达丰度较高,18S rRNA处于中等水平,ACT、TUB和PP2A基因的表达丰度较低。geNorm分析结果显示,6个内参基因的表达稳定性排序为EF1a基因>GAPDH基因>ACT基因>TUB基因>PP2A基因>18S rRNA;NormFinder分析结果显示,6个内参基因的表达稳定性排序为EF1a基因>TUB基因>GAPDH基因=PP2A基因>ACT基因>18S rRNA。【结论】EF1a基因在不同浓度Cd2+胁迫处理下表达水平较高,稳定性最好,可作为Cd胁迫下本生烟草的最佳内参基因。

论文目录

• 0 引言
• 1 材料与方法
•   1.1 试验材料
•   1.2 试验方法
•     1.2.1 材料种植及Cd2+胁迫处理
•     1.2.2 总RNA提取及cDNA合成
•     1.2.3 引物设计
•     1.2.4 内参基因PCR扩增
•     1.2.5 重组载体构建
•     1.2.6 内参基因qRT-PCR检测
•   1.3 统计分析
• 2 结果与分析
•   2.1 总RNA提取及质量检测结果
•   2.2 内参基因PCR扩增结果
•   2.3 重组质粒的酶切验证结果
•   2.4 内参基因的qRT-PCR检测结果
•     2.4.1 内参基因扩增曲线和熔解曲线分析结果
•     2.4.2 内参基因的标准曲线
•     2.4.3 内参基因的表达丰度分析结果
•     2.4.4 内参基因的表达稳定性分析
• 3 讨论
• 4 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 池俊玲,赵一博,郭江波,张龙,刘汉阳,辛翠花

关键词: 烟草,镉胁迫,实时荧光定量,内参基因,筛选

来源: 南方农业学报 2019年10期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学

单位: 内蒙古科技大学生命科学与技术学院

基金: 国家自然科学基金项目（31660064,31660414）,内蒙古自然科学基金项目（2018MS03063,2018MS03025）

分类号: Q943.2

页码: 2133-2140

总页数: 8

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