导读:本文包含了载体筛选论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:载体,拟南芥,病毒,植株,转基因,基因,负载量。
载体筛选论文文献综述
蒋璐蔓,李崇,杨晓峰,彭俏丽,吴珍芳[1]（2019）在《靶向小鼠Rbmy基因的CRISPR/Cas9系统高效切割位点筛选及其表达载体构建》一文中研究指出性反转是指动物表现的性别特征与其应有的性别相反的现象。性反转小鼠可作为动物模型研究哺乳动物性别分化机制、性别控制技术以及研究人类性别连锁疾病发病机理和防治方法。已有研究证明,在胚胎期敲除雄性小鼠的Y染色体将获得XO基因型的性反转小鼠。本研究设计了6个不同的sgRNA,使共能介导Cas9蛋白作用于小鼠Y染色体上的多拷贝基因—Rbmy(RNA-binding motif gene),通过比较不同的sgRNA介导Cas9对靶序列的切割效率,最终筛选出一条能够高效介导Cas9靶向Rbmy基因的sgRNA6,该sgRNA6在体外切割效率达到100%,细胞内切割突变效率为15.4%,利用该sgRNA6构建了靶向Rbmy基因的CRISPR/Cas9系统表达载体。利用该载体转染小鼠雄性睾丸间质瘤细胞,成功获得了XO基因型的单细胞克隆团。本研究所构建的靶向Rbmy基因的CRISPR/Cas9系统表达载体可用于小鼠胚胎注射,为获得Y染色体敲除的XO型性反转小鼠模型提供基础。(本文来源于《畜牧与兽医》期刊2019年12期）
闫昕,张洁,刘长庆,杨亮亮[2]（2019）在《煤焦油加氢催化剂载体筛选及Ni负载量研究》一文中研究指出将Ni(镍)分别负载在硅铝比为50的γ-Al_2O_3、USY、ZSM-5、HY四种加氢催化剂载体上,对催化剂进行XRD和BET表征,筛选出适用于中温煤焦油(原料油)的最佳载体,并对Ni的负载量进行优选。研究发现:负载Ni后,HY分子筛特征衍射峰强度明显下降,但仍能保持原有特点;在孔容积、孔径等相近的情况下,HY分子筛比表面积远大于USY分子筛;在反应温度340℃、氢气压力8 MPa、反应时间1 h等工艺参数下对催化剂性能进行比较,表明当HY作为催化剂载体、Ni负载量为7%时,原料油加氢催化效果最佳。(本文来源于《工业技术创新》期刊2019年05期）
郭宇丹,曾玉燕,姜心禅,李坤寅[3]（2019）在《PTEN shRNA慢病毒载体构建及转染人子宫腺肌病细胞的稳定细胞株筛选》一文中研究指出目的构建携带绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的第10染色体丢失的磷酸酶基因(phasphatase and tensin homo-log deleted in chromosome 10,PTEN)的短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)慢病毒载体,并在转染人子宫腺肌病(adenomyosis,AM)细胞后筛选最优稳转株。方法设计合成3条特异性针对人PTEN基因的shRNA序列,构建到pHBLV-U6-MCS-CMV-ZsGreen-PGK-PURO载体中,测序鉴定载体构建情况,进而包装病毒并检测滴度。筛选出最优感染复数(multiplicity of infection,MOI)、嘌呤霉素杀灭浓度后,用慢病毒液转染AM细胞,以嘌呤霉素药筛建立PTEN敲低的稳定细胞株,采用实时定量聚合酶链反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测转染后细胞内PTEN mRNA表达水平,蛋白免疫印迹法(Western Blot,WB)检测PTEN蛋白表达水平,以检验转染效率并筛选出干扰效率最佳的shRNA序列。结果成功构建了3个PTEN shRNA慢病毒载体,包装后以MOI为50转染AM细胞,荧光显微镜观察绿色荧光表达明显,嘌呤霉素持续药筛建立了PTEN敲低的稳定细胞株,以PTEN shRNA3慢病毒载体的干扰效率最佳(92.98%)。结论成功构建了PTEN shRNA慢病毒载体,并在体外有效转染了AM细胞,建立了PTEN敲低的稳定细胞株。(本文来源于《中药新药与临床药理》期刊2019年08期）
赵思捷,朱文琦,孙杰,侯俊,王友亮[4]（2019）在《一种具有G418抗性筛选标记的慢病毒RNA干扰表达载体的构建及应用》一文中研究指出目的:构建具有新霉素抗性筛选标记的RNA干扰慢病毒表达载体,并检测它对乙型肝炎病毒x基因(HBx mRNA表达的抑制作用。方法:从pcDNA3.0载体中扩增新霉素抗性基因并插入删除嘌呤霉素编码序列的pLKO载体中;将改构的RNA干扰载体包装成慢病毒后感染肝癌细胞HepG2,并检测感染细胞对G418的抵抗作用;为验证改构RNA干扰载体的有效性,设计了2条针对HBx的RNA干扰序列以及针对编码萤光素酶cDNA的干扰序列并插入该载体,将含新霉素筛选标记的HBx的RNA干扰载体与辅助质粒在293T细胞中包装成慢病毒并感染过表达HBx的HepG2(嘌呤霉素抗性)细胞,运用G418筛选出稳定混合克隆,提取细胞总RNA,运用RT-qPCR检测其在HepG2细胞中对HBx RNA表达的抑制作用。结果:构建的载体与辅助质粒包装出的慢病毒感染肝癌细胞后,细胞获得G418抗性;HBx RNA干扰序列克隆入该载体可有效抑制肝癌细胞中过量表达的HBx mRNA。结论:构建了具有新霉素抗性筛选标记的RNA干扰慢病毒表达载体,运用该载体可有效筛选出抑制目的基因表达的G418抗性的稳定细胞株。(本文来源于《生物技术通讯》期刊2019年04期）
郭有新,陈宝刚,管华,刘建伟,郭靖涛[5]（2019）在《SLC7A11基因ShRNA表达载体的构建及喉癌稳定细胞株的筛选》一文中研究指出目的:构建ShRNA沉默SLC7A11基因,并转染喉癌细胞株,为研究SLC7A11基因在喉鳞状细胞中作用提供基础。方法:针对SLC7A11基因构建3个表达特异性的ShRNA的真核表达载体,通过与包装质粒共转染293T细胞包装慢病毒。将病毒感染喉癌UMCC-5和Hep-2细胞,48h后加入puromycin抗生素进行筛选细胞3代以上,使用荧光显微镜观察筛选后的稳定表达对应shRNA细胞,直至无抗性细胞全部去除。通过RT-PCR及Western blot的方法比较实验组及空白对照的各组细胞SLC7A11基因mRNA和蛋白的表达水平。结果:筛选后的喉癌UMCC-5和Hep-2细胞中全部表达荧光标签,暗示ShRNA-SLC7A11成功感染喉癌细胞系内,然后使用RT-PCR及Western blot检测,两组喉癌细胞中发现Sh-SLC7A11转染后SLC7A11 mRNA水平及蛋白的含量,明显低于Sh-CTRL组(p<0.05),结果显示,与空载质粒组相比,ShRNA慢病毒载体可有效沉默SLC7A11在UMCC-5和Hep-2细胞系中的表达。结论:成功构建并筛选出ShRNA-SLC7A11基因表达的喉癌细胞株,为进一步研究SLC7A11基因在喉癌中的作用奠定了基础。(本文来源于《河北医学》期刊2019年05期）
李琦,邹志余,杨瑞泽,邓洪利,张蕊[6]（2019）在《慢病毒载体介导增强型绿色荧光蛋白筛选稳定转染的兔骨髓间充质干细胞》一文中研究指出目的分离、培养并鉴定兔骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells, BMSCs),探讨慢病毒载体介导增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein, eGFP)感染兔BMSCs的最佳条件,筛选稳定转染的兔BMSCs。方法通过全骨髓贴壁法获得兔BMSCs;茜素红、甲苯胺蓝及油红O染色对BMSCs成骨、成软骨及成脂分化进行鉴定;免疫荧光组化染色检测CD44及CD90的表达;不同浓度嘌呤霉素筛选BMSCs的最小致死浓度;以感染复数(multiplicity of infection, MOI)为50、100、150、200的慢病毒载体介导eGFP转染BMSCs,倒置显微镜下观察荧光表达,并用嘌呤霉素筛出稳定转染系。结果当MOI为150,慢病毒载体介导eGFP感染兔BMSCs效率最高;嘌呤霉素筛选稳定转染兔BMSCs的最适质量浓度是1.0μg/mL。结论成功培养了兔BMSCs,用慢病毒介导的GFP标记了兔BMSCs并筛选出了稳定转染的兔BMSCs,建立了一个简便有效的干细胞标记方法,为BMSCs在动物体内实验标记示踪奠定了基础。(本文来源于《西安交通大学学报(医学版)》期刊2019年04期）
黎循航,张言周,李韵雅,孙萌,管政兵[7]（2019）在《铁载体产生菌筛选、鉴定及防治Botryosphaeria dothidea》一文中研究指出葡萄座腔菌属(Botryosphaeria spp.)真菌在全球范围广泛引起多种果树发生溃疡病和流胶病等病症,严重制约种植业的健康发展。作者从蜂蜜中分离出产儿茶酚型铁载体的H47菌株和产异羟肟酸型铁载体的H114菌株,经16S rRNA基因分析和生理生化鉴定,两菌株均为解淀粉芽孢杆菌。菌株用MM9培养基发酵,上清液经有机溶剂萃取、真空干燥获得铁载体的粗品。铁载体粗品对B. dothidea Ces.&De Not ACCC 38026进行平板抑菌实验,结果表明:H47和H114菌株产生的不同类型铁载体粗品对葡萄座腔菌均有抑菌作用,毒力回归方程分别为y=1.432x+0.578和y=1.744x+0.063。由此可见,H47菌株和H114菌株有成为生物防治剂的潜力。(本文来源于《食品与生物技术学报》期刊2019年03期）
欧阳剑,吴席,徐杰娜,樊婷婷[8]（2019）在《拟南芥MYB4基因GUS载体构建及其转基因植株的筛选》一文中研究指出[目的]进一步验证MYB4基因在响应干旱胁迫中的应答功能,构建ProMYB4:GUS载体,通过筛选鉴定获得相应的转基因植株。[方法]以野生型拟南芥植株的全基因组为模板,利用特异性引物扩增MYB4基因启动子,将目的基因连接到pART27载体上。然后将构建成功的重组载体转化至农杆菌GV3101,浸花法转化野生型植株。最后通过抗性筛选和PCR鉴定获得阳性转基因植株。[结果]MYB4启动子成功克隆,测序结果经过比对完全正确。抗性筛选获得了阳性转基因植株。[结论]成功获得ProMYB4:GUS阳性转基因植株,为进一步研究MYB4基因功能奠定了基础。(本文来源于《安徽农业科学》期刊2019年03期）
孟云,陶曼芝,吴席,曹树青,樊婷婷[9]（2019）在《拟南芥CTSP3基因GUS载体构建及转基因植株的筛选鉴定》一文中研究指出[目的]深入研究植物基因CTSP3的基因表达模式及其对重金属镉胁迫的响应机制,以野生型拟南芥为材料构建CTSP3-GUS重组质粒及GUS转基因植株。[方法]通过提取野生型拟南芥的DNA,克隆其启动区基因片段,将基因片段和pART27-GUS质粒双酶切后连接,转化到大肠杆菌感受态细胞中,菌落PCR和测序获得阳性单克隆。然后将CTSP3-GUS重组质粒转入农杆菌感受态GV3101,获得阳性单菌落。接着采用浸花法侵染野生型拟南芥,最后通过抗性筛选和PCR鉴定获取CTSP3-GUS转基因植株。[结果]成功克隆CTSP3启动区基因片段,构建出重组质粒,获得了CTSP3-GUS转基因植株。[结论]获得CTSP3-GUS转基因植株,为接下来进一步研究该基因在植物响应镉胁迫机制中的功能奠定了基础。(本文来源于《安徽农业科学》期刊2019年03期）
弓强,张希春[10]（2019）在《人胃肠道源儿茶酚类铁载体产生菌的筛选与鉴定》一文中研究指出为了对成人粪样中产儿茶酚类铁载体的兼性厌氧微生物进行筛选与鉴定,利用人工模拟胃肠道环境分离、纯化人胃肠道源兼性厌氧微生物,筛选含儿茶酚类铁载体生物合成途径中非核糖体肽合成酶(nonribosomal peptide synthetase,NRPS)基因的阳性菌株,并结合16S rRNA序列鉴定菌株。随后,根据NRPS腺嘌呤结构域的底物特异性预测产物类型,再利用Rioux比色法测定菌株产儿茶酚类铁载体能力。最终分离得到8株人胃肠道源产儿茶酚类铁载体菌株,分属于芽孢杆菌属和埃希氏菌属,其产物分别为芽孢杆菌素和肠杆菌素,其中Bacillus cereus Gut 16产儿茶酚类铁载体的能力最强(94.75±0.40μmol/L)。研究结果为儿茶酚类铁载体产生菌在胃肠道营养与健康中作用的相关研究奠定了基础。(本文来源于《生物技术进展》期刊2019年01期）
载体筛选论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
将Ni(镍)分别负载在硅铝比为50的γ-Al_2O_3、USY、ZSM-5、HY四种加氢催化剂载体上,对催化剂进行XRD和BET表征,筛选出适用于中温煤焦油(原料油)的最佳载体,并对Ni的负载量进行优选。研究发现:负载Ni后,HY分子筛特征衍射峰强度明显下降,但仍能保持原有特点;在孔容积、孔径等相近的情况下,HY分子筛比表面积远大于USY分子筛;在反应温度340℃、氢气压力8 MPa、反应时间1 h等工艺参数下对催化剂性能进行比较,表明当HY作为催化剂载体、Ni负载量为7%时,原料油加氢催化效果最佳。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
载体筛选论文参考文献
[1].蒋璐蔓,李崇,杨晓峰,彭俏丽,吴珍芳.靶向小鼠Rbmy基因的CRISPR/Cas9系统高效切割位点筛选及其表达载体构建[J].畜牧与兽医.2019
[2].闫昕,张洁,刘长庆,杨亮亮.煤焦油加氢催化剂载体筛选及Ni负载量研究[J].工业技术创新.2019
[3].郭宇丹,曾玉燕,姜心禅,李坤寅.PTENshRNA慢病毒载体构建及转染人子宫腺肌病细胞的稳定细胞株筛选[J].中药新药与临床药理.2019
[4].赵思捷,朱文琦,孙杰,侯俊,王友亮.一种具有G418抗性筛选标记的慢病毒RNA干扰表达载体的构建及应用[J].生物技术通讯.2019
[5].郭有新,陈宝刚,管华,刘建伟,郭靖涛.SLC7A11基因ShRNA表达载体的构建及喉癌稳定细胞株的筛选[J].河北医学.2019
[6].李琦,邹志余,杨瑞泽,邓洪利,张蕊.慢病毒载体介导增强型绿色荧光蛋白筛选稳定转染的兔骨髓间充质干细胞[J].西安交通大学学报(医学版).2019
[7].黎循航,张言周,李韵雅,孙萌,管政兵.铁载体产生菌筛选、鉴定及防治Botryosphaeriadothidea[J].食品与生物技术学报.2019
[8].欧阳剑,吴席,徐杰娜,樊婷婷.拟南芥MYB4基因GUS载体构建及其转基因植株的筛选[J].安徽农业科学.2019
[9].孟云,陶曼芝,吴席,曹树青,樊婷婷.拟南芥CTSP3基因GUS载体构建及转基因植株的筛选鉴定[J].安徽农业科学.2019
[10].弓强,张希春.人胃肠道源儿茶酚类铁载体产生菌的筛选与鉴定[J].生物技术进展.2019
论文知识图
