海南产桶形芋螺线粒体基因组DNA提取条件的优化

论文摘要

提取海南产桶形芋螺线粒体基因组完整DNA （mtDNA）,并对提取条件进行优化。以桶形芋螺腹足肌肉、毒腺和肝胰脏三个不同组织为材料,分别采用改进高盐沉淀法、细胞器/磁珠法和试剂盒提取三种方法,提取桶形芋螺mtDNA,并利用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计对提取mtDNA的纯度和浓度进行测定。以coxⅠ-rRNA小亚基基因和α-芋螺毒素基因设计引物,通过PCR反应来确证所提取的DNA确实是mtDNA。试剂盒法提取肝胰脏、高盐沉淀法提取肝胰脏和腹足肌肉组织这三种方法的产率很高,分别为44.4μg/mg、43.3μg/mg和32.6μg/mg。A260/280比值表明,改进高盐沉淀法提取毒腺和腹足肌肉组织,细胞器磁珠法提取腹足肌肉组织的mtDNA纯度很高。综合比较,采用改进高盐沉淀法,利用桶形芋螺腹足肌肉组织所提取的mtDNA产率高、质量好、纯度高。高质量芋螺mtDNA的获取为利用分子生物学方法对芋螺进行遗传进化分析和系统分类提供了基础。

论文目录

• 1 结果与分析
•   1.1 三种不同方法所提mtDNA的纯度检测
•   1.2 三种不同方法mtDNA产率比较
•   1.3 琼脂糖凝胶电泳检测mtDNA的大小与完整性
•   1.4 核基因组DNA提取
•   1.5 确证mtDNA的PCR检测
• 2 讨论
• 3 材料与方法
•   3.1 材料、试剂和仪器
•   3.2 改进高盐沉淀法提取mtDNA
•   3.3 Biovision试剂盒提取mtDNA
•   3.4 细胞器/磁珠法提取mtDNA
•   3.5 核基因组DNA的分离提取及检测
•   3.6 mtDNA质量和浓度测定
•   3.7 mtDNA PCR确证
• 作者贡献

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 刘月鹏,李珊珊,朱晓鹏,王丹,丁青,罗素兰,长孙东亭

关键词: 桶形芋螺,线粒体,线粒体基因组

来源: 基因组学与应用生物学 2019年02期

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学

单位: 海南大学热带生物资源教育部重点实验室海口市海洋药物重点实验室,海南大学热带农林学院

基金: 国家自然科学基金重点国际合作项目(81420108028),国家自然科学基金(41366002),长江学者和创新团队发展计划(IRT-15R15),海南省高等学校科学研究项目(Hnky2017-16)共同资助

分类号: Q953

DOI: 10.13417/j.gab.038.000530

页码: 530-537

总页数: 8

文件大小: 330K

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