表达趋化因子配体13的重组A组16型柯萨奇病毒的构建

论文摘要

柯萨奇病毒A组16型（Coxsackievirus A16,CV-A16）是小核糖核酸病毒科肠道病毒属病毒,是手足口病（Hand,foot and mouse disease,HFMD）的主要病原体之一。CV-A16在世界范围内广泛流行,但目前还没有有效预防CV-A16感染的疫苗上市,CV-A16疫苗的研发仍处于实验室研究阶段。本研究从改善CV-A16诱导体液免疫能力的角度出发,利用反向遗传学手段构建共表达趋化因子配体13的重组A组16型柯萨奇病毒（Coxsackievirus A16-Chemokine（C-X-C motif）ligand 13,CV-A16-CXCL13）。首先利用全基因合成方法设计合成MluⅠ-T7-5’UTR-CXCL13-VP4-VP2-NdeⅠ片段,将该片段插入pCR-XL-TOPO-CV-A16载体中,获得pCR-XL-TOPO-CV-A16-CXCL13克隆载体。将该载体线性化,体外转录出重组病毒RNA并转染细胞,最终获得包装成功的CV-A16-CXCL13重组病毒。使用PCR检测到病毒感染细胞后趋化因子配体13（Chemokine （C-X-C motif） ligand 13,CXCL13）及结构蛋白VP1在基因水平的表达;免疫印记及免疫荧光结果检测到(CXCL13与VP1蛋白水平的表达;电镜结果显示重组病毒为直径20～30nm球状颗粒;增殖曲线显示重组病毒能够在细胞中正常复制。本研究成功构建了CV-A16-CXCL13病毒,为CV-A16感染特征的研究和疫苗研发提供参考。

论文目录

• 材料与方法
•   1 病毒株、细胞株、载体
•   2 主要试剂
•   3 序列及引物合成
•   4 载体的构建
•   5 病毒的拯救及鉴定
•   6 蛋白印迹实验
•   7 免疫荧光实验
•   8 透射式电子显微镜
•   9 实时逆转录定量PCR
•   1 0 病毒TCID50测定
• 结果
•   1pCR-XL-TOPO-CV-A16-CXCL13载体的鉴定
•   2 CV-A16-CXCL13病毒的鉴定
•   3 CV-A16-CXCL13病毒颗粒的形态观察
•   4 CV-A16-CXCL13病毒的增殖动力学分析
• 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 黄星,宋杰,李嘉祺,郑惠文,李洪哲,李恒,郭磊,刘龙丁

关键词: 柯萨奇病毒组型,趋化因子配体,重组病毒,反向遗传学

来源: 病毒学报 2019年03期

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学,基础医学

单位: 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所

基金: 中央级公益性科研院所基本科研业务费,中国医学科学院病毒疫苗研发系统研究重点实验室,中国医学科学院医学与健康科技创新工程重大协同创新项目(项目号:2016-I2M-1-014 ),题目:重要新发突发传染病生物安全基础与防控技术研究~~

分类号: R373.23

DOI: 10.13242/j.cnki.bingduxuebao.003533

页码: 446-453

总页数: 8

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