SUMO-TAT-Klf4融合蛋白的原核表达及纯化

论文摘要

Klf4是体细胞诱导成多能干细胞的重要转录因子之一,参与细胞增殖分化。本研究通过将小鼠Klf4基因、穿膜肽TAT以及小分子泛素样修饰蛋白SUMO融合并转入大肠杆菌Rosseta（DE3）中进行表达,经PCR鉴定和酶切验证后,用IPTG诱导后表达出约78 k D的融合蛋白,利用Ni-NTA亲和层析胶纯化获得了高质量的SUMO-TAT-Klf4蛋白,使用Western blotting检测显示特异性良好。本研究成功构建了pET3c-SUMO-TAT-Klf4原核表达载体,有利于获得大量的Klf4蛋白,并以期提高其穿透细胞膜的能力,为后续利用重编程因子融合蛋白诱导体细胞成为iPS细胞奠定基础。

论文目录

• 1 结果与分析
•   1.1 pET-SUMO-TAT重组阳性菌鉴定
•   1.2 重组载体pET-SUMO-TAT-Klf4的菌落PCR与酶切鉴定
•   1.3 重组pET-SUMO-TAT-Klf4质粒的诱导表达
•   1.4 Western blotting鉴定重组蛋白
•   1.5 重组蛋白的可溶性
•   1.6 重组蛋白的纯化
•   1.7 酶切产物的Ni-NTA柱的再纯化
• 2 讨论
• 3 材料与方法
•   3.1 质粒与菌种
•   3.2 主要试剂及工具酶
•   3.3 基础载体pET-SUMO-TAT的构建
•   3.4 原核表达载体p ET-SUMO-TAT-Klf4的构建
•   3.5 重组pET-SUMO-TAT-Klf4质粒的诱导表达
•   3.6 Western blotting鉴定重组蛋白
•   3.7 可溶性分析
•   3.8 目的蛋白的分离纯化及酶切纯化
•   3.9 酶切产物的Ni-NTA柱的再纯化
• 作者贡献

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 钟美娟,张华华,项丽,周汝滨,曹定国,梁朋,张国平,何滔,庞实锋

关键词: 原核表达,蛋白纯化

来源: 基因组学与应用生物学 2019年03期

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学

单位: 广东医科大学基础医学院生物学教研室

基金: 广东省自然科学基金(2015A030313527),广东省省级科技计划项目(2013B031800014),东莞市社会科技发展项目(2013108101062)共同资助

分类号: Q78

DOI: 10.13417/j.gab.038.000977

页码: 977-982

总页数: 6

文件大小: 252K

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