LAMP实时浊度法快速检测大肠杆菌方法的建立与优化研究

论文摘要

根据大肠杆菌的特异性基因(malB),设计与筛查环介导等温扩增(LAMP)的引物,通过对甜菜碱用量、环引物的浓度、反应温度、dNTPs用量等反应条件的优化,得到较佳的LAMP反应体系,建立了LAMP实时浊度法快速检测大肠杆菌;在较优条件下,先后对9株非大肠杆菌菌株进行特异性检测和5株大肠杆菌的进行同源性检测。此外,结合课题组自行研制的多通道浊度仪,对LAMP扩增产物进行实时浊度监测。结果表明:LAMP实时浊度法检测大肠杆菌的灵敏度达16.010 ng/L,与实时荧光定量PCR的检测限相当。因此,建立与优化LAMP实时浊度法可为食品中大肠杆菌的现场快速检测提供了有力手段。

论文目录

• 1 研究背景
• 2 实验
•   2.1 实验原料及仪器
•     2.1.1 菌株
•     2.1.2 主要试剂
•     2.1.3 主要仪器
•   2.2 实验方法
•     2.2.1 引物设计与合成
•     2.2.2 DNA模板的制备
•     2.2.3 LAMP反应体系的优化
•     2.2.4 LAMP特异性验证
•     2.2.5 实时荧光定量PCR检测大肠杆菌
•     2.2.6 实时浊度检测大肠杆菌
• 3 结果与分析
•   3.1 LAMP反应体系的优化
•     3.1.1 反应温度
•     3.1.2 环引物的浓度
•     3.1.3 dNTPs的用量
•     3.1.4 甜菜碱的用量
•   3.2 LAMP特异性验证
•   3.3 灵敏度分析
• 4 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 陈柱,贺子瑜,何农跃,邓燕,李松

关键词: 环介导等温扩增,大肠杆菌,实时浊度检测

来源: 包装学报 2019年02期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅱ辑,基础科学

专业: 生物学

单位: 湖南工业大学生物医用纳米材料与器件湖南省重点实验室

基金: 湖南省重点研发计划基金资助项目(2017SK2174),国家自然科学基金资助项目(61871180),中国博士后科学基金一等资助项目(2018M630498)

分类号: Q93-332

页码: 52-58

总页数: 7

文件大小: 1048K

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