天山1号冰川冻土微生物总DNA提取方法的比较和优化

论文摘要

建立一种满足天山冰川冻土微生物宏基因组文库构建要求的DNA提取方法,为低温乳糖酶基因的筛选奠定基础。通过对DNA纯度与得率进行比较,从4种DNA提取方法中选择提取DNA得率和纯度最高的TEN法,进一步通过增加预处理、反复提取等步骤进行了改良和优化。SDS-CTAB法、TENP预处理法、TEN法和Zhou法4种提取方法中,TEN法的DNA得率为（392±44） ng/g冻土,A260/A280和A260/A230分别为（1.82±0.40）和（0.97±0.38）,最接近理想指标。对TEN法进行优化改良发现,DNA得率最高达到（449±61） ng/g冻土,且A260/A280和A260/A230值分别为（1.92±0.15）和（2.03±0.31）。以16S rDNA和26S rDNA为引物的PCR扩增和酶切实验验证了所提取冻土宏基因组DNA的质量满足后续分子生物学的要求。改良优化过的TEN法是适合天山1号冰川冻土的一种经济有效的DNA提取方法,为构建冻土低温微生物宏基因组文库奠定了基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 土壤样品
•   1.2 主要试剂
•   1.3 冻土微生物总DNA的提取方法
•     1.3.1 SDS-CTAB裂解法
•     1.3.2 TENP法
•     1.3.3 TEN法
•     1.3.4 Zhou法[12]
•     1.3.5 TEN法的改良和优化
•   1.4 冻土微生物总DNA完整性及纯度和得率的检测
•   1.5 冻土微生物总DNA的PCR扩增
•   1.6 冻土微生物总DNA的限制性酶切
• 2 结果与分析
•   2.1 不同冻土微生物总DNA提取方法的比较
•   2.2 TEN法反复多次提取DNA和改良TEN法的得率和纯度分析
•   2.3 样品预处理对DNA提取得率和纯度的影响
•   2.4 改良TEN法提取DNA质量的PCR检测和限制性酶切检测
• 3 讨论
• 4 结语

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 李梦,胡有贞,唐洁,王丽军,郑晓吉,顾艳玲,关波,倪永清

关键词: 宏基因组,提取,冻土,天山号冰川

来源: 食品与生物技术学报 2019年12期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学

专业: 生物学

单位: 石河子大学食品学院

基金: 国家自然科学基金项目（31560432）,石河子大学高层次人才科研启动项目（RCZX201432）,石河子大学科学技术研究发展计划-应用基础研究青年项目（2014ZRKXYQ13）

分类号: Q933

页码: 17-24

总页数: 8

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