甘蓝型油菜BnaLPAT2基因克隆与生物信息学分析及载体构建

论文摘要

为进一步研究甘蓝型油菜BnaLPAT2基因,通过TAIR网站查找拟南芥AtLPAT2 （AT3G57650）,在Brassica Database数据库检索到4条甘蓝型油菜LPAT2序列,据此设计引物,通过RT-PCR合成c DNA,得到4条CDS序列,其大小依次为1 173 bp、1 167 bp、1 173 bp、1 155 bp,分别命名为BnaLPAT2-1～BnaLPAT2-4。4个BnaLPAT2蛋白通过生物信息学预测分析显示:BnaLPAT2编码的氨基酸在384～390之间,理论分子量介于43 226.59～43 730.17 Da之间。甘蓝型油菜LPAT2蛋白的二级结构和跨膜区大致相同,均由LPLAT superfamily、PlsC superfamily、AcyltransfCsuperfamily结构域组成,且具有较近的亲缘关系。从基因结构发现:4个BnaLPAT2均含有相同的外显子和内含子数,分别位于C08、A09、A07和A04染色体上。分析表明,克隆获得的4个甘蓝型油菜BnaLPAT2为该基因家族成员。为进一步研究甘蓝型油菜LPAT2基因的功能,我们通过双酶切技术,构建pBI121-LPAT2-napin载体,并转化根癌农杆菌GV3101。

论文目录

• 1 结果与分析
•   1.1 BnaLPAT2基因的克隆与鉴定
•     1.1.1 BnaLPAT2基因的克隆
•     1.1.2 BnaLPAT2基因鉴定
•   1.2 BnaLPAT2编码蛋白结构的预测与分析
•     1.2.1 BnaLPAT2蛋白一级结构的预测
•     1.2.2 BnaLPAT2蛋白二级结构的预测
•     1.2.3 BnaLPAT2蛋白功能的预测与分析
•     1.2.4 BnaLPAT2蛋白的亚细胞定位预测
•     1.2.5 BnaLPAT2蛋白的保守结构域分析
•     1.2.6 BnaLPAT2蛋白跨膜的预测与分析
•   1.3 LPAT2的氨基酸序列进化树
•   1.4 甘蓝型油菜LPAT2基因结构与染色体定位
•   1.5 载体构建与农杆菌的转化
• 2 讨论
• 3 材料与方法
•   3.1 材料与试剂
•   3.2 引物设计
•   3.3 总RNA的提取与cDNA的合成
•   3.4 LPAT2基因的克隆与测序
•   3.5 BnaLPAT2蛋白的生物信息学分析
•   3.6 种子特异性表达载体的构建
•   3.7 根癌农杆菌的转化
• 作者贡献

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 汪慧慧,刘少锋,岳宁燕,熊兴华

关键词: 甘蓝型油菜,生物信息学分析,载体构建

来源: 基因组学与应用生物学 2019年04期

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技,农业科技

专业: 生物学,农作物

单位: 湖南农业大学农学院水稻油菜抗病育种湖南省重点实验室

基金: 国家重点研发计划(2017YFD0101700),国家“973”计划项目(2015CB150200)共同资助

分类号: S565.4;Q943.2

DOI: 10.13417/j.gab.038.001666

页码: 1666-1673

总页数: 8

文件大小: 322K

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