导读:本文包含了增生平滑肌论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:平滑肌,细胞,血管,内膜,黄芪,蛋白,活性氧。
增生平滑肌论文文献综述
束波,范芳[1]（2019）在《基质细胞衍生因子1(SDF-1)预处理的骨髓间充质干细胞移植减轻大鼠颈动脉内皮和平滑肌细胞增生》一文中研究指出目的探讨移植基质细胞衍生因子1(SDF-1)预处理的骨髓间充质干细胞(BMSC)对大鼠颈动脉狭窄的作用。方法携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的质粒转染BMSC后经静脉注入大鼠。分为颈动脉损伤模型对照组、 BMSC移植组、 SDF-1预处理的BMSC移植组。细胞移植术后2周,取损伤处血管组织采用免疫荧光技术检测EGFP表达明确BMSC归巢情况;移植术后4周, Evans蓝染色观察损伤内膜内皮化程度,免疫荧光技术检测损伤血管CD31的表达情况; HE染色检测损伤颈动脉新生内膜增生程度,免疫组织化学染色法检测损伤血管增殖细胞核抗原(PCNA)的表达, Western blot法检测血管内皮生长因子(VEGF)的蛋白水平。结果移植SDF-1预处理的BMSC能有效促进干细胞向损伤血管的归巢,并促进损伤血管再内皮化程度。BMSC移植后新生内膜面积、新生内膜面积/中膜面积均低于对照组, SDF-1预处理的BMSC移植组差异更为显着。移植SDF-1预处理的BMSC可显着提高损伤内膜CD31以及VEGF的水平,并抑制PCNA的表达。结论 SDF-1预处理BMSC移植可通过促进BMSC归巢至损伤处并诱导细胞分化,抑制中膜平滑肌细胞增殖来减轻血管狭窄程度。(本文来源于《细胞与分子免疫学杂志》期刊2019年04期）
陈文明,赵永超,刘围围,龙禹哲,张赟[2]（2018）在《人参皂苷Rg_3对大鼠颈动脉损伤后内膜增生及平滑肌细胞凋亡的影响》一文中研究指出目的研究人参皂苷Rg_3对大鼠颈动脉损伤后新生内膜增生及平滑肌细胞凋亡的影响。方法 40只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和人参皂苷Rg_3低、高剂量(5、10 mg/kg)组,各10只,用球囊制备大鼠颈动脉损伤模型,术后次日ig给药,假手术组和模型组给予等量的生理盐水;14 d后取损伤的颈总动脉血管,用苏木精-伊红(HE)染色观察新生内膜组织形态学改变;采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的叁磷酸脱氧尿嘧啶缺口末端标记(TUNEL)法检测平滑肌细胞凋亡;Western blotting和qRT-PCR法检测损伤血管凋亡基因Fas、抗凋亡基因Bcl-2的表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠血管新生内膜明显增厚,内膜与中膜面积比明显增加,新生内膜区平滑肌细胞凋亡率显着增加,Fas、Bcl-2基因表达明显增加;与模型组比较,人参皂苷Rg_3低、高剂量组血管内膜增生明显减轻,内膜与中膜面积比明显下降,新生内膜区平滑肌细胞凋亡率明显增加,损伤血管Fas基因表达水平明显升高,Bcl-2基因表达水平明显降低。结论人参皂苷Rg_3可能通过促进平滑肌细胞的凋亡,从而减轻球囊损伤后血管内膜的增生。(本文来源于《中草药》期刊2018年13期）
赵浩民[3]（2018）在《脂肪分化相关蛋白基因敲除抑制血管平滑肌细胞增生与分化及减少血管内膜增生的实验研究》一文中研究指出研究背景:现动脉粥样硬化所导致的心脑血管疾病及周围血管疾病发病率逐年增高,在国人死亡原因排第一位,人们一直在探索动脉硬化的致病机理,寻求解决动脉硬化性疾病的有效方法。目前,随着介入技术的进步,新器材的出现,腔内手术治疗动脉硬化闭塞性疾病越来越多,但术后中远期动脉再狭窄一直是无法彻底解决的难题。无论是动脉粥样硬化的进展过程中,还是动脉介入或手术后再狭窄的过程中,血管平滑肌细胞的增生和迁移均扮演着重要角色。资料显示,脂肪分化相关蛋白在单核-巨噬细胞、血管平滑肌细胞向泡沫细胞分化的过程中起着重要作用,进而影响着动脉粥样硬化的形成。据现有资料显示,目前尚缺乏ADRP基因敲除的VSMCs在体外培养血小板源性生长因子刺激下增殖与分化的相关研究;另外,也缺少ADRP基因敲除对在动物或人体内血管内膜增生的影响的相关研究。研究目的:确定ADRP基因敲除对体外培养的VSMCs的增殖、分化、迁移能力的影响;探索ADRP对内膜增生和VSMC产生影响的分子机制;通过动物实验确定ADRP基因敲除对小鼠体内动脉粥样硬化形成及内膜增生的影响;通过动物实验确定ADRP基因敲除对大鼠体内动脉球囊损伤后动脉内膜增生的影响。研究方法:1.利用RNA干扰技术,应用ADRP siRNA转染人VSMCs,用PDGF培育。通过MTT实验检验细胞的存活率,并分别进行划痕实验,透壁实验和细胞计数,检验其迁徙情况及周期分布,通过western blotting检测细胞外信号调节激酶(Extracellular signal-regulated kinase,ERK),磷酸化的细胞外信号调节激酶(phosphorylated ERK,p-ERK),蛋白激酶Akt,磷酸化的p-Akt,增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA),金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase,MMP-2)and金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白含量。2.应用高脂饮食喂养脂蛋白E缺陷(apolipoprotein E,ApoE~(-/-))小鼠,建立动脉硬化动物模型,每周2次注射仙台病毒包膜包裹的siADRP RNA或空白siRNA。饲养3周后取切取小鼠主动脉,检测其ADRP mRNA及ADRP蛋白表达,HE染色评估小鼠主动脉内膜增生情况,分析ADRP基因敲除对动脉粥样硬化形成及内膜增生的影响。3.应用球囊扩张和拖拽建立大鼠颈动脉内膜损伤后内膜增生动物模型,每周2次注射仙台病毒包膜包裹的si ADRP RNA或空白siRNA。3周后切取大鼠颈动脉,检测其ADRP mRNA及ADRP蛋白表达,HE染色评估大鼠颈动脉内膜增生情况,分析ADRP敲除对动脉球囊损伤后内膜增生的影响。研究结果:1.siADRP RNA抑制了PDGF诱导的VSMCs的增殖能力,细胞停滞于G1期,PCNA表达减少;siADRP RNA抑制了PDGF诱导的VSMC的迁移能力,MMP-2、MMP-9蛋白的表达降低;本研究显示siADRP RNA抑制了ERK及Akt信号传导通路对PDGF的反应。2.动脉硬化模型组小鼠主动脉ADRP mRNA及ADRP蛋白表达增加,HE染色示内膜下脂质沉积、斑块形成、平滑肌细胞增殖并向内膜下迁移。siADRP抑制了小鼠模型中ADRP mRNA及ADRP蛋白的表达,HE染色显示siADRP增加了小鼠模型中管腔面积,减少了内膜厚度及内膜/中膜比值。3.颈动脉球囊损伤模型组中大鼠颈动脉标本的ADRP mRNA及ADRP蛋白表达均增加,HE染色示内膜下有较多炎细胞浸润,中层平滑肌细胞增殖,并向内膜下迁移,内膜厚度明显增加。siADRP抑制了大鼠模型中ADRP mRNA及ADRP蛋白的表达,HE染色显示siADRP增加了实验组管腔面积,减少了内膜厚度及内膜/中膜比值。结论:体外实验证明,ADRPsiRNA转染显着抑制了PDGF诱导的VSMCs增殖和迁移。推测ADRP基因敲除通过抑制MMP-2、MMP-9的表达,以及抑制ERK和Akt信号传导通路实现抑制VSMCs的增殖和迁移。通过体内实验证明,ADRP敲除抑制了ApoE~(-/-)动脉粥样硬化模型小鼠的泡沫细胞形成及内膜增生;ADRP敲除也抑制了球囊损伤后大鼠颈动脉内膜增生。ADRP可能成为治疗动脉硬化及内膜增生的潜在靶点。(本文来源于《吉林大学》期刊2018-06-01）
阎卉芳,徐昊,彭熙炜,朱嘉欢,邓常清[4]（2018）在《黄芪和当归配伍对大鼠血管内膜增生血管平滑肌细胞增殖的影响》一文中研究指出目的:探讨黄芪和当归不同配伍对大鼠血管内皮损伤后血管内膜增生中血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化、细胞周期和磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号途径的影响。方法:雄性大鼠制备腹主动脉球囊导管损伤血管内皮模型,设计黄芪和当归单用及不同比例配伍,对内皮损伤模型大鼠灌胃给药,干预14 d后取腹主动脉,检测腹主动脉增生内膜中VSMC表型转化、细胞周期相关蛋白表达和PI3K/Akt信号通路相关蛋白的表达。结果:球囊导管损伤主动脉内皮后,可引起VSMC表型转化及VSMC增殖从而导致血管内膜增生。当归、黄芪、黄芪-当归1∶1配伍、黄芪-当归5∶1配伍可增强血管增生内膜中平滑肌α肌动蛋白(SMα-actin)表达,抑制增生内膜中增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达。当归、黄芪、黄芪-当归1∶1配伍、黄芪-当归5∶1配伍可抑制血管组织中cyclin D1、cyclin E表达的增高,抑制增生内膜中p-PI3K和p-Akt蛋白表达的升高。结论:黄芪当归配伍对血管内皮受损后内膜增生具有抑制作用,其作用可能与其通过抑制血管内皮受损后PI3K/Akt信号通路激活,进而抑制VSMC表型转化和细胞增殖,从而发挥抗VSMC增殖的作用有关。(本文来源于《中国临床药理学与治疗学》期刊2018年04期）
岳永强[5]（2018）在《血管紧张素Ⅱ1型受体相关蛋白促进血管平滑肌细胞凋亡并抑制内膜增生的机制研究》一文中研究指出目的:探讨血管紧张素Ⅱ1型受体相关蛋白(Angtiotensin Ⅱ type 1 receptor associated protein,ATRAP)对体外培养的血管平滑肌细胞(Vascular smooth muscular cell,VSMC)凋亡的影响及相关机制;腺病毒过表达的ATRAP对颈动脉球囊损伤引起的内膜增生的作用。从而丰富ATRAP抑制颈动脉内膜增生的作用机制,并为临床治疗颈动脉术后再狭窄提供新的治疗方向。方法:体外实验:1 VSMC的获得、培养与鉴定VSMC购自广州吉妮欧生物科技有限公司。取自大鼠胸主动脉段组织,酶消化法获得。在添加10%胎牛血清(FBS)的DMEM的培养基中常规培养,在leica倒置显微镜下观察细胞生长状态、汇合度等;用α-SM-actin鉴定VSMC细胞表型。2 TUNEL检测腺病毒过表达的ATRAP对VSMC凋亡的影响2.1构建ATRAP过表达腺病毒与对照病毒由汉恒生物科技(上海)有限公司构建ATRAP的腺病毒过表达载体并提供对照腺病毒。2.2 TUNEL测定ATRAP过表达对VSMC凋亡的影响VSMC培养至5-7代,汇合度达90%,胰酶消化后,接种至96孔板(1x105 cells/ml),汇合度达50-70%时,转染Adv.ATRAP或Adv.GFP,24小时后更换为在添加0.1%FBS的高糖DMEM培养基中培养24小时以获得同步化,添加或不添加AngⅡ(100nM)继续培养24h,用原位末端转移酶标记技术(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotin nick end labeling assay;TUNEL assay)测定VSMC凋亡的改变,在leica活细胞工作站测定细胞凋亡的比例。2.3 总RNA提取及荧光定量PCR测定凋亡相关基因mRNA表达的改变VSMC接种于6孔板,余处理同前述。用RNAisoplus试剂盒提取VSMC的总RNA,按照PrimeScriptTMRT Master Mix反转录试剂盒说明书反转录cDNA,并在Applied Biosystems QuantStudio(?)6 Flex上进行荧光定量PCR测定凋亡相关基因的mRNA表达改变。2.4 Western blot检测ATRAP及凋亡相关蛋白的表达RIPA和PI(20:1)提取VSMC总蛋白,并用western blot检测ATRAP及凋亡相关蛋白(caspase 3,caspase 8,caspase 9,bcl-2,bax等)的表达改变。3 ATRAP干扰对VSMC凋亡的影响3.1 ATRAP siRNA及阴性对照的构建由上海吉玛制药技术有限公司合成ATRAP siRNA并提供阴性对照。3.2 ATRAP siRNA干扰序列干扰效率的鉴定VSMC 接种于 6 孔板,汇合度达 70-90%时,用 LipofectamineTM RNAiMAX Transfection Reagent(InvitrogennTM)转染 ATRAP siRNA 及阴性对照至培养基,48小时后用Trizol法提取总RNA,应用荧光定量PCR方法检测各组干扰序列对ATRAP的干扰效率。3.3 western blot检测ATRAP干扰对凋亡相关基因蛋白表达的改变细胞处理同上,提取细胞总蛋白,利用western blot技术测定ATRAP、GFP、cleaved-cas8、cleaved-cas-3、bcl-2、bax 等的改变,以 GAPDH 作为内参。4 westen blot检测过表达的ATRAP对VSMC凋亡影响的机制研究4.1 ATRAP对AngⅡ刺激引起的Akt磷酸化的作用VSMC接种至6孔板,汇合度达50-70%时,转染Adv.ATRAP或Adv.GFP,24小时后更换为含0.1%FBS的高糖DMEM培养基中培养24小时,添加AngⅡ(100nM)并在 0 min、30 min、45 min、60 min、2 h、4 h 提取磷酸化蛋白,并用 western blot方法检测p-Akt的改变。4.2 PTEN抑制剂影响ATRAP对AngⅡ刺激引起的Akt磷酸化的抑制按前述方法进行腺病毒转染后,在AngⅡ处理前4 h加入PTEN抑制剂bpv(200 nM),然后加入或不加 Ang Ⅱ(100nM)并在 0 min、30 min、45 min、60 min、2 h、4 h提取磷酸化蛋白,并用western blot方法检测p-Akt的改变。4.3 PTEN抑制剂对ATRAP过表达引起的VSMC凋亡的作用TUNEL测定PTEN抑制剂对ATRAP过表达引起的VSMC凋亡的影响,并分别用荧光定量PCR和western blot方法检测凋亡相关基因的mRNA及蛋白水平改变。体内实验5观察腺病毒转染的ATRAP对大鼠颈动脉球囊损伤引起的内膜增生的作用5.1大鼠颈动脉球囊损伤模型的构建及腺病毒的局部转染2F fogarty取栓导管损伤大鼠左侧颈总动脉,以2*10^9pfu的ATRAP过表达腺病毒或对照病毒局部孵育左颈总动脉30min。5.2腺病毒转染的ATRAP对大鼠颈动脉球囊损伤引起的内膜增生的影响在不同时间点(3天,7天,14天)处死大鼠并取左侧颈总动脉,分为两部分,一部分标本提取RNA检测ATRAP及凋亡相关基因的mRNA改变,另一部分标本用4%多聚甲醛固定后进行颈总动脉横截面血管弹力染色(Verhoeff-Van Gieson(VVG)染色)。6腺病毒转染的ATRAP对大鼠颈动脉球囊损伤处VSMC凋亡的影响Tunel/DAPI免疫荧光染色测定大鼠颈动脉球囊损伤处细胞凋亡的改变。结果:1 VSMC的获得、培养与鉴定倒置荧光纤维镜下可见细胞贴壁生长,单个细胞呈细长梭形,细胞生长致密处细胞平行排列成束,典型的“峰谷状”生长。用α-SM-actin染色后,通过倒置荧光显微镜观察,血管平滑肌细胞呈绿色荧光。2腺病毒过表达的ATRAP促进离体的大鼠VSMC凋亡2.1细胞处理腺病毒转染ATRAP至培养的VSMC24小时,更换0.1%FBS的DMEM培养基并加入Ang Ⅱ继续培养24小时后进行TUNEL染色发现,过表达的ATARP促进离体的VSMC凋亡,且与Ang Ⅱ刺激没有明显的相关性。Ang Ⅱ组:Adv.ATRAP组相比Adv.GFP 组,VSMC 凋亡率增高(11.50±1.66%比 1.13±0.27%,P<0.05);无 AngⅡ 组:Adv.ATRAP 组相比 Adv.GFP 组,VSMC 凋亡率增高(13.17±0.48%比 1.20±0.17%,P<0.05)。2.2荧光定量PCR结果检测ATRAP及凋亡相关基因mRNA的表达结果显示,ATRAP过表达引起促凋亡基因bax表达明显上调,抑制凋亡基因bcl-2表达下调。2.3 Western blot检测ATRAP及凋亡相关蛋白的表达western blot结果显示,ATRAP与GFP未形成融合蛋白,cleaved-caspase 8,cleaved-caspase 3,bax蛋白表达增加,bcl-2蛋白表达减低,而cleaved-caspase-9表达没有明显改变,表明ATRAP过表达可诱导VSMC促凋亡蛋白表达增加,且主要是通过死亡受体途径(外源性途径)促进VSMC凋亡。3 ATRAP干扰对VSMC凋亡的影响3.1 荧光定量PCR鉴定ATRAP干扰序列的干扰效果结果显示,325干扰序列组对ATRAP干扰效率高于其他两组,因此选用325干扰序列进行后续实验。3.2 westen blot检测凋亡相关蛋白的改变western blot 结果显示,ATRAP 干扰后,cleaved-caspase 8,cleaved-caspase 3,bax蛋白表达减低,bcl-2蛋白表达增高,表明ATRAP沉默后可抑制VSMC凋亡。4过表达的ATRAP促进VSMC凋亡的机制研究4.1 ATRAP抑制Ang Ⅱ刺激引起的Akt磷酸化在多个时间点(30 min、45 min、60 min、2 h、4 h),Adv.ATRAP 组相比Adv.GFP组,p-Akt蛋白表达明显减低(P<0.05),说明在VSMC中,ATRAP过表达抑制Ang Ⅱ刺激引起的Akt磷酸化。4.2 PTEN抑制剂可逆转ATRAP对Ang Ⅱ刺激引起的Akt磷酸化的抑制作用在多个时间点(30 min、45 min、60 min、2 h、4 h),Adv.ATRAP+bpv 组相比Adv.ATRAP组,p-Akt蛋白表达明显增高(P<0.05),说明在VSMC中,PTEN抑制剂可逆转ATRAP过表达对Ang Ⅱ刺激引起的Akt磷酸化的抑制。4.3 PTEN抑制剂可逆转ATRAP对VSMC凋亡的促进作用TUNEL结果显示,Adv.ATRAP+bpv组相比Adv.ATRAP组,VSMC凋亡明显减少,而与 Ang Ⅱ 存在无明显相关(Adv.ATRAP+Ang Ⅱ 组相比 Adv.ATRAP+Ang Ⅱ +bpv 组,11.50±1.66%比 1.81±0.19%,P<0.05;Adv.ATRAP 相比 Adv.ATRAP+bpv 组,13.17±0.48%比 1.45±0.15%,P<0.05);mRNA 及蛋白表达也支持 PTEN 抑制剂逆转ATRAP对VSMC凋亡的促进作用。体内实验5腺病毒转染的ATRAP抑制大鼠颈动脉球囊损伤引起的内膜增生在球囊损伤并腺病毒孵育后3天,Adv.ATRAP转染组相比Adv.GFP转染组,大鼠左颈总动脉内膜增生没有明显差异;而在球囊损伤并腺病毒孵育后7天、14天后,Adv.ATRAP组相比Adv.GFP转染组,内膜面积及内膜中膜比(I/M)明显减少(P<0.05)。6腺病毒转染的ATRAP促进大鼠颈动脉球囊损伤处VSMC的凋亡TUNEL/DAPI免疫荧光染色结果表明,在球囊损伤并腺病毒孵育后3天,Adv.ATRAP转染组相比Adv.GFP转染组,大鼠左颈总动脉内膜处细胞凋亡没有明显差异;而在球囊损伤并腺病毒孵育后7天、14天后,Adv.ATRAP组相比Adv.GFP转染组,内膜处细胞凋亡率明显增高(P<0.05)。结论:1腺病毒过表达ATRAP促进离体大鼠VSMC的凋亡2腺病毒过表达的ATRAP抑制Ang Ⅱ刺激引起的Akt磷酸化3 PTEN抑制剂显着抑制了 ATRAP过表达诱导的离体大鼠VSMC的凋亡4 PTEN抑制剂可逆转ATRAP过表达对AngⅡ刺激引起的Akt磷酸化的抑制5 siRNA干扰ATRAP抑制VSMC凋亡6过表达ATRAP显着抑制大鼠颈动脉球囊损伤后新生内膜的形成7过表达ATRAP促进大鼠颈动脉球囊损伤处的细胞凋亡(本文来源于《郑州大学》期刊2018-03-01）
孟泽琪[6]（2018）在《跨膜蛋白ESDN通过对PDGF受体信号途径的调控影响血管平滑肌细胞增殖和血管增生》一文中研究指出目的:血管增生(vascular hyperplasia)是动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)、高血压、血管成形术后再狭窄等心血管疾病中普遍存在的病理生理表现。其主要特征表现为血管损伤后,位于血管中膜呈收缩表型的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)出现表型转化,转变为合成表型,增殖并迁移至内膜从而导致的一种血管重构现象。血小板源生长因子(platelet-derived growth factor-BB,PDGF-BB)由血管损伤部位的血小板、内皮细胞、VSMC和炎性细胞分泌产生,与其受体(PDGF receptor-b,PDGFR-β)结合后能够引起VSMC表型转化,进而发挥促细胞增殖和迁移的作用,对于血管重塑和内膜增生的发生发展具有明显的促进作用。内皮和平滑肌细胞来源的neuropilin样分子(endothelial and smooth muscle cell-derived neuropilin-like molecule,ESDN)是一类I型跨膜蛋白(type-I transmembrane protein),最初是在人类冠状动脉和高度转移性肺癌细胞中克隆得到的,其分子内含有一个CUB结构域和一个凝血因子V/VIII同源结构,与Neuropilins结构相似。课题组之前的研究表明,在培养的VSMC中,处于增殖状态时ESDN表达显着高于生长抑制的细胞,而ESDN的过度表达会抑制VSMC生长。在PDGF-BB诱导的VSMC增殖模型中,ESDN敲除及敲低能够上调PDGF-BB诱导的细胞增殖作用。该结果表明ESDN在调节血管细胞生长方面起着重要作用,其分子机制可能与ESDN对PDGF-BB及其受体的调控有关,但是,ESDN调控PDGF受体信号途径影响VSMC增殖和血管增生的机制研究目前尚不清楚。本实验利用小鼠颈总动脉结扎术诱导血管内膜增生模型以及PDGF-BB诱导VSMC增殖模型,探讨ESDN调控PDGF受体信号途径影响VSMC增殖及其与血管重构的关系。方法:1.平滑肌细胞特异性敲除小鼠的培育和基因型鉴定:利用从耶鲁大学医学院心血管系Dr.Mehran Sadeghi(Yale University School of Medicine)实验室引进Esdn~(flox/flox)小鼠和购买的SM22a-Cre小鼠培育平滑肌细胞特异性敲除小鼠。选取6~8周龄大小的小鼠,按雌雄比例为2:1进行交配,繁殖仔鼠,取仔鼠鼠耳组织提取基因组DNA,用聚合酶链反应(PCR)技术进行基因型鉴定,成功培育出Cre~(+/-)Esdn~(flox/flox)小鼠及其对照Cre~(-/-)Esdn~(flox/flox)小鼠,同时提取血管组织Western blot验证其敲除效果。2.小鼠内膜增生模型制备与分组选取8~12周的WT、Esdn~(-/-)小鼠,平滑肌细胞特异性敲除小鼠,雄性,各30只,随机分为3 d、7 d、14 d、21 d和假手术组,异氟烷吸入式麻醉,体式显微镜下行左侧颈总动脉结扎术,假手术组只分离血管,不结扎,分别于结扎术后3、7、14、21 d时生理盐水心脏灌流后取材。将取材的血管分为两部分,一部分用OCT包埋剂包埋、液氮迅速冷冻、冰冻切片,备用;另一部分用RIPA裂解液(50 mM Tris pH 7.5,150 mM NaCl,0.5%脱氧胆酸钠,1%NP-40,0.1%SDS,1 mM EDTA),临用前加入complete proteinase inhibitor(Roche Applied Sciences)和phosphatase inhibitor cocktails(Sigma-Aldrich)裂解,提取总蛋白质,Western blot检测VSMC增殖标志蛋白骨桥蛋白(osteopontin,OPN)以及分化标志基因α-骨骼肌肌动蛋白(smooth musclea-actin,SMa-actin)、平滑肌22a(smooth muscle22 alpha,SM22a)的表达。3.冰冻切片HE染色和免疫荧光染色分析选取结扎不同时间血管组织的冰冻切片(5mm),进行组织HE染色及免疫荧光染色,显微照相后利用Image J software(National Institutes of Health,USA)观察内膜增生和中膜变化确定其血管增生状态;利用荧光显微镜观察Esdn~(-/-)小鼠和野生型小鼠;平滑肌细胞特异性敲除小鼠Cre~(+/-)Esdn~(flox/flox)小鼠及其对照Cre~(-/-)Esdn~(flox/flox)小鼠各组不同时间点血管组织中ESDN、CD31(内皮细胞标志蛋白)和SMa-actin(VSMC标志蛋白)的阳性荧光强度。4.VSMC培养与siRNA敲低ESDN的表达按照本室报道的贴块法培养大鼠VSMC,取3-5代细胞进行实验。将VSMC接种在60mm小皿中,用含20%胎牛血清的无抗生素培养基,在37℃和5%CO_2细胞培养箱中孵育12-24小时后,待细胞生长至60-70%融合时,细胞用20 nM的ESDN siRNA或通用阴性对照(锐博)小干扰RNA转染,按照Lipofectamine RNAi Max试剂盒操作说明进行。转染24小时之后根据细胞密度换液,继续培养24 h后,换成无血清培养基血清饥饿24 h后,分别给予PDGF-BB(10 ng/mL)刺激不同时间(0、5、15、30 min),收集RNA确定转染效率和蛋白用于Western blot检测PDGF信号途径的变化。5.细胞膜蛋白和胞浆蛋白的提取培养的VSMCs,利用siRNA敲低ESDN表达,血清饥饿24 h后,应用PDGF刺激不同时间后,利用Invent公司Minute-~(TM)总膜和质膜提取试剂盒分别提取胞浆和胞膜蛋白,Western blot检测PDGFR-β在敲低ESDN表达后在细胞各组分中分布的不同。6.细胞表面PDGFR-β的测定为观察ESDN表达对VSMC表面PDGFR-β动态变化的影响,培养的大鼠VSMC应用siRNA敲低ESDN的表达后,在PDGF刺激不同时间(0、5、30 min)的培养基中加入生物素(0.15 mg/mL sulfo-NHS-SS-biotin,Pierce,Rockford,IL)对细胞表面蛋白进行共价标记,10 min后应用1×PBS缓冲液(137 mM NaCl,2.7 mM KCl,2 mM KH_2PO_4,10 mM Na_2HPO_4)清洗并终止反应,加入细胞裂解液(50 mM Tris pH 7.5,150 mM NaCl,0.5%脱氧胆酸钠,1%NP-40,0.1%SDS,1mM EDTA),临用前加入complete proteinase inhibitor(Roche Applied Sciences)和phosphatase inhibitor cocktails(Sigma-Aldrich),离心收集上清用于细胞总PDGFR-β的测定;应用链合亲霉素(Streptavidin-agarose beads,Upstate Biotechnology,Lake Placid,NY)收集生物素标记的蛋白,清洗后上样Western blot检测细胞表面PDGFR-β的变化。结果:1.平滑肌细胞特异性Esdn敲除小鼠基因型鉴定对Esdn~(-/-)小鼠;平滑肌细胞特异性敲除小鼠Cre~(+/-)Esdn~(flox/flox)小鼠及其对照Cre~(-/-)Esdn~(flox/flox)小鼠进行基因型鉴定。Esdn~(-/-)小鼠基因型鉴定引物(PCR扩增产物长度为360 bp):上游引物:5’-CAGCCAAACCTCCAGAAAAG-3’下游引物:5’-AAGCTTAAGTGATGTGACAG-3’Esdn~(flox/flox)小鼠基因型鉴定引物(280bp,野生型为230 bp)上游引物:5’-CAGCCAAACCTCCAGAAAAG-3’下游引物:5’-TCACAAGAGAGAGGGGTGCT-3’SM22 Cre小鼠基因型鉴定引物(阳性对照324 bp,Cre 100 bp)SM22-Cre上游引物:5’-GCGGTCTGGCAGTAAAAACTATC-3’SM22-Cre下游引物:5’-GTGAAACAGCATTGCTGTCACTT-3’SM22-Cre阳性对照上游引物:5’-CTAGGCCACAGAATTGAAAGATCT-3’SM22-Cre阳性对照下游引物:5’-TAGGTGGAAATTCTAGCATCATC-3’琼脂糖凝胶电泳结果显示在目的区域呈现清晰的条带,表明基因型鉴定正确,平滑肌细胞特异性Esdn基因敲除小鼠构建成功。提取不同基因型小鼠血管组织进行Western blot检测ESDN的表达,在Esdn~(-/-)小鼠血管组织中未检测到ESDN的表达,而在平滑肌细胞特异性基因敲除小鼠血管组织中ESDN的表达较对照小鼠显着下降,结果进一步证实了基因型鉴定正确,表明平滑肌细胞特异性基因敲除小鼠构建成功。2.ESDN缺失促进内膜损伤后的血管增生WT、Esdn~(-/-)小鼠结扎不同时间后取材,HE染色结果显示,随着结扎时间的延长,与对照组相比,Esdn~(-/-)小鼠血管中膜VSMC排列紊乱,内膜逐渐增厚,管腔狭窄,在结扎21 d时达到高峰。随后Western Blot检测平滑肌增殖标志蛋白OPN,平滑肌分化标志蛋白SMa-actin、SM22a的表达情况,结果显示,与对照组相比,随着结扎时间的延长,Esdn~(-/-)小鼠血管组织中OPN的表达均逐渐增加,结扎21 d时达到高峰;SMa-actin、SM22a的表达均逐渐降低,结扎21 d时达到最低。应用免疫荧光染色技术进一步观察ESDN表达对血管中膜SMC增生的影响,结果显示,在结扎21 d时,ESDN的表达与血管组织中SMC标志物SMa-actin的表达呈现共定位现象,表明ESDN可能通过影响中膜SMC的增殖进而影响血管增生过程。这一结果在平滑肌细胞特异性敲除小鼠得到了进一步的验证。3.ESDN表达下调促进PDGF的信号途径为进一步探讨ESDN缺失促进血管增生的分子机制,体外培养大鼠VSMC,siRNA敲低ESDN的表达,血清饥饿后,用10 ng/mL的PDGF-BB处理VSMC不同时间后收集蛋白,Western blot检测PDGF受体磷酸化及其下游信号途径的变化。结果显示,与对照组相比,ESDN表达下调促进PDGF诱导的PDGFR-β的磷酸化活化,在PDGF刺激15 min达到峰值。同时对与VSMC迁移和增殖相关的PDGF下游信号分子进行了检测,Western blot结果显示,与对照组相比,ESDN表达下调促进PDGF诱导的MAPK-ERK和Akt的磷酸化活化,在PDGF刺激后的5 min和15 min各自达到其峰值。这一结果表明,ESDN表达下调可能通过促进PDGF诱导的PDGFR-β的磷酸化活化,进而激活下游相关信号分子MAPK-ERK和Akt的磷酸化,加速VSMC的迁移和增殖过程,与整体动物实验得到的结果一致。4.ESDN敲低加速PDGF诱导的PDGFR-β胞吞过程研究表明,PDGF与其相应的受体PDGFR-β结合后引起受体磷酸化活化并经过胞吞作用进入细胞质基质,为确定ESDN表达是否能够调控PDGF诱导的PDGFR-β胞吞过程,应用生物素标记细胞表面蛋白并用Streptavidin富集并Western blot检测细胞膜上PDGFR-β的分布,结果表明ESDN敲低后细胞表面的PDGFR-β较对照组显著减少,表明ESDN表达下调促进PDGF诱导的PDGFR-β胞吞过程;同时提取了膜蛋白、胞浆蛋白检测了PDGFR-β在细胞不同组分的分布,结果表明与对照组相比,ESDN敲低显着减少了PDGF刺激后PDGFR-β在细胞膜的分布,而在同一时间点PDGFR-β在细胞胞浆的分布显著高于对照组。这些结果表明,ESDN表达下调促进PDGF的信号途径可能是通过增强PDGFR-β胞吞过程相关。结论:1.ESDN缺失小鼠和平滑肌细胞ESDN特异性敲除小鼠血管中膜平滑肌细胞增殖和新生内膜增生增强;2.ESDN表达下调促进血管平滑肌细胞PDGF信号途径;3.ESDN调控PDGF的信号途径的分子机制与其对PDGFR-β胞吞过程的调控有关。(本文来源于《河北医科大学》期刊2018-03-01）
姚立杰,王月飞,李永涛,沈雷,张善强[7]（2017）在《异甘草素对低氧诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞增生的抑制作用研究》一文中研究指出目的研究异甘草素对低氧诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)增生的影响及作用机制。方法 2017年3—6月,通过α-actin免疫组化染色对原代大鼠PASMCs进行鉴定,并取3~7代用于细胞实验;将细胞分成常氧组、低氧组、低氧+10μmol/L异甘草素组、低氧+25μmol/L异甘草素组、低氧+50μmol/L异甘草素组、低氧+100μmol/L异甘草素组,在常氧(21%O2)或低氧(3%O2)条件下培养24 h;CCK-8染色法检测异甘草素对低氧诱导的PASMCs增生的影响;DCFH-DA荧光探针检测异甘草素对低氧诱导的PASMCs活性氧(ROS)产生的影响;q RT-PCR检测异甘草素对低氧诱导的PASMCs NOX4 m RNA表达的影响。结果低氧组PASMCs的吸光度(OD)值(0.86±0.05)显着高于常氧组(0.57±0.02),低氧+25μmol/L异甘草素组OD值(0.75±0.02)较低氧组显着降低,而且随着给予异甘草素浓度的增加OD值呈明显下降趋势;DCFH-DA结果显示,低氧组PASMCs ROS的产生(13.36±0.36)%显着高于常氧组(3.05±0.18)%,低氧+25μmol/L异甘草素组ROS的产生(9.79±0.26)%较低氧组显着降低,而且随着给予异甘草素浓度的增加ROS的产生呈明显下降趋势;q RTPCR结果显示,低氧组PASMCs的NOX4 m RNA表达量是常氧组的2.15倍,低氧+25μmol/L异甘草素组NOX4m RNA表达量较低氧组显着降低,而且随着给予异甘草素浓度的增加NOX4 m RNA表达量呈明显下降趋势。结论异甘草素抑制低氧诱导的PASMCs增生,可能与抑制低氧诱导的PASMCs ROS的产生有关。(本文来源于《系统医学》期刊2017年20期）
陈兆雷[8]（2017）在《平滑肌祖细胞在动静脉内瘘静脉流出道内膜增生中的作用及调控机制研究》一文中研究指出第一部分流出道侧静脉内膜中平滑肌样细胞在自体动静脉内瘘失功中的作用及细胞炎症因子在增生静脉内膜中的表达情况目的研究接近吻合口的流出道侧静脉内膜平滑肌样细胞在自体动静脉内瘘失功中的作用,并研究细胞炎症因子在静脉内膜中的表达情况,推测其可能的调控机制。方法通过对人体AVF失功的静脉侧标本的研究,用免疫组化方法观察血管病变中的组织学改变,采用PCR及Western blot等方法对静脉内膜中的主要细胞炎症因子进行筛查,并对其表达水平进行检测,分析细胞炎症因子对静脉内膜增生的可能调节作用。结果AVF流出道侧静脉的内膜增生明显导致血管壁增厚(中位内膜厚度>67.3μm),内膜中可见大量的平滑肌样细胞及少量炎症细胞;静脉壁中RANTES及MCP-1、VEGF-A的表达明显升高,尤以RANTES及MCP-1明显;早期的细胞因子主要由炎症细胞分泌,而中后期可能由平滑肌样细胞自身分泌以维持平滑肌样细胞的持续增生。结论AVF失功的主要原因为流出道侧静脉内膜增生所致,增生内膜中以平滑肌样细胞为主并含有少量炎症细胞。平滑肌样细胞可能通过分泌RANTES及MCP-1等细胞炎症因子以维持内膜的中后期持续增生。第二部分MicroRNA-155通过对平滑肌样细胞表达RANTES的调控促进动静脉内瘘的静脉内膜增生目的研究miR-155对动静脉瘘流出道侧静脉内膜中平滑肌样细胞增生的调控机制。方法建立C57BL/6小鼠与C57BL/6背景的miR-155基因敲除鼠的颈动脉-颈外静脉的动静脉瘘动物模型。在AVF术后第1、2、3、4周等获取静脉侧标本,通过免疫组化研究静脉内膜的组织学改变,并分别通过PCR及Western blot方法在mRNA及蛋白水平分析内膜中细胞炎症因子的变化及平滑肌样细胞的增生情况。在体外实验中观察miR-155对于内膜中细胞炎症因子表达的调控及对平滑肌样细胞的影响。结果miR-155基因敲除能够显着降低平滑肌样细胞RANTES等细胞炎症因子表达,抑制平滑肌样细胞的增生,减轻内膜增生,降低AVF血管壁的狭窄性塑形。在miR-155~(-/-)小鼠的AVF中,静脉内膜中多种细胞炎症因子的表达明显降低,miR-155能够促进平滑肌样细胞中的RANTES的表达,促进内膜中平滑肌样细胞的增生及细胞外基质的表达。miR-155可通过ERK和NF-κB途径对RANTES的表达进行调控。结论miR-155通过ERK和NF-κB途径促进SMLCs表达RANTES来间接促进平滑肌样细胞的增生和细胞外基质的表达,导致内膜增生。第叁部分AVF中静脉外膜中的平滑肌祖细胞可内迁、分化为内膜中的平滑肌样细胞目的研究自体动静脉内瘘流出道侧静脉中平滑肌样细胞的来源,以及平滑肌祖细胞在AVF静脉内膜增生中的作用与迁移、增殖、分化机制。方法建立C57BL/6小鼠的自体动静脉内瘘的模型,以及C57BL/6小鼠与eGFP/转基因小鼠交叉骨髓移植后建立AVF模型,动态检测静脉内膜中炎症细胞及平滑肌细胞的标志物,明确内膜中的平滑肌样细胞的来源,用流式分选法将外膜中非骨髓源性eGFP阳性细胞进行分离培养,在体外进行诱导、分化,并进行干细胞标志Sca-1标记检测,对该群细胞进行鉴定,分析该群细胞迁移、分化、增生的机制。结果外膜中非骨髓来源的细胞具有祖细胞性质,可表达干细胞的标志Sca-1,能够迁移至内膜并分化成平滑肌样细胞;平滑肌祖细胞表达早期平滑肌细胞标志物SM-22α,但是不表达SM-MHC;miR-155可以通过调控RANTES的表达促进平滑肌祖细胞向内迁移、增殖及向平滑肌样细胞分化的能力。结论血管外膜中非骨髓细胞来源的平滑肌祖细胞可在细胞炎症因子作用下向AVF静脉内膜中迁移、分化为平滑肌样细胞并增殖。miR155可以通过对细胞炎症因子的调节对该过程进行间接的调控。(本文来源于《苏州大学》期刊2017-05-01）
尉希清,刘帅,牛珩,胡玲爱,张金国[9]（2016）在《黄芪甲苷对大鼠平滑肌细胞及颈动脉内膜增生的影响及机制研究》一文中研究指出目的通过细胞培养及建立大鼠颈动脉球囊损伤模型,观察黄芪甲苷对血管平滑肌细胞(VSMCs)及血管内皮损伤后内膜增生的影响,并初步探讨黄芪甲苷抑制内膜增生的可能机制。方法采用组织贴块法培养大鼠VSMCs,以重组大鼠肿瘤坏死因子(TNF-α,100 ng/m L)作为刺激因素,建立体外VSMCs增殖模型,应用CCK-8法检测黄芪甲苷(0、0.5、5、25、50μg/m L)对TNF-α诱导的VSMCs增殖能力的影响。采用Fogarty(2F)球囊导管制备大鼠颈总动脉球囊损伤模型,SD大鼠随机分为假手术组、模型组、黄芪甲苷(20、40、60 mg/kg)组,各组于造模前3 d开始ig给药,连续给药17 d,术后第15天,取损伤颈总动脉进行HE染色,光镜下观察血管内膜的形态学变化,并用计算机图像分析系统测定管腔面积、内膜面积、内膜面积/中膜面积;采用免疫组织化学法检测内膜增殖细胞核抗原(PCNA)和血小板源性生长因子(PDGF-BB)的表达。结果在TNF-α刺激下,VSMCs增殖活性与对照组相比均明显提高,差异显着(P<0.01),经黄芪甲苷预处理后,各质量浓度黄芪甲苷组细胞增殖均受到抑制,与TNF-α组相比差异显著(P<0.05),且抑制作用具有时间和浓度依赖性。颈总动脉球囊损伤模型中,模型组大鼠颈动脉内膜增生明显,管腔狭窄,与假手术组比较,内膜面积、内膜面积/中膜面积增大(P<0.01),管腔面积减小(P<0.01);与模型组比较,黄芪甲苷各剂量组内膜面积、内膜面积/中膜面积减小(P<0.05、0.01),管腔面积增大(P<0.05、0.01)。与假手术组比较,模型组大鼠颈总动脉血管内膜PCNA、PDGF-BB的阳性表达明显升高(P<0.01);与模型组比较,黄芪甲苷各组大鼠颈总动脉内膜PCNA、PDGF-BB的阳性表达明显降低(P<0.05),且呈剂量依赖性。结论黄芪甲苷能够以时间和剂量依赖方式抑制TNF-α诱导的VSMCs增殖;黄芪甲苷能够抑制颈总动脉球囊损伤大鼠颈总动脉内膜的增生,黄芪甲苷抑制生长因子PDGF-BB的表达可能是黄芪甲苷抑制球囊损伤大鼠颈总动脉内膜增生的机制之一。(本文来源于《中草药》期刊2016年19期）
石晓灏,陈建,周圣叶,邓林红[10]（2016）在《平滑肌层增生对气道管壁内应力分布影响的数值模拟研究》一文中研究指出许多慢性呼吸道疾病都伴随着气道管壁组织重塑,其中平滑肌肥大和增生直接影响气道的力学特性,进而因为气道内应力的分布不均,导致内壁出现局部应力刺激增加等现象。本研究基于气道的解剖结构,将其简化成为具有内壁、平滑肌层和外膜等叁层结构的中空管状结构,构建具有层结构的气道有限元模型,并用来分析在生理和病理情况下平滑肌增生对气道力学行为的影响。结果表明,在气道外膜层出现应力最小值;平滑肌层增厚和局部平滑肌的增生都会导致气道平滑肌层受到的应力值增加,同时在增生面积相同的情况下,平滑肌层的应力值随增生的数目增加而增加;平滑肌层增生的分布对气道力学性能有较大的影响,增生越集中,气道所受到的应力值越大。(本文来源于《生物医学工程研究》期刊2016年03期）
增生平滑肌论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的研究人参皂苷Rg_3对大鼠颈动脉损伤后新生内膜增生及平滑肌细胞凋亡的影响。方法 40只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和人参皂苷Rg_3低、高剂量(5、10 mg/kg)组,各10只,用球囊制备大鼠颈动脉损伤模型,术后次日ig给药,假手术组和模型组给予等量的生理盐水;14 d后取损伤的颈总动脉血管,用苏木精-伊红(HE)染色观察新生内膜组织形态学改变;采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的叁磷酸脱氧尿嘧啶缺口末端标记(TUNEL)法检测平滑肌细胞凋亡;Western blotting和qRT-PCR法检测损伤血管凋亡基因Fas、抗凋亡基因Bcl-2的表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠血管新生内膜明显增厚,内膜与中膜面积比明显增加,新生内膜区平滑肌细胞凋亡率显着增加,Fas、Bcl-2基因表达明显增加;与模型组比较,人参皂苷Rg_3低、高剂量组血管内膜增生明显减轻,内膜与中膜面积比明显下降,新生内膜区平滑肌细胞凋亡率明显增加,损伤血管Fas基因表达水平明显升高,Bcl-2基因表达水平明显降低。结论人参皂苷Rg_3可能通过促进平滑肌细胞的凋亡,从而减轻球囊损伤后血管内膜的增生。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
增生平滑肌论文参考文献
[1].束波,范芳.基质细胞衍生因子1(SDF-1)预处理的骨髓间充质干细胞移植减轻大鼠颈动脉内皮和平滑肌细胞增生[J].细胞与分子免疫学杂志.2019
[2].陈文明,赵永超,刘围围,龙禹哲,张赟.人参皂苷Rg_3对大鼠颈动脉损伤后内膜增生及平滑肌细胞凋亡的影响[J].中草药.2018
[3].赵浩民.脂肪分化相关蛋白基因敲除抑制血管平滑肌细胞增生与分化及减少血管内膜增生的实验研究[D].吉林大学.2018
[4].阎卉芳,徐昊,彭熙炜,朱嘉欢,邓常清.黄芪和当归配伍对大鼠血管内膜增生血管平滑肌细胞增殖的影响[J].中国临床药理学与治疗学.2018
[5].岳永强.血管紧张素Ⅱ1型受体相关蛋白促进血管平滑肌细胞凋亡并抑制内膜增生的机制研究[D].郑州大学.2018
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[8].陈兆雷.平滑肌祖细胞在动静脉内瘘静脉流出道内膜增生中的作用及调控机制研究[D].苏州大学.2017
[9].尉希清,刘帅,牛珩,胡玲爱,张金国.黄芪甲苷对大鼠平滑肌细胞及颈动脉内膜增生的影响及机制研究[J].中草药.2016
[10].石晓灏,陈建,周圣叶,邓林红.平滑肌层增生对气道管壁内应力分布影响的数值模拟研究[J].生物医学工程研究.2016
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