(西南医科大学附属中医医院四川泸州646000)
蛭龙活血通瘀胶囊系由黄芪、水蛭、地龙、大血藤等组成的复方制剂,具有益气活血化瘀通络的功效,临床用于急性缺血性脑病。本研究采用线栓法阻断大鼠大脑中动脉所致脑缺血再灌注模型,观察蛭龙活血通瘀胶囊在改善大鼠脑梗塞面积及脑血栓形成等方面的影响,探讨其在治疗急性脑梗死的作用机制。
l材料与方法
1.1试验药物
蛭龙活血通瘀胶囊,由西南医科大学附属中医院制剂室提供。步长脑心通胶囊,咸阳步长制药有限公司产品。
1.2试剂
IL-1、IL-10、NOS试剂盒,武汉博士德生物工程有限公司。
1.3动物
健康雄性成年SD大鼠,体重(250-300)g,清洁级,由西南医科大学动物实验中心提供。
1.4方法
1.4.1实验分组:150只健康雄性SD大鼠随机分为6组,即假手术组、模型组、蛭龙活血通瘀胶囊治疗组(高剂量、中剂量、低剂量)、步长脑心通对照组。
1.4.2药物干预:蛭龙活血通瘀胶囊成人的临床用药量为4.8g/d。按人体用量的5、10、20倍,换算为动物高、中、低剂量组的用药量,分别为1.6g/kg/d、0.8g/kg/d、0.4g/kg/d;对照组按成人用量的10倍给药,即0.8g/kg/d。假手术组及模型组给予等体积的生理盐水灌胃,每天一次,连续7天。
1.4.3模型制备:在末次灌胃后2小时,建立大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型。以Longa[1]法为标准建立模型。脑缺血模型建立2小时后,拔出线栓,扎紧备线,固定纤维缝合,每只大鼠注射4万单位庆大霉素以预防感染。假手术组条件同上,但仅将颈外动脉游离。术中体温用烤灯维持在37℃-37.5℃。术后单笼饲养,放置恒温37℃,保持体温。造模后的动物在自然苏醒后,出现右侧Horner征,提尾左前肢内收屈曲,爬行时向左侧划圈者为手术成功的标志。
1.4.4检测指标
1.4.4.1动静脉旁路血栓检测
仰卧位固定大鼠,分离气管,并分离右颈总动脉及左颈外静脉,在聚乙烯管的中段放入一根8cm的丝线并充满生理盐水溶液,两端插管中充满25u/ml肝素,当聚乙烯管的一端插入左颈外静脉后,在聚乙烯管的另一端插入右颈总动脉。打开动脉夹,血液从右颈总动脉流至聚乙烯管内,返回左颈外静脉。开放血流15分后中断血流,迅速取出在右颈总动脉及左颈外静脉之间聚乙烯管内的丝线在电子天枰上称其重量,总重量减去丝线重量即得血栓湿重。
1.4.4.2脑梗塞面积检测
大鼠断头取脑后放置于脑切塑料模型中进行冠切,然后将脑组织冠切片置于2%TTC中染色,恒温、37℃避光孵育30分钟,最后将脑切片放入4%多聚甲醛中固定。采用病理图像分析仪测量每张冠切片的脑梗塞面积。
注:与假手术组比较▲P<0.05,▲▲P<0.01;与模型组比较●P<0.05,●●P<0.01;与低剂量组比较★P<0.05,★★P<0.01。
3.讨论
缺血性脑梗死多为脑血管痉挛或栓塞引起脑组织缺血缺氧而致能量耗竭,兴奋性氨基酸释放,自由基的产生,共同作用致脑组织水肿,神经细胞变性坏死,从而出现脑坏死区域。现代研究表明[2],水蛭素可增加脑血流量,促进大鼠实验性脑血肿的吸收,减轻血肿周围炎性反应性水肿,改善局部血液循环,保护脑组织。近年来研究证实,黄芪的有效成分具有清除氧自由基、减轻脑梗死区脑组织过氧化损伤和迟发性神经原损害的作用,从而减少脑梗塞面积。
近年来对缺血性脑血管病的血液学方面研究提示,[3]脑缺血时无氧代谢增加,红细胞膜脂质过氧化发生,血粘度增高,血栓形成,血液灌注明显减少,从而加重脑组织缺血缺氧。在血栓的形成过程中,血小板聚集是起始步骤,进而纤维蛋白形成稳固的血栓[4]。而动静脉旁路血栓类似于动脉中的白色血栓,能反映整体动脉血流中血小板的黏附聚集功能。脑缺血模型组的血栓重量显著升高,提示血液的高黏高凝状态加内皮细胞损伤极易血栓形成或栓塞。故抑制血小板功能,减轻脑血栓的形成在脑缺血治疗中是十分重要的措施。
本文实验结果表明:蛭龙活血通瘀胶囊组及对照组均能显著降低血栓重量且脑梗塞面积明显缩小,表明蛭龙活血通瘀胶囊可明显改善脑缺血后微循环障碍,改善气血灌注,降低血管阻力,扩张脑血管,增加脑血流量,抑制血栓形成,缩小脑梗塞面积,从而起到脑保护作用,也进一步显示了中药复方制剂在治疗脑血管疾病中的潜力。
参考文献
[1]赵建国.脑梗死[M].北京:人民卫生出版社,2006:1
[2]蒋洪,刘乐乐,等.中药红藤化学成份及临床作用的研究进展[J].内蒙古科技与经济,2002,10(3):120-121
[3]李泓.脑脉宝对大鼠脑缺血再灌注后血液流变性及血小板形态的影响[J].微循环学杂志,1998,8(2):3-5
[4]王宏涛,靳洪涛等.异亚丙基莽草酸抗血栓作用的实验研究[J].药学学报,2002,37(4):245-248