导读:本文包含了分离扩增论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:细胞,基因,干细胞,荧光,布鲁,转染,铜绿。
分离扩增论文文献综述
田小芳[1]（2019）在《竹柏内生菌的分离筛选及DYSL5、LR5 16SrDNA的扩增》一文中研究指出以竹柏为实验材料,采用传统的组织表面消毒法,对其内生菌进行分离,总共获得6株细菌,2株真菌。以香蕉炭疽病菌[Colletotrichum musae (Brek&Curt) Arx]、灰斑病菌[Pestalotiopsis eriobotryfolia (Guba) Chen et Chao]、芒果炭疽病菌(Colletotrichumg loeosporiordes Penz)等8种病原菌作为靶标菌,对分离得到的内生菌株进行皿内拮抗筛选,获得拮抗效果较好的内生细菌ZB2。此外,对DYSL5和LR5的16SrDNA序列进行扩增,为其鉴定奠定了基础。(本文来源于《热带农业工程》期刊2019年04期）
何琪富,汤承,郭紫晶,谭烁,张斌[2]（2019）在《牦牛源牛冠状病毒部分基因的扩增、序列分析及病毒分离鉴定》一文中研究指出本试验的目的是对青藏高原地区牦牛进行牛冠状病毒(bovine coronavirus,BCoV)的分子流行病学调查,并分离牦牛源BCoV。采用RT-PCR方法检测西藏、青海、四川、云南的犊牦牛腹泻粪便中BCoV,并扩增其S、HE及N基因片段;选取阳性样本进行BCoV分离。结果显示:从336份犊牦牛腹泻粪便中检出232份BCoV阳性,检出率为69.05%。序列分析和系统发育分析显示,本试验克隆的32个BCoV阳性样本中的S1亚基序列、HE基因片段和N基因片段均有独特的遗传进化趋势;首次成功分离到1株牦牛源BCoV,蚀斑纯化后病毒TCID50为10-7.17·0.1mL-1,鉴定结果显示该毒株S基因发生了重组事件。本试验结果表明青藏高原牦牛源BCoV感染率很高,且有独特的遗传进化趋势。(本文来源于《畜牧兽医学报》期刊2019年02期）
王晶晶,甄亚平,刘茂琪[3]（2018）在《不同培养条件对孕中期羊水干细胞分离及扩增能力的影响对比》一文中研究指出目的研究不同培养条件对孕中期羊水干细胞分离与扩增能力的影响。方法选择我院2016年8月至2017年8月因医疗指针引产的孕妇20例,经腹部抽取10-20 m L羊水,收取细胞并根据培养条件分为4组,包括:1.LD+10%胎牛血清,2.LD+20%胎牛血清,3.LD+15%胎牛血清+4μg/L碱性成纤维生长因子,4.LD+10%胎牛血清+0.1%明胶,对各组行染色体核型分析。结果四组细胞的集落数与传代后细胞扩增能力均无明显差异,P>0.05。结论孕中期羊水能够成功分离且获得干细胞特性细胞群,适合的血清浓度能够增加羊水干细胞扩增培养的临床效率。(本文来源于《世界最新医学信息文摘》期刊2018年50期）
赵莉佩[4]（2017）在《中国不同地区球形孢子丝菌临床分离株的扩增片段长度多态性分析及表型特征研究》一文中研究指出背景:孢子丝菌病是由双相型真菌申克孢子丝菌复合体(Sporothrix schenckii complex)感染引起的常见深部真菌病,在世界各地广泛流行,可累及皮肤甚至造成系统性感染,迁延不愈。最近分子生物学研究发现申克孢子丝菌是由6个亲缘种构成的复合体,包括狭义的申克孢子丝菌(Sporothrix schenckii sensu stricto)、巴西孢子丝菌(Sporothrix brasiliensis)、球形孢子丝菌(Sporothrix globosa)、卢艾里孢子丝菌(Sporothrix luriei)、墨西哥孢子丝菌(Sporothrix mexicana)和苍白球孢子丝菌(Sporothrix pallida)。球形孢子丝菌是我国孢子丝菌病的主要优势菌种,然而我国不同地区来源的临床菌株表型仍存在差异,且部分研究表明存在一定的遗传变异性,因此深入研究球形孢子丝菌是否存在基因型、表型特征、药物敏感性等的差异具有重要意义。目的:对我国不同地区孢子丝菌病的临床分离株进行种系发生分析及表型特征分析,利用扩增片段长度多态性(Amplified fragment length polymorphism,AFLP)研究我国不同地区来源的球形孢子丝菌临床分离株基因多态性,并探讨其与临床分型、地理来源、药物敏感性及菌株生长速度的相关性。方法:1.收集2009年至2013年来自中国8个不同省市孢子丝菌病的225株临床分离株及患者临床资料。对所有临床分离株的钙调蛋白(CAL)基因片段进行扩增并测序,将CAL序列上传至Genbank数据库进行比对,利用MEGA 6.0软件,采用Neighbor-Joining法进行系统进化分析构建种系发生树。2.通过限制性内切酶组合Eco RⅠ和Saq AⅠ,对AFLP分析中各实验步骤进行优化,并用64对引物进行筛选,选取1对DNA多态性较好的引物;采用优化后的AFLP反应体系,对225株临床分离株进行AFLP分析,利用NTSYS-pc version 2.10对结果进行聚类分析。3.将225株临床分离株接种于马铃薯琼脂培养基(PDA)中,分别置于30℃、35℃和37℃温箱中,于7天、14天、21天分别观察菌落直径,计算生长速度;同时将临床分离株进行碳源同化实验。4.参照Clinical and Laboratory Standards Institute(CLSI)颁布的微量液基稀释法M38-A2方案,选用临床分离株的菌丝相,对来源于不同AFLP基因型别,分别包括Ⅰ型(n=10)、Ⅱ型(n=10),Ⅲ型(n=2)、Ⅳ型(n=9)、Ⅴ型(n=4)、Ⅵ型(n=2)、Ⅶ型(n=3)、Ⅷ型(n=3),共43株临床分离株进行体外药物敏感性实验,检测的抗真菌药物包括氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑、特比萘芬、两性霉素B、泊沙康唑、卡泊芬净、阿巴康唑。结果:1.建立球形孢子丝菌AFLP反应的最佳体系:约1000ng模板DNA经限制性内切酶Fast Digest Eco RⅠ与Fast Digest Saq AⅠ(各1U),37℃酶切5min;取8μl酶切液加入1μl Eco RⅠ接头、1μl Saq AⅠ接头、T4DNA连接酶2.5U,25℃连接1h;20μl扩增体系,取稀释20倍的连接产物5μl,加入Mg2+2m M、Taq酶1U、d NTPs 0.2m M each、引物0.1μM;20μl扩增体系,取稀释20倍的预扩增产物5μl,加入Mg2+1m M、Taq酶1.5U、d NTPs 0.15m M each、引物0.06μM。选择性扩增引物采用E4:GACTGCGTACCAATTCACT,M1:GATGAGTCCTGAGTAACAA效果较好。2.通过对225株临床分离株的CAL基因序列鉴定,结果显示所有菌株均为球形孢子丝菌,系统进化树显示各地区的球形孢子丝菌可分为3个Subgroup(命名为globosaⅠ,globosaⅡ,globosaⅢ),globosaⅠ最常见,首次发现globosaⅢ。AFLP聚类分析可得到8个区分明显的型别(命名为I至Ⅷ),其中Ⅰ型(23%)、Ⅱ型(41%)和Ⅳ型(22%)最为常见。来自长春的临床分离株主要分为Ⅱ型(35/60)和Ⅳ型(25/60),四平的临床分离株主要聚类于Ⅱ型(23/31),吉林市的临床分离株(18/20)和白城的临床分离株(12/13)以Ⅰ型为主,Ⅲ型(n=2)和Ⅷ型(n=3)全部为松原的临床分离株。AFLP基因分型和地理来源之间存在一定的相关性,但并未发现与临床分型的相关性。3.所有球形孢子丝菌在PDA上于30℃培养21天后,菌落直径达16~42mm,于35℃培养21天后,菌落直径达3~15mm,而大部分临床分离株(218/225)在37℃呈限制性生长(菌落直径达1.5~5.5mm),少数(7/225)不能生长;所有球形孢子丝菌临床分离株均能同化蔗糖不能同化棉子糖;对于球形孢子丝菌的菌丝相,特比萘芬表现最好的抗真菌活性,MIC值为0.03~8μg/ml,GM值为0.05μg/ml;其次为泊沙康唑、阿巴康唑、卡泊芬净,MIC值分别为0.5~>16μg/ml、4~16μg/ml、0.25~>16μg/ml,GM值分别为2.99μg/ml、8.26μg/ml、9.55μg/ml;而伊曲康唑、伏立康唑、两性霉素B、氟康唑的MIC值均较高,分别为1~>16μg/ml、8~>16μg/ml、>16μg/ml、>64μg/ml。统计学分析显示,每种抗真菌药对不同临床分型、不同基因型别、不同地理来源的球形孢子丝菌的MIC值无明显差异。结论:1.球形孢子丝菌为我国孢子丝菌病的主要致病菌种。2.在种系发生上,球形孢子丝菌可进一步分为3个亚组。我国globosaⅠ最常见,首次发现globosaⅢ。3.采用AFLP方法,利用Eco RⅠ-ACT/Saq AⅠ-CAA引物可将球形孢子丝菌分为8个主要基因型别。孢子丝菌病的临床分型与AFLP基因分型无相关性。4.中国南北区域的球形孢子丝菌AFLP基因分型有明显的地域分布特征,其中吉林省的基因分型与省内城市分布有一定的相关性。5.大部分球形孢子丝菌在37℃呈限制性生长,仅有少数不能生长;球形孢子丝菌能同化蔗糖,不能同化棉子糖;八种抗真菌药物中,特比萘芬的抗真菌活性最高,其次为泊沙康唑、阿巴康唑、卡泊芬净,而伊曲康唑、伏立康唑、两性霉素B、氟康唑的MIC值均较高。球形孢子丝菌对药物的敏感性与孢子丝菌病致病的临床分型、菌株的基因分型、地理来源无关。(本文来源于《吉林大学》期刊2017-11-01）
安洁,王蕾,吴涛,张玉龙,周欠欠[5]（2017）在《小鼠NK细胞体内扩增、分离纯化的方法研究》一文中研究指出目的为获得一定数量高纯度的自然杀伤细胞(natural killer cells,NK),拟采用水动力高压转染技术实现Flt-3配体(Flt-3 ligand,FL)基因在小鼠肝的高效表达,以刺激脾NK细胞体内扩增,随后通过优化免疫微磁珠分选(MACS)技术获取大量、高纯度NK细胞,为细胞治疗提供支撑。方法 C57BL/6小鼠经多次水动力高压转染FL表达质粒后,流式细胞术检测脾NK细胞的扩增程度及表型变化,并通过MACS技术分离纯化NK细胞。结果与一次水动力高压转染FL目的质粒的结果相比,两次水动力转染后小鼠脾明显增大,淋巴细胞绝对数量增加(6.02±1.15)倍,NK细胞亚群比例增加(2.07±0.39)倍,NK细胞亚群绝对数量增加(12.49±2.39)倍。同时,FL刺激对NK细胞活性及表型无明显影响。最后,经偶联CD5(Ly-1)磁珠阳选和去除T、B等多种杂细胞磁珠阴选相结合的双重分选方法,可获得纯度为(83.81±0.92)%的NK细胞,较单独阴选纯度提高(1.60±0.02)倍。结论经两次FL表达质粒水动力高压转染,可在不影响NK细胞活性及表型的前提下,实现其在小鼠脾的大量扩增。阳选和阴选相结合的双重MACS分选技术能有效去除T、B等杂细胞影响,获取高纯度NK细胞,为肿瘤细胞免疫治疗奠定基础。(本文来源于《军事医学》期刊2017年10期）
苏良,裴瑞青,杨柳青,欧新华,申晓君[6]（2017）在《长沙人间布鲁菌分离株omp25基因扩增和系统进化分析》一文中研究指出目的了解长沙地区人间布鲁菌omp25基因的序列特征并阐明其系统进化关系,为布鲁菌病防控以及omp25基因克隆与表达研究提供参考。方法根据Gen Bank公布的羊种布鲁菌16M的omp25基因序列设计1对PCR引物,采用PCR法从长沙地区布鲁菌分离株基因组中扩增omp25基因,产物用凝胶电泳进行分析后进行双向核苷酸序列测定,测序结果用DNAstar 7.1进行分析,将测序结果提交Gen Bank,并利用Mega 7软件构建布鲁菌长沙分离株系统进化树。结果 41株布鲁菌成功扩增出omp25基因片段,片段长度约640 bp,通过测序后Blast同源性分析,证实41株菌株均为羊种布鲁菌,长沙分离株与10株羊种布鲁菌序列100%相同,进化树显示长沙分离的布鲁菌和国内外羊种布鲁菌位于同一进化分支上,同广西的LA1105参考株亲缘关系最近。结论长沙地区人间布鲁菌分离株omp25基因序列与参考菌株序列同源性高,且与羊种布鲁菌在同一分支,表明omp25基因序列是一个保守序列。该研究结果可为布鲁菌的分子生物学鉴定和诊断试剂的研制提供参考。(本文来源于《中国热带医学》期刊2017年08期）
李猛[7]（2017）在《胎盘来源造血干细胞分离提取和体外扩增研究》一文中研究指出引言研究表明自怀孕第6周至妊娠结束,胎盘中均含有HSC(Hematopoietic stem cell,HSC),且具有细胞数量大,获取便捷,使用过程中不存在伦理问题等优点。目前针对脐血(Umbilical cord blood,UCB)来源造血干/祖细胞(Hematopoietic stem and progenitor cell,HSPC)的体外扩增临床研究已经取得成功,采用扩增后UCB来源HSPC进行移植可以有效解决HSC数量不足造成的造血恢复延迟等问题,数据表明移植后干细胞较未扩增UCB来源HSPC具有相同植入率。胎盘来源HSC与UCB来源HSC同属于围产期干细胞,研究表明其较UCB来源HSC更为原始,目前国内外尚无针对胎盘来源HSC体外扩增的文献报道。目的本研究旨在通过比较机械处理联合化学酶消化法及AMD3100循环灌注法提取人胎盘来源HSC的效果,构建适用于未来临床应用的胎盘来源HSC分离提取方法,得到来源清楚组份确定的HSC;基于模拟造血微环境的体外扩增理论,探讨UCB中CD34+细胞在间充质干细胞(Mesenchymal stem cell,MSC)共培养体系、UM171联合细胞因子扩增体系以及UM171联合细胞因子与MSC共培养体系叁种不同扩增体系下体外扩增效果;依据优化的胎盘来源HSC提取方法,对胎盘来源HSC进行分离提取,并基于模拟造血微环境理论构建的扩增体系对提取得到的CD34+细胞行体外扩增,评价扩增效果及扩增后HSPC功能,为拓展临床HSC来源做出尝试。方法1、健康足月顺产胎盘依照处理方法不同分为两组进行胎盘来源HSPC体外提取:A组(机械处理联合化学酶消化组)、B组(AMD3100循环灌注组),每组处理胎盘5个。A组将胎盘经预处理后解剖成小组织块,采用磷酸盐缓冲液(Phosphate buffered saline,PBS)清洗后收集清洗液(命名为A1),采用胶原酶、透明质酸酶、DNA酶对清洗后的胎盘组织块进行消化,并置于100目及200目滤网研磨,收集消化液(命名为A2)。B组采用智能蠕动泵连接脐动静脉,采用生理盐水(Normal saline,NS)NS及含AMD3100的NS分步对胎盘脉管系统行循环灌注,分别收集两次灌洗液(命名为B1及B2)。比较两种方法收集得到各类细胞总数,并分别测定两种方法不同阶段收集得到细胞数量及其流式表型情况;2、采集到的UCB进行磁珠分选后得到纯净的CD34+细胞,脐带剪至小块后采用含有0.2%Ⅱ型胶原酶的DMEM/F12培养基进行消化后,进行贴壁传代培养。UCB来源CD34+细胞及脐带来源MSC分为以下四组进行体外扩增培养10天:A组(对照组)、B组(UM171培养组)、C组(MSC共培养组)、D组(UM171联合MSC共培养组)。四组细胞均采用StemSpan培养基,并添加100 ng/ml干细胞因子(Stem cell factor,SCF),100 ng/ml FMS样酪氨酸激酶3配体(FMS-like trysine kinase 3ligand,FLT3),50 ng/ml促血小板生成素(thrombopoietin,TPO),CD34+按照1×105/孔密度接种于六孔板中,其中B组在培养基中额外添加100 ng/ml UM171,C组采用分离得到的第叁代脐血同源脐带MSC作为基质细胞,待贴壁90%融合采用60Co照射,剂量为10Gy,D组在C组实验条件基础上同时添加100 ng/ml UM171,细胞培养10天后比较不同组别间细胞扩增倍数及流式表型和集落培养情况;3、分别将AMD3100循环灌注法收集的NS灌洗液及AMD3100灌洗液经免疫磁珠纯化,采用UM171联合MSC共培养方法分别对纯化后的胎盘来源CD34+细胞进行体外扩增培养,验证其扩增效果及流式表型和集落培养情况。结果1、A组与B组收集得到的TNC分别为(45.19±9.41)×107和(42.69±11.19)×107,二者无统计学差异;收集得到的CD34+细胞数(12.98±3.62)×107和(1.87±0.87)×107,二者比较,p=0.00,具有显着统计学差异;收集得到的CD133+细胞数分别为(1.16±0.61)×107和(1.15±0.63)×107,二者无统计学差异;A组收获的细胞液A1中含有TNC为(6.76±2.13)×107,其中CD34+CD38-比例为(1.14±0.56)%。收获的细胞液A2中含有TNC为(38.44±7.33)×107,其中CD34+CD38-比例为(30.31±10.75)%;B组收获的细胞液B1中含有TNC为(15.11±6.03)×107,其中CD34+CD38-比例为(0.72±0.34)%。收获的细胞液B2中含有TNC为(27.58±11.14)×107,其中CD34+CD38-比例为(5.56±1.78)%;2、分离得到的脐带MSC传代培养后细胞状态良好,流式检测发现其高表达CD105,CD73,CD90,不表达CD14,CD34,CD19,CD45,HLA-DR,SSEA-4含量约在1%,经过诱导培养后可以分化成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞。CD34+细胞在不同条件下体外培养10天后发现,对照组细胞总数扩增3.7倍,CD34+细胞扩增3.5倍,组别间无明显差异。UM171培养组总有核细胞数扩增14倍,CD34+细胞扩增13.5倍;MSCs共培养组总有核细胞数扩增11倍,CD34+细胞扩增10倍;联合培养组总有核细胞数扩增达22倍,CD34+细胞扩增21倍。UM171联合MSCs组得到CD34+CD38-细胞比例为91.49±2.67%,较MSCs及UM171组(分别为(78.11±2.34)%,(87.66±1.48)%)均在显着差异,含UM171培养体系CD133细胞比例较单独MSCs培养组存在差异,扩增后细胞集落培养14天后,各系集落形成良好,UM171扩增组细胞较MSCs扩增组在红系及粒系形成能力方面存在优势。3、胎盘NS灌洗液中CD34+细胞经10d培养后细胞总数扩增17倍,CD34+细胞扩增14倍;胎盘AMD3100灌洗液中CD34+细胞经10天培养后几乎全部死亡。脐血对照组与胎盘NS灌洗组扩增后细胞在TNC、CD34+细胞总数、CD133+细胞总数均存在统计学差异,其中胎盘NS灌洗组CD34+CD38-比例为(82.70±6.89)%;扩增后脐血来源及胎盘NS灌洗液中CD34+各谱系集落形成能力良好,胎盘NS灌洗液中CD34+细胞在粒系形成能力方面较未扩增脐血CD34+细胞存在差异。结论1、机械处理联合化学酶消化法以及AMD3100循环灌注法均可以对胎盘来源CD34+细胞进行有效收集,其中AMD3100循环灌注法在保证细胞收集数量的同时可以有效降低细菌污染风险,并可降低母体组织对胎盘来源HSC的影响,收集得到的CD34+细胞经免疫磁珠分选后纯度较高,较机械处理联合化学酶消化法在收集胎盘来源HSC上具有更大的优势;2、脐带血间充质干细胞作为细胞滋养层可提高CD34+细胞体外扩增效果,UM171在扩增过程中可较好的保持细胞干性,二者联合应用扩增效果最佳,建立的脐带间充质干细胞联合UM171对脐血源CD34+细胞的扩增方法可用于CD34+细胞体外扩增培养。3、经AMD3100循环灌注法收集的NS灌洗液及AMD3100灌洗液中CD34+细胞在脐带MSC联合细胞因子及UM171培养体系中扩增效果存在明显差异,其中NS灌洗液中CD34+细胞扩增效果可达17倍,其中较为原始的CD34+CD38—细胞比例达82%,扩增后细胞集落培养实验表明其具有与脐血来源扩增后CD34+细胞同样的谱系重建能力。AMD3100灌洗液中CD34+细胞在该体系中不能进行有效扩增,其细胞来源及功能尚需进一步研究。(本文来源于《中国人民解放军军事医学科学院》期刊2017-06-01）
王伟,吕峰,金鑫,艾麦提·牙森,李德卫[8]（2017）在《小鼠胚胎肝祖细胞的分离和扩增培养》一文中研究指出目的从胎龄14.5 d的C57小鼠胚胎肝脏中分离、培养小鼠胚胎肝祖细胞(m HPCs),并将其诱导分化为胆管细胞。方法用荧光激活细胞筛选法(FACS)分选DLK1表面抗原阳性的小鼠胚胎肝细胞,并和小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)Transwell共培养或者单独培养。细胞免疫荧光检测刚分选和共培养4和6 d的DLK1~+细胞的甲胎蛋白(AFP)、白蛋白(ALB)及细胞角蛋白19(CK19)抗原的表达。结果体外共培养时,大部分DLK1~+细胞分裂增殖明显,呈葡萄状聚集生长。第4天,部分细胞开始贴壁增殖,形态开始变成梭形。结果显示,分选的DLK1~+细胞表达AFP和少量ALB,但不表达CK19;在共培养的第4天其开始表达CK19,和微弱表达ALB;第6天,其高表达CK19,而几乎不表达的ALB。结论应用FACS技术成功从E14.5胎肝细胞中分选出DLK1~+细胞并鉴定其大部分为mHPCs,并可在体外与MEFs Transwell共培养的条件下,诱导培养其分化为胆管细胞。(本文来源于《基础医学与临床》期刊2017年05期）
白元斌[9]（2017）在《禽腺病毒血清4型的分离鉴定及环介导等温扩增技术诊断方法的建立》一文中研究指出禽腺病毒血清4型能引起严重的心包积液综合征,又称“安卡拉”病。2013年以来该病在我国河南、江苏、河北、陕西等地大面积流行,给家禽养殖业造成了巨大的经济损失。本研究从疑似心包积液综合征的发病鸡场采集发病和病死鸡肝脏组织分离到一株病毒。根据GenBank已公布禽腺病毒Hexon基因序列设计特异性PCR检测引物,经PCR检测获得阳性结果。核酸序列比对和遗传进化树分析表明,分离毒株为禽腺病毒血清4型(FAdV-4)。根据GenBank已公布FAdV-4 Hexon基因序列,设计两对LAMP引物,参照LAMP操作指南建立了禽腺病毒血清4型的LAMP检测方法,并与普通PCR检测方法进行了比较研究。试验结果如下:1.采集疑似FAdV-4感染鸡的肝脏,经适当处理后接种9日龄非免疫鸡胚,接种后3~4 d鸡胚开始出现死亡,死亡鸡胚出现胚体卷曲,全身发红,胚体发育不良,明显小于正常同日龄鸡胚。剖检见肝脏肿大出血、表面有灰白色坏死点或呈土黄色。收取感染鸡胚的尿囊液,通过胸肌注射感染健康非免疫的20日龄白羽艾维因肉鸡,感染24 h后开始发病,72 h出现死亡。病死鸡剖检观察到和自然感染一样的病理变化:心包内充盈大量淡黄色液体,肝脏肿大表面有出血点或土黄色坏死斑块。对照组鸡未出现任何临床病理变化,剖检也未见异常。2.依据FAdV-4 Hexon基因序列设计一对PCR检测引物,对含有疑似FAdV-4的鸡胚尿囊液进行PCR检测,回收FAdV阳性PCR检测产物连接载体,测定克隆的部分Hexon基因核酸序列。序列比对结果显示分离毒株与禽腺病毒血清4型江苏株(KU569296.1)同源性高达100%,与火鸡出血性肠炎病毒(AY849321.1)同源性为31.5%、与减蛋综合征病毒(Y09598.1)同源性为30.8%,系统进化树分析显示分离毒株与FAdV-4属同一分支。3.以分离毒株作为FAdV-4阳性模板,以禽腺病毒Hexon基因序列设计两对LAMP检测引物,建立了FAdV-4的LAMP检测方法,扩增产物加入1000×SYBR Green I 1μL,出现黄绿色荧光为FAdV-4阳性,颜色未变化为FAdV-4阴性。该方法的最佳反应温度为61℃,反应时间30 min。与普通PCR检测相比LAMP方法具有更高的灵敏度,检测下限为6.4 fg/μL。对采集的临床发病鸡的21份肝脏样品进行检测,常规PCR检出4份FAdV-4阳性,LAMP方法检出6份FAdV-4阳性,LAMP方法比常规PCR检出率高。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2017-05-01）
林群,冯洁仪,黄金华,黄少敏,吴智刚[10]（2016）在《应用环介导等温扩增技术对分离自呼吸系统感染铜绿假单胞菌的快速检测》一文中研究指出目的:建立环介导恒温扩增技术(LAMP)快速检测铜绿假单胞杆菌的方法。方法选取分离自呼吸系统感染的铜绿假单胞杆菌152例,针对铜绿假单胞菌菌种特异性基因ETA建立LAMP扩增反应,研究反应灵敏度、特异性以及实际应用。结果:PCR法所能检测到的最低DNA量为132 pg,而LAMP法则为132 fg,LAMP法比PCR法的灵敏度高1 000倍。LAMP法对标准菌株以及分离自呼吸系统感染的152株铜绿假单胞菌,检出率与特异性分别达94.7%与100%。结论:LAMP是一种可应用于对呼吸系统感染铜绿假单胞菌的灵敏、特异快速检测方法。(本文来源于《实用医学杂志》期刊2016年16期）
分离扩增论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本试验的目的是对青藏高原地区牦牛进行牛冠状病毒(bovine coronavirus,BCoV)的分子流行病学调查,并分离牦牛源BCoV。采用RT-PCR方法检测西藏、青海、四川、云南的犊牦牛腹泻粪便中BCoV,并扩增其S、HE及N基因片段;选取阳性样本进行BCoV分离。结果显示:从336份犊牦牛腹泻粪便中检出232份BCoV阳性,检出率为69.05%。序列分析和系统发育分析显示,本试验克隆的32个BCoV阳性样本中的S1亚基序列、HE基因片段和N基因片段均有独特的遗传进化趋势;首次成功分离到1株牦牛源BCoV,蚀斑纯化后病毒TCID50为10-7.17·0.1mL-1,鉴定结果显示该毒株S基因发生了重组事件。本试验结果表明青藏高原牦牛源BCoV感染率很高,且有独特的遗传进化趋势。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
分离扩增论文参考文献
[1].田小芳.竹柏内生菌的分离筛选及DYSL5、LR516SrDNA的扩增[J].热带农业工程.2019
[2].何琪富,汤承,郭紫晶,谭烁,张斌.牦牛源牛冠状病毒部分基因的扩增、序列分析及病毒分离鉴定[J].畜牧兽医学报.2019
[3].王晶晶,甄亚平,刘茂琪.不同培养条件对孕中期羊水干细胞分离及扩增能力的影响对比[J].世界最新医学信息文摘.2018
[4].赵莉佩.中国不同地区球形孢子丝菌临床分离株的扩增片段长度多态性分析及表型特征研究[D].吉林大学.2017
[5].安洁,王蕾,吴涛,张玉龙,周欠欠.小鼠NK细胞体内扩增、分离纯化的方法研究[J].军事医学.2017
[6].苏良,裴瑞青,杨柳青,欧新华,申晓君.长沙人间布鲁菌分离株omp25基因扩增和系统进化分析[J].中国热带医学.2017
[7].李猛.胎盘来源造血干细胞分离提取和体外扩增研究[D].中国人民解放军军事医学科学院.2017
[8].王伟,吕峰,金鑫,艾麦提·牙森,李德卫.小鼠胚胎肝祖细胞的分离和扩增培养[J].基础医学与临床.2017
[9].白元斌.禽腺病毒血清4型的分离鉴定及环介导等温扩增技术诊断方法的建立[D].西北农林科技大学.2017
[10].林群,冯洁仪,黄金华,黄少敏,吴智刚.应用环介导等温扩增技术对分离自呼吸系统感染铜绿假单胞菌的快速检测[J].实用医学杂志.2016
论文知识图
