CRISPR/Cas9介导下高效敲除SQSTM1/p62基因的Hela细胞模型的建立

论文摘要

目的 :探讨针对p62双sgRNA向导CRISPR/Cas9基因编辑效率。方法 :采用CRISPR/Cas9基因编辑技术成功敲除p62基因,通过细胞有限稀释法和嘌呤霉素筛选,免疫印迹法验证双sgRNA和单sgRNA向导的基因编辑成功率;流式细胞仪验证p62缺失对Hela细胞凋亡的影响。结果 :免疫印迹分析得出双sgRNA导向的p62敲除效率高于单sgRNA导向的敲除,靶序列测序比对分析确认p62编码基因发生大片段缺失突变。H2O2处理稳定敲除的Hela细胞系显示,p62基因敲除能明显抑制Hela细胞H2O2诱导的早期细胞凋亡。结论 :成功建立了p62敲除的Hela细胞系,双sgRNA向导的CRISPR/Cas9基因编辑体系可能是一种更有效的编辑工具。

论文目录

• 1 材料和方法
•   1.1 主要试剂
•   1.2 sgRNA的设计和寡核苷酸合成
•   1.3 载体构建
•   1.4 细胞培养和转染
•   1.5 p62敲除的Hela稳定细胞株的筛选
•   1.6 Annexin V-FITC分析细胞凋亡
•   1.7 统计学处理
• 2 结果
•   2.1 CRISPR sgRNA载体构建
•   2.2 p62基因敲除Hela细胞的建立、筛选及鉴定
•   2.3 p62敲除能抑制H2O2诱导的早期凋亡
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 姚建凤,李明,黄荣富,彭维林,林建生,连建烽,杨晓煜,郑鸣

关键词: 基因编辑,基因,过氧化氢,细胞凋亡,细胞

来源: 解剖学杂志 2019年01期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学

单位: 泉州市妇幼保健院儿童医院,湖南医药学院,福建医科大学附属第二医院,附属福州市第一医院,基础医学院

基金: 福建省自然科学基金(2018J01148),泉州市科技局2016年度科技计划项目(2016Z38)

分类号: Q78

页码: 1-5

总页数: 5

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