小鼠Na+-K+-2Cl-共转运蛋白基因启动子克隆及20-HETE对其转录活性的影响

论文摘要

目的克隆小鼠Na+-K+-2Cl-共转运蛋白（Nkcc2）基因启动子序列,初步探讨20-HETE对该基因转录活性的调控作用。方法应用生物信息学软件ALiBaba2.1和TRANSFAC TESS分析小鼠Nkcc2基因启动子序列;以小鼠基因组DNA为模板,利用PCR方法扩增得到小鼠Nkcc2基因启动子区片段（-1 462 bp～+40 bp）,并克隆入pGL3-Basic载体,构建萤光素酶报告基因载体;脂质体法将重组报告基因载体转染到HEK293T细胞24 h后,再以20-HETE处理转染细胞2 h,利用双萤光素酶报告基因检测系统分析萤光素酶活性。结果成功构建小鼠Nkcc2基因启动子萤光素酶报告基因载体;20-HETE可以显著下调小鼠Nkcc2基因启动子萤光素酶报告基因载体的转录活性。结论 20-HETE通过转录调控机制下调小鼠Nkcc2基因的表达。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料与试剂
•   1.2 方法
•     1.2.1 生物信息学分析:应用生物信息学软件ALi-
•     1.2.2 小鼠Nkcc2基因启动子的克隆:
•       1.2.2. 1 小鼠基因组DNA提取与引物设计
•       1.2.2. 2 启动子片段扩增及TA克隆
•       1.2.2. 3 小鼠Nkcc2启动子萤光素酶报告基因载体的构建
•     1.2.3 小鼠Nkcc2基因启动子活性检测:
•       1.2.3. 1 细胞培养及处理
•       1.2.3. 2 转染
•       1.2.3. 3 Dual-GloTM双萤光素酶检测系统检测荧光素酶活性
•   1.3 统计学分析
• 2 结果
•   2.1 小鼠Nkcc2基因启动子区的生物信息学分析
•   2.2 Nkcc2基因启动子萤光素酶报告基因载体的构建
•   2.3 20-HETE对Nkcc2基因启动子活性的影响
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 武晶晶,孔令慧,贾茹

关键词: 共转运蛋白,启动子,基因克隆

来源: 中国医科大学学报 2019年01期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学

单位: 中国医科大学生命科学学院医学遗传学教研室,中国医科大学生命科学学院生物科学系

基金: 国家自然科学基金青年科学基金(81400709)

分类号: Q78

页码: 29-33

总页数: 5

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