利用CRISPR/Cas9系统构建Prdx6基因敲除的RAW264.7细胞系

论文摘要

利用CRISPR/Cas9系统构建敲除Prdx6基因的RAW264.7小鼠巨噬细胞系,为探讨Prdx6与布鲁菌感染及胞内寄生的关系构建细胞模型。针对Prdx6基因的第1外显子设计sgRNA,构建重组表达载体Prdx6-pX459-sgRNA,将重组质粒转染RAW264.7细胞,嘌呤霉素初步筛选。单细胞接种并扩繁,提取基因组DNA,PCR及测序鉴定。结果表明,在敲除细胞株基因组中存在碱基缺失,导致移码突变。说明成功获得敲除Prdx6基因的RAW264.7细胞系。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 质粒、菌种和细胞株
•     1.1.2 主要试剂
•   1.2 方法
•     1.2.1 sgRNA的设计与合成
•     1.2.2 构建Prdx6-pX459-sgRNA载体
•     1.2.3 RAW264.7小鼠细胞系的培养及转染条件的优化
•     1.2.4 敲除Prdx6基因的RAW264.7细胞株的筛选
• 2 结果
•   2.1 Prdx6-pX459-sgRNA表达载体的构建
•   2.2 转染条件的优化
•   2.3 敲除Prdx6基因的RAW264.7细胞系筛选
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 翟菲菲,全芷仪,王路鹿,张士军,鞠丹迪,水一鸣,常江,常恒祯,胡盼,李岩松,卢士英,周玉,柳增善,李兆辉,任洪林

关键词: 移码突变,布鲁菌

来源: 动物医学进展 2019年04期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 吉林大学动物医学学院人兽共患病研究所/人兽共患病研究教育部重点实验室,长春市实验中学

基金: 国家重点研发计划项目(2018YFD0500900),吉林省科技发展计划重点科技攻关项目(20170101149JC)

分类号: S855.12;Q78

DOI: 10.16437/j.cnki.1007-5038.2019.04.007

页码: 36-40

总页数: 5

文件大小: 2301K

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