发根农杆菌介导西瓜转基因过表达体系的建立

论文摘要

【目的】建立发根农杆菌介导的西瓜转基因不定根过表达体系。【方法】探索利用野生型发根农杆菌K599侵染西瓜材料’Sugar Baby’,诱导西瓜产生不定根的实验方法。借助该方法,将含有GUS基因和EGFP基因的过表达载体pCAMBIA3301和pCAMBIA1300-ProSuper导入发根农杆菌K599,侵染西瓜材料’Sugar Baby’,通过常规PCR、qRTPCR、GUS染色和激光共聚焦显微镜检测,评价该过表达体系的效果。【结果】利用野生型和导入外源质粒的发根农杆菌均能成功诱导西瓜’Sugar Baby’产生不定根。PCR检测结果显示,携带pCAMBIA3301和pCAMBIA1300-ProSuper载体的发根农杆菌K599诱导产生的不定根阳性率达到100%。qRT-PCR、GUS染色和激光共聚焦显微镜检测均能成功检测到GUS基因和EGFP基因的过量表达。【结论】利用发根农杆菌K599诱导西瓜产生不定根介导基因过表达的方法,具有周期短,操作方便,转化率高的特点,可实现基因功能的快速验证,为西瓜根系相关基因的功能研究提供技术支持。

论文目录

• 1 材料和方法
•   1.1 材料
•   1.2 方法
•     1.2.1 发根农杆菌K599感受态的制备和工程菌株的制备
•     1.2.2 西瓜不定根的转化
•     1.2.3 西瓜不定根的检测
• 2 结果与分析
•   2.1 发根农杆菌K599诱导西瓜产生不定根
•   2.2 以pCAMBIA3301为载体通过发根农杆菌K599介导GUS基因的过表达
•   2.3 以pCAMBIA1300-ProSuper为载体通过发根农杆菌K599介导EGFP基因的过表达
• 3 讨论
• 4 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 王平勇,徐永阳,赵光伟,贺玉花,孔维虎,张健,刘水苗,户克云,侯冲,王兰菊,徐志红

关键词: 西瓜,发根农杆菌,过表达

来源: 果树学报 2019年12期

年度: 2019

分类: 农业科技

专业: 园艺

单位: 中国农业科学院郑州果树研究所,河南农业大学园艺学院

基金: 国家自然科学基金(31801888),国家西甜瓜产业技术体系项目(CARS-25),中国农业科学院科技创新工程专项经费项目(CAAS-ASTIP-2019-ZFRI),河南省现代农业产业技术体系项目(S2014-11-G03),中央级科研院所基本科研业务费专项(1610192019201)

分类号: S651

DOI: 10.13925/j.cnki.gsxb.20190454

页码: 1763-1770

总页数: 8

文件大小: 1834K

下载量: 341