猪流行性腹泻病毒诱导的B细胞免疫应答研究

论文摘要

猪流行性腹泻（porcine epidemic diarrhea,PED）是由猪流行性腹泻病毒（PE DV）引起的一种急性、高度接触性肠道传染病。该病毒是导致初生仔猪腹泻和死亡的主要致病原之一。成熟的初始B细胞能识别抗原,活化、增殖并分化成浆细胞,合成和分泌抗体而发挥清除病原体的作用。目前对于PEDV诱导B细胞免疫应答的机制尚不清楚,本研究通过体外实验,探究了来自不同年龄猪的B细胞分别对PEDV强毒株和弱毒株刺激后的免疫应答效应,旨在为深入阐明PEDV的感染免疫机制奠定基础。为了明确PEDV对B细胞的激活作用。分别采集初生仔猪、保育猪、成年母猪的前腔静脉血,采用密度梯度离心技术结合免疫磁珠分选细胞法,从外周血中分选CD21+B细胞。用PEDV强毒株QY2016和弱毒株CV777分别感染不同年龄猪的B细胞,感染后24 h应用流式细胞术分析B细胞表面分子MHC II、CD80、CD54、CD27及mIgM的表达水平。强毒株QY2016和CV777株均不能刺激各年龄猪B细胞中表达表面分子MHC II、CD80和mIgM的细胞增加,但能引起初生仔猪B细胞表达协同刺激分子CD54与CD27的含量显著上升。野毒株QY2016感染组中M HC II+、CD80+、mIgM+及mIgM+CD27+B细胞含量低于弱毒株CV777感染组。感染后0 h、24 h和48 h,应用ELISA检测细胞上清中IL-1、IL-22、IL-4、I L-6、IL-10、IFN-α、GM-CSF、M-CSF、IFN-α和TGF-β的表达水平。QY2016株和CV777引起均能引起初生仔猪B细胞分泌IFN-α和GM-CSF,保育猪B细胞分泌IL-1、IFN-α、IL-4,成年母猪分泌TGF-β,均不能引起各年龄猪的B细胞分泌I L-6和IL-10。其他细胞因子的分泌在不同毒株和不同年龄之间不同,但相对于仔猪和母猪,保育猪的B细胞分泌细胞因子的种类较多。感染后0 d、4 d和7 d,通过ELISA测定细胞上清中的IgM、IgA和IgG的含量,强毒株QY2016仅能够诱导保育猪B细胞分泌IgM和IgG。弱毒株CV777能诱导保育猪的B细胞可分泌IgM、IgA,母猪B细胞分泌IgA和IgG。强毒株和弱毒株均不能诱导初生仔猪B细胞分泌IgM、IgA和IgG。上述结果表明,PEDV诱导的B细胞表面分子表达、细胞因子与抗体应答与猪的年龄和毒株毒力的强弱密切相关。与弱毒株相比,强毒株刺激B细胞后的应答效应较弱,初生仔猪和母猪B细胞对PEDV的应答反应较保育猪低。

论文目录

• 摘要
• abstract
• 英文缩写表
• 1 引言
•   1.1 猪流行性腹泻病毒
•     1.1.1 分类地位及形态特征
•     1.1.2 培养特征
•     1.1.3 分子生物学特征
•     1.1.4 遗传变异
•   1.2 B淋巴细胞及其功能
•     1.2.1 B细胞来源
•     1.2.2 B细胞激活与分化
•     1.2.3 B细胞主要表面分子
•     1.2.4 B细胞分泌的细胞因子
•   1.3 PEDV诱导的体液免疫应答
•   1.4 研究目的与意义
•   1.5 研究内容
•   1.6 技术路线
•   1.7 研究目标
• 2 材料与方法
•   2.1 材料
•     2.1.1 细胞毒
•     2.1.2 主要试剂与试剂盒
•     2.1.3 主要试剂的配制
•     2.1.4 主要设备
•   2.2 方法
•     2.2.1 病毒噬斑纯化及TCID50 测定
• +B细胞的筛选'>    2.2.2 CD21⁺B细胞的筛选
•     2.2.3 流式细胞术检测B细胞表面分子
•     2.2.4 B细胞分泌细胞因子水平的间接ELISA检测
•     2.2.5 B细胞分泌抗体水平的间接ELISA检测
• 3 结果
•   3.1 病毒蚀斑及TCID
•   3.2 B细胞活化相关表面分子表达水平的测定
•     3.2.1 初生仔猪B细胞表面分子的表达
•     3.2.2 保育猪B细胞表面分子的表达
•     3.2.3 成年母猪B细胞表面分子的表达
•   3.3 PEDV对 B细胞相关细胞因子水平
•     3.3.1 IL-4 表达水平的动态变化
•     3.3.2 IL-1 表达水平的动态变化
•     3.3.3 IL-22 表达水平的动态变化
•     3.3.4 GM-CSF表达水平的动态
•     3.3.5 M-CSF表达水平的动态变化
•     3.3.6 IFN-α表达水平的动态变化
•     3.3.7 TGF-β表达水平的动态变化
•   3.4 PEDV对 B细胞抗体水平的影响
•     3.4.1 初生仔猪B细胞分泌的IgA、IgG、IgM的动态变化
•     3.4.2 保育猪B细胞分泌的IgA、IgG、IgM的动态变化
•     3.4.3 成年母猪B细胞分泌的IgA、IgG、IgM的动态变化
• 4 讨论
• 5 结论
• 参考文献
• 在读期间发表的学术论文与获得的研究成果
• 作者简介
• 致谢

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 赵雪

导师: 宋勤叶

关键词: 猪流行性腹泻病毒,猪细胞,表面分子,细胞因子,抗体

来源: 河北农业大学

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 河北农业大学

分类号: S852.4

总页数: 53

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