蓝舌病病毒10质粒反向遗传操作系统的建立

论文摘要

为建立蓝舌病病毒（BTV） 10质粒反向遗传操作系统,本研究将BTV16型BN96/16株10个基因节段分别克隆至pS111载体相应的酶切位点,构建10个重组质粒转染BSR细胞,拯救获得重组病毒,命名为rBTV-16。测序结果显示,拯救病毒rBTV-16与其亲本病毒wtBTV-16的核苷酸序列完全相同;经电镜观察,可见典型形态的环状病毒属病毒粒子;间接免疫荧光试验结果显示,rBTV-16能够感染细胞;病毒基因组检测结果显示,rBTV-16各个基因节段的长度与亲本病毒完全一致;病毒生长曲线的测定结果显示,rBTV-16与亲本病毒具有一致的复制特性。本研究建立的10质粒系统比传统体外转录拯救系统的操作过程简便,提高了拯救病毒的效率,为进一步深入研究BTV的致病机理奠定了基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 主要实验材料
•   1.2 主要试剂
•   1.3 病毒基因组的扩增和反向遗传质粒的构建1 0 质粒系统拯救BTV的原理如图1所示[2]。
•     1.3.1 BTV-16基因组引物的设计和片段的扩增
•     1.3.2 10个重组质粒的构建
•   1.4 质粒的转染和重组病毒的拯救
•   1.5 拯救病毒的鉴定
•     1.5.1 间接免疫荧光 （IFA） 鉴定检测
•     1.5.2 电镜观察
•     1.5.3 病毒ds RNA基因组的电泳检测
•     1.5.4 拯救病毒基因组的测序鉴定
•   1.6 拯救病毒与亲本病毒的生长曲线测定
• 2 结果
•   2.1 病毒10个基因节段的扩增与反向遗传质粒的构建
•   2.2 反向遗传重组病毒的拯救
•   2.3 拯救病毒的IFA鉴定
•   2.4 拯救病毒的电镜观察
•   2.5 拯救病毒ds RNA基因组鉴定
•   2.6 拯救病毒的基因组测序
•   2.7 拯救病毒与亲本病毒生长曲线的测定
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 郭运泽,孙恩成,徐青元,步志高,吴东来,王凤龙

关键词: 蓝舌病病毒,反向遗传,质粒系统

来源: 中国预防兽医学报 2019年03期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 内蒙古农业大学兽医学院,中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室

基金: 国家重点研发计划资助(2017YFD0500903,2016YFD0500908)

分类号: S852.65

页码: 234-238

总页数: 5

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