维氏气单胞菌tmRNA突变体构建及其用于反式翻译底物的鉴定

论文摘要

SmpB-tmRNA介导的反式翻译,是细菌中普遍存在的一种主要核糖体拯救机制,对细菌的生存和增殖都具有重要影响。为了探明反式翻译系统在人-鱼共患病原菌维氏气单胞菌（Aeromonas veronii）中的作用机制,本研究基于维氏气单胞菌tmRNA的二级结构预测,将tmRNA标记肽的后5个氨基酸残基的密码子以及1个终止密码子突变为组氨酸密码子,从而构建tmRNA突变体。生长曲线测定结果表明,该tmRNA突变体能够回补tmRNA缺失导致的细菌生长缺陷;同时,免疫印迹实验确证该突变体能够成功地将反式翻译拯救的蛋白底物标记上组氨酸标签,表明其能够行使tmRNA的正常功能。本研究构建的tmRNA突变体为后续分离和纯化tmRNA-SmpB介导的反式翻译底物,进而研究反式翻译系统在细菌中的作用机制提供了理论基础。

论文目录

• 1 结果与分析
•   1.1 维氏气单胞菌tmRNA突变体设计
•   1.2 维氏气单胞菌tmRNA突变体克隆
•   1.3 维氏气单胞菌tmRNA突变体表达载体构建
•   1.4 维氏气单胞菌tmRNA突变体功能验证
• 2 讨论
• 3 材料与方法
•   3.1 实验材料
•   3.2 PCR和融合PCR
•   3.3 tmRNA突变体表达载体构建
•   3.4 三亲接合
•   3.5 生长曲线测定
•   3.6 蛋白质表达与纯化
•   3.7 免疫印迹将
• 作者贡献

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 彭钼植,唐燕琼,唐鸿倩,马香,刘柱

关键词: 维氏气单胞菌,反式翻译,突变体

来源: 基因组学与应用生物学 2019年04期

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学

单位: 海南大学热带农林学院

基金: 科技部国际合作专项(2015DFR31060),海南省重点研发计划(ZDYF2017020),海南省自然科学基金(317015),国家自然科学基金项目(31360261,31560021,31772887),海南大学青年基金资助项目(HDKYXJ201712)共同资助

分类号: Q933

DOI: 10.13417/j.gab.038.001636

页码: 1636-1642

总页数: 7

文件大小: 360K

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