金黄色葡萄球菌LukS-PV-GFP融合蛋白的载体构建及表达纯化

论文摘要

目的构建Luk S-PV与GFP融合蛋白表达载体,在大肠杆菌中表达纯化并鉴定。方法煮沸法提取金黄色葡萄球菌铜23的DNA作为模板,PCR扩增得到Luk S-PV基因产物,经胶回收后与p MD-18T质粒连接过夜后转化至感受态菌DH5α中。提取质粒经PCR、测序鉴定无误,双酶切后连接到pet28a-N6H-GFP载体上,先转化至感受态菌DH5α再转化到BL21宿主菌中。对Luk S-PV-GFP表达产物使用SDS-PAGE电泳分析,并取诱导前和IPTG诱导5 h菌液涂片置于荧光显微镜下观察。使用Western blot对诱导前及纯化后蛋白进行鉴定。结果成功构建了Luk S-PV与GFP融合蛋白表达载体,诱导纯化后获得较高浓度和纯度的重组融合蛋白,且诱导前无荧光,诱导后宿主菌BL21可在荧光显微镜下显示绿色荧光。Western blot结果显示纯化后蛋白出现特异性条带。结论成功地纯化得到了具有生物学活性的Luk S-PV-GFP重组融合蛋白,为进一步研究Luk S-PV的功能定位和相互作用奠定了基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 质粒与菌株
•     1.1.2 主要试剂
•   1.2 方法
•     1.2.1 LukS-PV的基因扩增与基因克隆
•     1.2.2 LukS-PV-GFP重组融合质粒的构建与鉴定
•     1.2.3 重组融合蛋白的诱导表达与纯化
•     1.2.4 重组融合蛋白表达宿主的荧光检测
•     1.2.5 重组融合蛋白的Western blot检测
• 2 结果
•   2.1 Luk S-PV的基因扩增与鉴定分析
•   2.2重组蛋白的诱导表达
•   2.3重组质粒Luk S-PV-GFP在大肠杆菌BL21中的表达与检测
•   2.4重组融合蛋白的Western blot鉴定
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 汪自然,常文娇,戴媛媛,马筱玲

关键词: 杀白细胞素,绿色荧光蛋白,原核表达

来源: 安徽医科大学学报 2019年12期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技

专业: 基础医学

单位: 安徽医科大学附属省立医院检验科

基金: 国家自然科学基金(编号:81572065)

分类号: R346

DOI: 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2019.12.013

页码: 1903-1907

总页数: 5

文件大小: 4233K

下载量: 253