导读:本文包含了双基因表达论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:基因,蛋白,干细胞,疫苗,载体,逆转录,生长因子。
双基因表达论文文献综述
霍震,沈进,许礼发,张福健,刘良[1]（2016）在《PDXl与PAX4双基因表达腺病毒载体的构建与表达》一文中研究指出运用pADxsi系统制备可表达人PDX1与PAX4双基因的重组5型腺病毒。从pEGFP-N1-PDX1质粒上酶切下目的基因PDX1并酶连到腺病毒穿梭质粒pShuttle-EGFP-CMV上,替换EGFP而得到pShuttle-CMV-PDX1;再将PAX4从pEGFP-N1-PAX4质粒上酶切下连到pShuttle-CMV-PDX1的多克隆酶切位点而得到穿梭质粒pShuttle-CMV-PDX1/CMV-PAX4;双酶切pShuttle-CMV-PDX1/CMV-PAX4将CMV-PDX1/CMV-PAX4转移到ADxsi骨架质粒上,得到pADxsi-CMV-PDX1/CMV-PAX4腺病毒质粒,然后在293细胞中进行包装并扩增重组腺病毒,并进行病毒滴度测定;体外感染人间充质干细胞。依据酶切、测序和PCR的结果均证明重组人PDX1与PAX4双基因表达腺病毒载体构建正确;而RTPCR与WB结果也显示目的基因在细胞中稳定表达。应用重组技术成功构建人PDX1与PAX4双基因表达5型腺病毒载体,转录因子PDX1与PAX4在间充质干细胞内稳定表达且定位于细胞核内。(本文来源于《安徽理工大学学报(自然科学版)》期刊2016年02期）
王会敏,何柯新,徐建华,尚陈宇,周克元[2]（2015）在《利用RNAi阻抑hTERT和Bi-1双基因表达的RNAi作用效果的研究》一文中研究指出目的利用LipofectamineTM2000将针对靶向人类端粒酶末端逆转录酶(hTERT)和Bax inhibitor-1(Bi-1)基因设计并构建的质粒载体转染至CNE-2Z鼻咽癌细胞内,诱导序列特异性的基因沉默,研究其产生的shRNA阻抑hTERT和Bi-1基因表达的效果。方法收集CNE-2Z细胞,设未处理组、pEGFP-N1组、pEGFP-N1/Lip组,采用流式细胞术检测Lip对CNE-2Z细胞的转染能力,RT-PCR和Western blot法分析表达shRNA重组质粒载体对hTERT和Bi-1基因mRNA表达的抑制效应。结果转染CNE-2Z细胞的质粒和Lip最佳组合:质粒为2.5μg,Lip为6.25μL。结论成功构建的针对人hTERT和Bi-1基因的shRNA真核表达质粒能特异、有效地阻抑hTERT和Bi-1基因的表达。(本文来源于《重庆医学》期刊2015年08期）
张阳,张志坚,俞晓岚,陈东平,吴秀丽[3]（2015）在《慢病毒介导新型Tet-On系统调控大鼠GDNF和TH双基因表达对帕金森病大鼠的实验研究》一文中研究指出目的观察改良Tet-On系统修饰慢病毒(Lv-TH-GDNF)目的基因的表达调控及纹状体内直接转移对帕金森病(PD)大鼠的作用。方法 1用Lv-TH-GDNF与rt TA2s-M2病毒感染He La细胞,免疫印迹法检测强力霉素(Dox)对TH、GDNF基因表达的调控。2用Lv-TH-GDNF与rt TA2sM2病毒共同注射到PD大鼠患侧纹状体,Dox诱导目的基因表达。通过观察阿扑吗啡(APO)诱导旋转行为、黑质多巴胺能神经元数量、患侧纹状体DA、DOPAC含量评估Lv-THGDNF治疗效应;通过移植侧纹状体内TH与GDNF蛋白量评估外源基因在体内的表达。结果 1在体外He La细胞实验,仅Dox阳性组见TH、GDNF蛋白条带。2在动物体内实验,病毒移植4周后,与PBS对照组相比,仅病毒+Dox组大鼠旋转行为明显改善(P<0.01),损伤侧黑质致密部TH阳性细胞数、纹状体DA、DOPAC含量及TH和GDNF蛋白量明显增高(P<0.01)。结论新型Tet-On系统修饰的Lv-THGDNF目的基因表达受四环素类抗生素调控,在体外实验未见基础活动,且纹状体内直接转移对PD大鼠有一定治疗作用。(本文来源于《中国药理学通报》期刊2015年02期）
陈慧慧,王利月,林洪羽,王永红,张考[4]（2014）在《PRRSV囊膜GP5/M双基因表达载体的构建》一文中研究指出猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是危害养猪业发展最严重的传染病之一,目前由于缺乏有效的疫苗未能得到有效控制。已知PRRS病毒(PRRSV)主要感染猪的肺泡巨噬细胞(PAM),我们在研究猪天然防御活性物质时发现,肺泡表面活性蛋白A(SP-A)能够与PRRSV结合,并能明显抑制PRRSV在PAN的增殖,说明SP-A有抗PRRSV的作用。然而这种结合与PRRS病毒颗粒哪种囊膜(本文来源于《全国动物生理生化第七届全国代表大会暨第十叁次学术交流会论文摘要汇编》期刊2014-07-28）
张永红,王利月,林洪羽,张建楼,李文艳[5]（2014）在《PRRSV囊膜GP2a/GP4双基因表达载体的构建》一文中研究指出猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的母猪发热流产,仔猪呼吸障碍为特征的传染病,是目前危害养猪业最为严重的传染病之一。由于目前缺乏有效的疫苗,所以在国内外该病没有得到有效的控制,每年给我国养猪业带来巨大的经济损失。目前,国内外学者就PRRS的分子流行病学、病原学、诊断学和(本文来源于《全国动物生理生化第七届全国代表大会暨第十叁次学术交流会论文摘要汇编》期刊2014-07-28）
范波胜,娄季宇,白宏英[6]（2012）在《重组双基因表达质粒pIRES-NGF-VEGF165转染大鼠BMSCs及表达鉴定》一文中研究指出目的利用脂质体转染技术,将带有神经生长因子(NGF)基因和血管内皮生长因子165(VEGF165)基因的重组双基因表达质粒pIRES-NGF-VEGF165转染大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),获得能稳定表达NGF和VEGF165的转基因BMSCs。方法采集和培养大鼠BMSCs;利用脂质体转染技术,将pIRES-NGF-VEGF165质粒转染大鼠BMSCs,经G418筛选,获得阳性细胞克隆,进行扩增培养;应用RT-PCR和Western blot检测NGF、VEGF165的表达,并分别利用PC12细胞生长实验和鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管形成实验进行NGF和VEGF165的活性检测。结果质粒pIRES-NGF-VEGF165成功转染入BMSCs,可正确表达NGF和VEGF165,并具有生物学活性。结论获得了能够稳定表达NGF和VEGF165的大鼠BMSCs,为进一步研究NGF及VEGF165双基因治疗脑梗死奠定了重要基础。(本文来源于《中风与神经疾病杂志》期刊2012年12期）
姚相杰,何雅青,蔡春林,杨洪,冼慧霞[7]（2012）在《肠道病毒71型真核双基因表达载体的构建》一文中研究指出目的通过克隆肠道病毒71型结构前体蛋白P1和非结构蛋白3CD,构建共表达P1前体蛋白和非结构蛋白3CD的真核双基因表达载体。方法设计合成脑心肌炎病毒(EMCV)IRES序列的特异性引物,克隆至真核表达载体pcDNA3.0上,命名为pc-IRES。从手足口病重症患者分离EV71病毒株,经逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术分别扩增出EV71病毒的P1前体蛋白区与3CD区的片段,并将其定向克隆至真核表达载体pc-IRES载体中IRES序列的上游和下游,随后转化到大肠埃希菌DH5α中,最后经PCR和双酶切鉴定转化菌落。结果通过重组质粒p-IRES-P1-3CD进行酶切和DNA序列分析,重组真核双基因表达载体p-IRES-P1-3CD构建成功。结论成功构建共表达EV71病毒P1前体蛋白和非结构蛋白3CD真核双基因表达载体,这将为下一步制备基于DNA载体的EV71病毒的类病毒颗粒疫苗打下基础。(本文来源于《检验医学与临床》期刊2012年23期）
姚相杰,何雅青,蔡春林,杨洪,冼慧霞[8]（2012）在《EV71病毒真核双基因表达载体p-IRES-P1-3CD的构建》一文中研究指出目的:通过克隆EV71病毒结构前体蛋白P1和非结构蛋白3CD,构建共表达P1前体蛋白和非结构蛋白3CD的真核双基因表达载体。方法:设计合成EMCV病毒IRES序列的特异性引物,克隆至真核表达载体pcDNA3.0上,命名为pc-IRES。从手足口病重症患者分离EV71病毒株,经RT-PCR技术分别扩增出EV71病毒的P1前体蛋白区与3CD区的片段,并将其定向克隆至真核表达载体pc-IRES载体中IRES序列的上游和下游,随后转化到大肠杆菌DH5α中,最后经PCR和双酶切鉴定转化菌落。结果:重组真核双基因表达载体p-IRES-P1-3CD构建成功。结论:成功构建共表达EV71病毒P1前体蛋白(VP1-VP4)和非结构蛋白3CD真核双基因表达载体,这将为下一步制备基于DNA载体的EV71病毒的类病毒颗粒(VLPs)疫苗打下基础。(本文来源于《第叁届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛论文汇编》期刊2012-10-12）
胡刚,岑东芝,杨力建,陈少华,周羽竝[9]（2012）在《PML-RARα245-hIL-2双基因表达载体的构建和表达研究》一文中研究指出目的:采用长度为245 bp的PML-RARα融合基因片段构建一种新的PML-RARα融合基因与人白介素-2(hIL-2)基因真核双表达质粒。方法:利用RT-PCR从NB4细胞的RNA中扩增出包含PML-RARα基因融合点的长度为245 bp的基因片段,通过RT-PCR从Jurkat细胞中扩增hIL-2基因,并将两基因片段分别克隆到pIRES质粒中,通过酶切和测序验证重组质粒的正确性。将重组质粒转染A549细胞,通过RT-PCR检测该质粒在真核细胞中的转录情况,利用点杂交和ELISA技术检测目的蛋白的表达。结果:Nhe I/Mlu I和Sal I/Not I双酶切证明重组质粒中含有相应大小的PML-RARα融合基因片段和hIL-2基因,测序结果证明重组质粒中插入片段的碱基序列均完全正确。将构建的pIRES-PML-RARα245-hIL-2质粒转染A549细胞后经RT-PCR鉴定表明,插入到重组质粒中的PML-RARα和hIL-2基因能够在真核细胞中进行正常转录并翻译出相应蛋白。结论:成功构建了含有245 bp的PML-RARα基因与hIL-2基因的真核双表达载体,该载体能够在真核细胞中正常转录并翻译出PML-RARα和hIL-2蛋白,为利用DNA疫苗治疗急性早幼粒细胞白血病提供了更丰富的资料。(本文来源于《沈阳医学院学报》期刊2012年02期）
曹俊伟[10]（2012）在《人溶菌酶/乳铁蛋白双基因表达载体的构建与转基因牛克隆胚的体外发育》一文中研究指出本研究采用双酶切定向克隆的方法，成功地将人乳铁蛋白表达序列与内部核糖体进入位点(IRES)连接起来，构建了重组载体pIL。通过BamH I单酶切连接构建了人溶菌酶和人乳铁蛋白乳腺特异性表达载体pEBHIL。利用脂质体包裹pEBHIL导入奶牛乳腺上皮细胞，经G418筛选及PCR检测筛选获得阳性细胞，以之作为供体细胞利用核移植技术构建转基因克隆胚。通过PCR法检测转基因克隆胚中的外源基因，并观察绿色荧光蛋白表达，从而实现在转基因克隆胚早期发育过程中对外源基因的检测，为进一步移植阳性克隆胚，得到转基因动物个体奠定基础。研究结果如下：1.采用PCR法分别克隆了2255bp的人乳铁蛋白基因（hLTF）和986bp内部核糖体进入位点(IRES)序列，PCR产物回收纯化后，hLTF克隆在pMD18-T Vector的T位点，质粒标记为phLTF；IRES克隆在pGEM-T Easy Vector的T位点，质粒标记为pIRES。将质粒phLTF和质粒pIRES分别用Xba I/Nhe I双酶切，回收目的片段，T4DNA连接酶连接，转化大肠杆菌DH5α，筛选阳性克隆pIL。利用BamH I酶切质粒pIL和质粒pEBH(含人溶菌酶基因)，T4DNA连接酶连接，BamH I酶切鉴定连接方向，构建了乳腺特异性表达载体，标记为pEBHIL。此载体含有调控序列（奶牛β-酪蛋白5′和3′调控序列）、目的基因（人溶菌酶基因及人乳铁蛋白基因）、内部核糖体进入位点(IRES)、报告基因（绿色荧光蛋白基因）以及抗性基因（neo+基因）。2．采用脂质体包裹含人溶菌酶/乳铁蛋白的双基因表达载体pEBHIL，导入奶牛乳腺上皮细胞，在荧光显微镜下观察到绿色荧光蛋白表达，经G418筛选及PCR鉴定获得阳性细胞。转染细胞增殖后经激素诱导，Western Blot检测培养液上清液，证明转染细胞表达并分泌人溶菌酶和人乳铁蛋白，分子量分别是14.7ku和40ku。转基因细胞传代培养15代，对第3、5、7、9、11、13代细胞作染色体核型分析表明，离体条件下培养细胞未发生转化（2n=60）。从而为核移植技术制备转基因牛提供了细胞来源。3.本研究分别从MⅡ卵母细胞去核方法、供核细胞同期化处理、转基因与未转基因的乳腺上皮细胞、冻-融与未冷冻的转基因供核细胞以及转基因乳腺上皮细胞的传代次数等方面比较了克隆胚的构建效率。结果表明，DM辅助去核法较盲吸法更适合MⅡ卵母细胞的去核（19.5%vs11.0%，p<0.05）；接触抑制法诱导牛乳腺上皮细胞同期化的效率显着高于血清饥饿法（19.5%vs11.8%，p<0.05）；转基因与未转基因乳腺上皮细胞为核供体对克隆胚构建效率差异不显着（16.8%vs18.7%，p>0.05）；未冷冻的转基因牛乳腺上皮细胞作为供体细胞构建克隆胚效率显着高于冻-融组（16.8%vs9.2%，p<0.05）；以第3、5、7、9代阳性转基因乳腺上皮细胞为核供体构建克隆胚的效率差异均不显着（P>0.05）。4．PCR法检测表明，外源目的基因已整合到转基因克隆胚的染色体上；荧光显微镜下观察到转基因克隆胚中绿色荧光蛋白（GFP）表达，发现部分克隆胚在2-细胞时就开始表达GFP，但是表达量小，荧光弱，随着胚胎体外发育时间延长，细胞数增多，EGFP的表达也逐渐增强。说明外源基因在胚胎早期阶段可以表达，绿色荧光蛋白基因可以作为报告基因来实现对外源基因在早期胚胎整合及表达的检测。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2012-05-01）
双基因表达论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的利用LipofectamineTM2000将针对靶向人类端粒酶末端逆转录酶(hTERT)和Bax inhibitor-1(Bi-1)基因设计并构建的质粒载体转染至CNE-2Z鼻咽癌细胞内,诱导序列特异性的基因沉默,研究其产生的shRNA阻抑hTERT和Bi-1基因表达的效果。方法收集CNE-2Z细胞,设未处理组、pEGFP-N1组、pEGFP-N1/Lip组,采用流式细胞术检测Lip对CNE-2Z细胞的转染能力,RT-PCR和Western blot法分析表达shRNA重组质粒载体对hTERT和Bi-1基因mRNA表达的抑制效应。结果转染CNE-2Z细胞的质粒和Lip最佳组合:质粒为2.5μg,Lip为6.25μL。结论成功构建的针对人hTERT和Bi-1基因的shRNA真核表达质粒能特异、有效地阻抑hTERT和Bi-1基因的表达。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
双基因表达论文参考文献
[1].霍震,沈进,许礼发,张福健,刘良.PDXl与PAX4双基因表达腺病毒载体的构建与表达[J].安徽理工大学学报(自然科学版).2016
[2].王会敏,何柯新,徐建华,尚陈宇,周克元.利用RNAi阻抑hTERT和Bi-1双基因表达的RNAi作用效果的研究[J].重庆医学.2015
[3].张阳,张志坚,俞晓岚,陈东平,吴秀丽.慢病毒介导新型Tet-On系统调控大鼠GDNF和TH双基因表达对帕金森病大鼠的实验研究[J].中国药理学通报.2015
[4].陈慧慧,王利月,林洪羽,王永红,张考.PRRSV囊膜GP5/M双基因表达载体的构建[C].全国动物生理生化第七届全国代表大会暨第十叁次学术交流会论文摘要汇编.2014
[5].张永红,王利月,林洪羽,张建楼,李文艳.PRRSV囊膜GP2a/GP4双基因表达载体的构建[C].全国动物生理生化第七届全国代表大会暨第十叁次学术交流会论文摘要汇编.2014
[6].范波胜,娄季宇,白宏英.重组双基因表达质粒pIRES-NGF-VEGF165转染大鼠BMSCs及表达鉴定[J].中风与神经疾病杂志.2012
[7].姚相杰,何雅青,蔡春林,杨洪,冼慧霞.肠道病毒71型真核双基因表达载体的构建[J].检验医学与临床.2012
[8].姚相杰,何雅青,蔡春林,杨洪,冼慧霞.EV71病毒真核双基因表达载体p-IRES-P1-3CD的构建[C].第叁届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛论文汇编.2012
[9].胡刚,岑东芝,杨力建,陈少华,周羽竝.PML-RARα245-hIL-2双基因表达载体的构建和表达研究[J].沈阳医学院学报.2012
[10].曹俊伟.人溶菌酶/乳铁蛋白双基因表达载体的构建与转基因牛克隆胚的体外发育[D].西北农林科技大学.2012
论文知识图
