贵州黑山羊GFI1B基因的原核表达、蛋白纯化及多克隆抗体制备

论文摘要

独立生长因子1 （GFI1）及其同源物GFI1B是造血所需的谱系特异性转录因子,定位到人类基因组的9号染色体（9q34.13）,编码一种331个氨基酸的多肽,GFI1和GFI1B均有6个C末端C2H2锌指和1个N末端SNAG （SNAIL/GFI1）转录抑制结构域。为进一步探索GFI1B的基因功能,公开一种贵州黑山羊新基因GFI1B多克隆抗体的制备方法,将在实验室中克隆的山羊GFI1B基因序列首先用于在原核载体中表达,并进行原核表达载体pET32a-GFI1B的构建,再进行GFI1B蛋白的原核表达,最后进行GFI1B蛋白的纯化和大白兔GFI1B多克隆抗体的制备与纯化。结果表明:高效表达了原核表达载体pET32a-GFI1B,纯化的His-GFI1B融合蛋白可满足制备多克隆抗体的要求; ELISA检测结果显示,GFI1B多克隆抗体可与His-GFI1B融合蛋白进行特异性结合,制备出高度特异的山羊GFI1B多克隆抗体。该方法获得的多克隆抗体效价高、特异性好,弥补了GFI1B羊上的多克隆抗体的研究空白。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 试验材料、菌株、质粒和试剂
•   1.2 引物设计
•   1.3 原核表达载体构建
•   1.4 GFI1B的诱导表达和His-GFI1B融合蛋白纯化
•   1.5 融合蛋白GFI1B的Western blot鉴定
•   1.6 多克隆抗体制备及特异性检测
• 2 结果与分析
•   2.1 重组子鉴定
•   2.2 GFI1B原核表达载体构建与诱导表达
•   2.3 重组菌的表达条件优化
•     2.3.1 诱导温度的选择
•     2.3.2 诱导剂浓度的选择
•     2.3.3 诱导时间的选择
•   2.4 融合蛋白GFI1B表达及纯化
•   2.5 融合蛋白GFI1B的Western blot鉴定
•   2.6 多克隆抗体的特异性检测
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 储双凤,陈志,罗卫星,蔡惠芬,朱方超,毛永江,杨章平

关键词: 贵州黑山羊,基因,原核表达,蛋白纯化,多克隆抗体

来源: 扬州大学学报(农业与生命科学版) 2019年06期

年度: 2019

分类: 农业科技

专业: 畜牧与动物医学

单位: 扬州大学动物科学与技术学院,贵州大学动物科学学院

基金: 国家自然科学基金青年基金项目(31802035,31472067,31872324),中国博士后基金资助项目(2017M621841)

分类号: S827

DOI: 10.16872/j.cnki.1671-4652.2019.06.013

页码: 76-81+92

总页数: 7

文件大小: 1339K

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