猪源A型产气荚膜梭菌β2毒素与宿主细胞互作蛋白的筛选鉴定

论文摘要

产气荚膜梭菌产生的β2毒素在仔猪肠炎中起着重要作用,为研究该毒素侵入宿主细胞的作用机制,本研究以β2为诱饵蛋白,将其与酿酒酵母转录因子GAL4的BD （DNA binding domain）融合表达,利用猪肠上皮细胞系IPEC-1的cDNA文库与GAL4的AD区（Activation domain）融合表达,通过酵母双杂交系统筛选鉴定与β2毒素相互作用的猪肠上皮细胞蛋白。筛选得到的阳性转化子经提取质粒和测序后,比对其所包含的编码蛋白序列,得到4个潜在的与β2毒素存在相互作用的细胞蛋白,分别为S20、LGALS1、L12和Atrophin-1。其中S20、L12和Atrophin-1是位于细胞内的核蛋白,而LGALS1是一种存在于细胞膜外侧的半乳糖凝集素,可能是毒素的作用位点。对LGALS1进行回交验证,结果显示其C端与β2毒素的相互作用强于其完整蛋白与β2毒素的相互作用。本研究结果对研究β2毒素的致病机制奠定了基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 主要实验材料
•   1.2 J XJ A17菌株β2毒素基因的P CR扩增
•   1.3 诱饵质粒pGBKT7-β2的构建与鉴定
•   1.4 含β2毒素基因诱饵蛋白的表达与鉴定
•   1.5 诱饵蛋白β2毒素的毒性及自激活鉴定
•   1.6 筛选与β2毒素相互作用的宿主蛋白
•   1.7 质粒pGADT7-LGALS 1和pGADT7-LGALS 1-C的构建
•   1.8 LGALS 1与β2毒素相互作用的回交试验
• 2 结果
•   2.1 诱饵质粒pGBKT7-β2的鉴定结果
•   2.2 β2毒素蛋白的表达鉴定
•   2.3 诱饵蛋白β2毒素的毒性和自激活鉴定结果
•   2.4与β2毒素互作蛋白的筛选及序列分析
•   2.5 质粒pGADT7-LGALS 1和pGADT7-LGALS 1-C的构建
•   2.6 β2毒素与LGALS 1全长及其C端相互作用的回交试验结果
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 曾秀,张兰桥,周姣,王婧祺,戴益民,张锦华

关键词: 毒素,产气荚膜梭菌,酵母双杂交系统,半乳糖凝集素

来源: 中国预防兽医学报 2019年12期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 江西农业大学动物科学技术学院,江西农业大学生物科学与工程学院

基金: 国家自然科学基金(31860694,31660720)

分类号: S852.61

页码: 1204-1209

总页数: 6

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