重组腐败梭菌α毒素的生物活性及其灭活疫苗的免疫效果

论文摘要

为了研究重组腐败梭菌α毒素的生物活性及其灭活疫苗的免疫效果,采用PCR法扩增腐败梭菌α毒素基因,构建重组表达质粒pET28α-csa,转化E.coli BL21（DE3）;对表达产物的细胞毒性、小鼠致死毒力和抗毒素中和试验等生物活性进行鉴定,并将其制成灭活疫苗免疫家兔和靶动物绵羊,通过攻毒素试验和血清中和试验与类毒素疫苗进行比较。结果显示,重组α毒素能够与腐败梭菌抗毒素血清反应,具有细胞毒性,小鼠致死毒力超过300 MLD/mL,其毒性可以被腐败梭菌抗毒素中和。制成灭活疫苗免疫家兔,随着免疫剂量的增加血清中和效价随之提高,0.25 mL/只（含重组α毒素0.11 mg）免疫即可使家兔获得100%保护,免疫效果优于类毒素疫苗;0.50 mL/只（含重组α毒素0.22 mg）免疫绵羊攻毒保护率为75%。结果表明,重组腐败梭菌α毒素具有很好的生物活性,所制成的灭活疫苗可以作为预防羊快疫的候选疫苗。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 菌株、质粒和细胞
•   1.2 血清与抗体
•   1.3 试剂
•   1.4 实验动物
•   1.5 腐败梭菌α毒素基因的扩增
•     1.5.1 引物设计
•     1.5.2 PCR扩增α毒素基因
•   1.6 pET28α-csa的构建与鉴定
•   1.7 重组α毒素的诱导表达
•     1.7.1 重组E.coli BL21 （pET28α-csa） 的诱导表达
•     1.7.2 表达形式的确定
•   1.8 重组α毒素的生物活性试验
•     1.8.1 反应原性
•     1.8.2 细胞毒性
•     1.8.3 小鼠毒性
•     1.8.4 毒力测定
•     1.8.5 血清中和试验
•   1.9 疫苗研制
•     1.9.1 疫苗的制备
•     1.9.2 抗原含量的标定
•     1.9.3 疫苗的检验
•     1.9.4 免疫攻毒保护试验
• 2 结果
•   2.1 α毒素基因的扩增
•   2.2 重组表达载体pET28α-csa的鉴定
•   2.3 重组α毒素的表达
•   2.4 重组α毒素的生物活性试验
•     2.4.1 反应原性
•     2.4.2 细胞毒性
•     2.4.3 小鼠致死毒性与毒力测定
•     2.4.4 毒性中和试验
•   2.5 疫苗研制
•     2.5.1 抗原含量
•     2.5.2 疫苗的检验
•     2.5.3 家兔免疫攻毒保护试验
•     2.5.4 绵羊的免疫攻毒保护试验
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 彭国瑞,蒋玉文,彭小兵,王秀丽,李旭妮,王猛

关键词: 腐败梭菌,毒素,生物活性,家兔,绵羊,羊快疫

来源: 中国兽医学报 2019年06期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 中国兽医药品监察所

基金: 国家重点研发计划资助项目(2017YFD0500905)

分类号: S852.61

DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2019.06.13

页码: 1118-1124

总页数: 7

文件大小: 872K

下载量: 87