导读:本文包含了和恒定区论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:虹鳟,免疫球蛋白,抗体,基因,雉鸡,质粒,罗非鱼。
和恒定区论文文献综述
曹志伟,陈红英[1]（2019）在《鲫和虹鳟IgM重链恒定区的融合表达及抗血清的制备》一文中研究指出本研究先利用生物信息学分析Gen Bank中收录的鲫Carassius auratus和虹鳟Oncorhynchus mykiss Ig M重链序列,然后分别选取其Ig M重链的一段保守结构域,通过重迭PCR方法合成其基因片段。把合成的JY-HZ-Ig M片段克隆到原核表达载体p Tri Ex-1.1上,利用大肠杆菌BL21(DE3)进行表达。SDS-PAGE结果显示,纯化后的融合蛋白JY-HZ-Ig M约为25.3k Da。用融合蛋白JY-HZ-Ig M作为抗原制备兔抗血清。用ELISA检测抗血清效价,Western blot检测抗血清的结合特异性。结果表明:制备的兔抗血清与融合蛋白JY-HZ-Ig M反应效价达到1∶2048000以上,可以与天然鲫和虹鳟Ig M的重链特异结合。本研究中制备的抗血清可作为检测鲫和虹鳟Ig M的抗体。(本文来源于《水产学杂志》期刊2019年04期）
黄慧慧,王哲彦,杨正根,李珍,王萍[2]（2018）在《人IgE重链恒定区2～4区蛋白的真核表达、纯化及其相互作用分子捕获》一文中研究指出目的真核表达、纯化人IgE重链恒定区2～4区(IgECε2-4)蛋白,利用表面等离子体共振技术(SPR)捕获其相互作用蛋白。方法构建3个含不同信号肽序列的IgECε2-4重组真核表达载体,分别瞬时转染HEK293FT悬浮细胞,优化选用表达量最高的重组质粒进行大量瞬转表达,镍柱亲和层析纯化。免疫荧光技术鉴定重组蛋白与KU812细胞表面IgE受体FcεRⅠ的结合,采用SPR技术捕捉人血清中与IgECε2-4相互作用的蛋白。结果含信号肽3(SP3)的重组质粒表达量最高,表达量约为6.2 mg/L;亲和纯化获得高纯度的人IgECε2-4蛋白;免疫荧光技术鉴定显示重组蛋白IgECε2-4可与KU812细胞表面受体结合。通过SPR技术捕获到人血清中39种可能与IgECε2-4结合的蛋白。结论获得纯化的重组蛋白IgECε2-4,IgECε2-4能与KU812细胞表面FcεR1α受体结合,靶标垂钓结果显示IgECε2-4能与人血清中的39种蛋白存在相互作用或有间接结合作用。(本文来源于《细胞与分子免疫学杂志》期刊2018年03期）
苏畅[3]（2016）在《恒定区结构域替换对TCR分子功能的影响》一文中研究指出目的:通过探讨T细胞抗原受体(T cell receptor,TCR)分子的β、α双链恒定区结构域分别被免疫球蛋白IgG的重链C1区和轻链恒定区结构域替换后,其激活下游信号分子、活化T细胞能力的变化情况来确定改造后的TCR是否具有相应的生物学功能,用以证明这种恒定区结构域改造策略不仅可以使TCR基因修饰的T细胞(TCR-T)内所产生的外源TCR分子与内源TCR分子错配情况减少,而且恒定区结构域改造的TCR分子仍然有相应的生物学功能,为改善TCR基因修饰的T细胞过继性免疫治疗提供借鉴。方法:一、穿梭质粒载体pDC315-rβ-IRES-rα的构建本实验室在前期工作中把经优势取用得到的TCR Vα12.2/Vβ7.1分子的双链恒定区结构域分别替换为IgG的轻链恒定区结构域和重链C1区,保留了两条链的抗原识别区、跨膜区和胞内区这样就形成了一种叁明治形式的嵌合型TCR分子(chim-TCR),并利用IRES将其进行连接实现双链胞内共表达,两条链分别被黄绿色荧光蛋白和青色荧光蛋白标记后克隆到pDC315载体上(pDC315-rβYFP-IRES-rαCFP),经过FRET分析表明其可以抑制杂合TCR分子的产生。为研究这种嵌合型TCR分子是否和野生型TCR分子一样具有相应的生物学功能,首先需要去除两种荧光蛋白,以防止其对rβ、rα功能的影响。我们以载体pDC315-rβYFP-IRES-rαCFP为基础,扩增嵌合型TCR分子双链rβ及IRES-rα,通过EcoRI、Nhe I的酶切、连接反应构建过渡载体pDC315-rβ;然后对pDC315-rβ及IRES-rα进行NheI、Sal I双酶切,并连接为重组嵌合型腺病毒包装用穿梭质粒载体pDC315-rβ-IRES-rα,以进行后续嵌合型TCR分子生物学功能方面的研究。二、重组嵌合型腺病毒Ad5/F35-rβ-IRES-rα的构建利用Lipofectamine 2000将Ad5/F35腺病毒骨架质粒pBHGIoxdeE1Cre与穿梭质粒pDC315-rβ-IRES-rα共转染HEK-293细胞,以包装携带嵌合型TCR基因的重组腺病毒载体;将获得的病毒转染7402细胞,提取总RNA,通过RT-PCR法获得c-DNA,以c-DNA为模板进行目的基因的扩增来检测重组嵌合型腺病毒是否构建成功;将鉴定正确的重组嵌合型腺病毒大量扩增后经tcid50法检测病毒滴度;按照moi=100进行病毒转染淋巴细胞,通过流式细胞仪检测目的基因在淋巴细胞的表达情况。叁、嵌合型tcr分子生物学功能的鉴定通过免疫印迹法对嵌合型tcr分子转导刺激信号、活化t细胞的能力进行检测,所检测的信号分子包括:pkc、erk、nfat的磷酸化与去磷酸化情况;通过荧光定量pcr对il-2、ifn-γ的表达水平进行分析;通过elisa检测细胞因子il-2和ifn-γ的分泌水平。结果:一、以本实验室前期构建的含有嵌合型tcr分子的重组质粒pdc315-rβyfp-ires-rαcfp为基础,成功构建了含嵌合型tcr基因的重组腺病毒穿梭质粒载体pdc315-rβ-ires-rα。二、将穿梭质粒pdc315-rβ-ires-rα和ad5/f35型腺病毒骨架质粒共转染hek-293细胞,成功包装出重组嵌合型tcr腺病毒ad5/f35-rβ-ires-rα;利用rt-pcr在重组嵌合型tcr腺病毒中检测出目的基因rβ-ires-rα;利用重组嵌合型tcr腺病毒感染淋巴细胞后,通过流式细胞术检测到嵌合型tcr分子的表达率为10%左右;tcid50法测得扩增后的重组嵌合型tcr腺病毒滴度达到1.3×108iu/ml。叁、重组嵌合型腺病毒转染淋巴细胞并行特异抗体刺激,经荧光定量pcr、酶联免疫吸附法均检测到细胞因子ifn-γ的变化较之于未转染淋巴细胞组有显著性的升高,而il-2只有48小时的分泌水平于两组间具有显着性差异;蛋白免疫印迹检测到在经嵌合型tcr基因转染并接受特异抗体刺激的t淋巴细胞中,信号分子pkc、erk的磷酸化与去磷酸化情况发生明显的变化,而nfat的去磷酸化变化不明显。结论:所构建的嵌合型tcr分子以腺病毒为载体能成功转入淋巴细胞内,并得到有效表达;其激活淋巴细胞、传递活化信号至下游信号分子的能力得到有效保留;表明采用igg的轻链恒定区与重链c1区分别替换tcr的α、β链恒定区结构域的策略是可行的,从而为改善tcr基因修饰的t细胞过继性免疫治疗提供了借鉴。(本文来源于《广东药科大学》期刊2016-05-25）
王培,王蓓,鲁义善,简纪常,吴灶和[4]（2016）在《吉富罗非鱼mIgD基因恒定区序列的原核表达及多克隆抗体的制备》一文中研究指出实验采用原核表达方法成功获得吉富罗非鱼m Ig D基因恒定区融合蛋白,同时利用纯化的MIGD融合蛋白,制备了兔抗MIGD多克隆抗体。ELISA检测MIGD融合蛋白效价高达1∶512 000,说明MIGD蛋白具有较强的免疫原性,可以诱导罗非鱼机体产生相应较强的免疫应答。(本文来源于《安徽农学通报》期刊2016年08期）
翟真真[5]（2016）在《雉鸡IgY重链恒定区片段的遗传及生物学功能分析》一文中研究指出在哺乳动物,基于重链恒定区抗原性的不同,免疫球蛋白被分为5个主要类型,Ig M,Ig G,,Ig A,Ig D,和Ig E。在禽类只有3个类型的抗体(Ig M,Ig Y,Ig A)被发现。雉鸡传染性疾病诊断和研究的困难是缺乏商品化可用的物种特异性抗雉鸡Ig Y的抗体。Ig Y是一种存在于禽类,两栖类和爬行类血清中的主要抗体,它可能是哺乳动物Ig G和Ig E的进化祖先。Ig Y由2条重链和2条轻链组成。重链含有4个恒定区,它的长度相似于哺乳动物的Ig E。与哺乳动物Ig G相比,禽类Ig Y在重链(命名为upsilon链,υ)恒定区含有一个额外的区域并缺少铰链区。已知许多内源性肽对人类和其他脊椎动物物种的免疫、内分泌、神经和其他系统的某些功能展示出特定的调节作用。这样的调节肽序列已在人Ig G被发现,包括促吞噬肽,rigin,肽p24,immunorphin和immunocortin,并且它们被认为充当刺激或抑制免疫应答的信号因子。但是,有关禽类Ig Y抗体来源的免疫肽的功能信息是稀缺的。本试验重点研究了雉鸡Ig Y重链恒定区片段的遗传变异和其生物学功能。研究内容主要分为四部分:第一部分雉鸡Ig Y重链恒定区基因的克隆表达及序列分析根据鸡和鸭Ig Y序列设计引物(Gen Bank登录号分别是X07174和AJ517505),从20周龄的雄性雉鸡脾脏内提取总RNA,并使用Prim Script RT试剂盒反转录成c DNA。获得750 bp,478 bp和318 bp叁个c DNA片段。750-bp的c DNA片段含有JH,CH1,CH2和部分CH3区;478 bp的c DNA片段含有CH2和CH3区;318 bp的片段含有CH1区。将叁个片段分别编码的250,159,和106个氨基酸的蛋白质。随后进行了原核重组表达,表达的重组蛋白r Ph Cυ-750和r Ph Cυ-478具有抗原性。雉鸡Ig Y抗体重链恒定区氨基酸序列显示出与鸡(71.2%)的同源性最高。对Ig Y的系统发育分析表明,雉鸡与鸡和鸭比任何其他分析的脊椎动物物种更密切相关。第二部分免疫交叉反应性测定不同种属动物的Ig G或Ig Y的氨基酸同源性不同,预示了不同动物Ig G与不同动物的酶标二抗间可能存在交叉反应。通过dot-ELISA,检测了鸡,雉鸡,人类,小鼠,狗,猪,狐狸,水貂,貉和兔血清抗体分别与用HRP标记的羊抗鸡Ig G,兔抗犬Ig G,,兔抗小鼠Ig G,或羊抗兔Ig G间的交叉反应性,同时通过Western-Blot试验分析了雉鸡Ig Y-CH重组蛋白与兔抗鸡二抗间的免疫原交叉性。结果表明,不同动物的Ig G或Ig Y之间,或多或少都存在一些免疫交叉性,不同纲目之间的动物也可有一定程度的交叉免疫反应,雉鸡Ig Y-CH重组蛋白与兔抗鸡二抗间有免疫原交叉性。第叁部分雉鸡Ig Y-CH肽生物功能活性测定使用ABCpred服务器分析雉鸡Ig Y-CH的氨基酸序列,得到5个CH-肽,T10L(TARPTSSPQL),V10D(VSWEGVGGSD),R12V(RVPPTSPSAPEV),A10Y(AIPPSPGELY),和N12S(NVSKEDWKEGKS),人工合成后用于检测雉鸡Ig Y-CH肽对鸡外周血单核细胞的体外免疫调节活性。CH肽在不同浓度下与小鼠外周血单核细胞共培养18h检测上清液中细胞因子含量。我们的研究结果表明,四肽(T10L,V10D,R12V,和A10Y)能够诱导白细胞介素(IL)-1β,IL-4和干扰素γ的显著上调,CH肽具有在禽类物种发挥免疫调节剂的潜在作用。第四部分雉鸡Ig Y-Fc肽的亚细胞定位及其与细胞结合的研究通过激光共聚焦显微镜对FITC标记的雉鸡Ig Y-Fc肽在鸡的外周血单核细胞内进行亚细胞定位,并通过流式细胞仪对雉鸡Fc肽结合到鸡外周血单核细胞进行定量检测。FITC标记的雉鸡Fc肽作用鸡的外周血单个核细胞1h时,Fc肽主要富集在细胞膜上,细胞核和细胞质中基本无可激发荧光。A10L(AKLKCLVVNL)、R10Q(RFIQRTLQKQ)和A10Y(AIPPSPGELY)与细胞的结合率分别为96.8%、97.5%和96.3%,R10Q与细胞的结合率最高。FITC标记的雉鸡Fc肽作用鸡的外周血单个核细胞18h时,Fc肽主要富集在细胞核区域内,细胞膜和细胞质中基本无可激发荧光。(本文来源于《山东农业大学》期刊2016-04-28）
赵景壮,徐黎明,刘淼,曹永生,尹家胜[6]（2014）在《虹鳟IgM重链恒定区的表达及兔抗血清的制备》一文中研究指出为了能够成功表达虹鳟IgM,本研究利用生物信息学软件对虹鳟IgM的亲水性及抗原性进行了分析,根据GenBank收录的虹鳟IgM重链恒定区,参照生物信息学分析结果,设计用于扩增截短的IgM基因的引物,以虹鳟头肾RNA提取物为模板,利用RT-PCR方法扩增虹鳟截短的IgM重链恒定区部分基因片段,连接原核表达载体pET-27b,利用大肠杆菌Rosetta进行表达。SDS-PAGE及HPLC结果显示,纯化后截短的IgM大小约为47.7 ku,且纯度达到90%。利用其制备兔抗血清后ELISA分析结果显示,所制备的兔抗血清与本研究所表达的截短IgM蛋白的反应效价为1∶40 000,与虹鳟血清提取的全长IgM反应效价为1∶20 000并且呈现出抗原计量依赖性。研究表明,重组IgM蛋白与虹鳟血清中的天然IgM重链恒定区具有近似的结构,利用其所制备的兔抗血清能够与虹鳟鱼体中的天然IgM发生特异性反应。(本文来源于《水产学报》期刊2014年08期）
浮帅古[7]（2014）在《卵黄抗体重链恒定区介导外源蛋白在蛋黄中表达的研究》一文中研究指出应用转基因鸡作为生物反应器进行功能蛋白的生产具有广阔的应用前景,功能蛋白在蛋中靶向表达是理想的生产方式。本论文通过构建表达载体生产慢病毒,通过显微注射导入鸡胚制备转基因鸡,载体在CMV启动子控制下,外源蛋白与鸡卵黄抗体IgY抗体重链恒定区CH1-4融合,使表达的外源蛋白通过IgY抗体受体介导转位到蛋黄,探索转基因鸡作为生物反应器生产功能蛋白的可行性,为应用转基因鸡生产医用蛋白提供新途径和思路。利用分子生物学手段克隆得到鸡IgY重链恒定区基因,以EGFP为报告基因,选取pLOV.CMV.EGFP载体进行改造,构建真核表达载体,与包装质粒和包膜质粒共转染293T细胞,生产慢病毒,利用相对荧光定量PCR分析,获得的慢病毒滴度为7.06×108TU/mL。使用慢病毒感染鸡胚成纤维细胞系DF1,感染效率较高。分别在鸡胚13-14期外周血管和X期胚盘下腔注射1.5μL含有CMV启动子和EGFP报告基因的HIV-1型慢病毒溶液,血管注射组孵化率为84.2%,胚盘组孵化率0。通过荧光显微镜、RT-PCR、Western Blot等方法在血管注射组雏鸡的心脏、肝脏、脑、肾脏、肌胃、胸肌、性腺等组织器官中均检测到了外源蛋白的表达；在性成熟的鸡体内只有心脏和胸肌能够检测外源蛋白表达。饲养至性成熟时,在血管注射组刚开产母鸡鸡蛋蛋黄中通过Western Blot短时间检测到外源蛋白的表达,但未能实现在蛋黄中持续表达。本实验成功构建了含有IgY重链恒定区基因的真核表达载体并生产出慢病毒,分别使用外周血管和胚盘下腔显微操作法注射鸡胚制备转基因鸡,在CMV启动子作用下,雏鸡体内组织器官中广泛检测到了外源蛋白的表达,但是性成熟后外源蛋白的表达只能在心脏和胸肌中检测到,在产蛋母鸡的蛋黄中短时间检测到外源蛋白的表达。综上,我们利用慢病毒载体制备转基因鸡生物反应器的研究工作已经获得了初步进展,仍需要继续研究以解决转基因性腺整合与持续稳定表达等问题。(本文来源于《河南农业大学》期刊2014-06-01）
盛巧玲,郭永丽,魏双施,王璞,高明春[8]（2013）在《鹅IgA重链恒定区的原核表达及其多克隆抗体的制备》一文中研究指出为了研究鹅免疫球蛋白的生物学功能,试验采用PCR技术,参考鹅IgA重链恒定区(F)基因序列设计引物,扩增出F基因,构建了含有F基因的重组原核表达质粒pET-28a-GoIgA-C,目的基因为1 339 bp,再进行IPTG诱导表达、ELISA检测和Western-blot分析。结果表明:获得了F的重组蛋白,分子质量约为50 ku,切胶纯化并以其为免疫原制备了多克隆抗体,抗体效价在1∶25 600以上;制备的多克隆抗体具备与鹅IgA反应的性质,与人、猪、牛和鸡免疫球蛋白均不发生反应。说明试验成功获得了F重组蛋白及小鼠多克隆抗体。(本文来源于《黑龙江畜牧兽医》期刊2013年23期）
张婧,章萍萍,祁培培,吴莉莉,刘超[9]（2013）在《人IgMμ链恒定区各肽段的基因合成原核表达及免疫原性分析》一文中研究指出目的全基因合成并原核表达免疫球蛋白M的重链(IgMμ链)及其各肽段,与天然的IgM、IgMμ链和IgG进行免疫原性的分析比较,进一步了解IgMμ链恒定区的结构与功能。方法根据GenBank数据库IgMμ链恒定区(CH1-CH4)的cDNA序列并进行必要的大肠杆菌密码子优化,利用重迭延伸PCR(OE-PCR)体外基因合成人IgMμ链恒定区全长(CH1-CH4)及其截断片段CH1-CH2和CH3-CH4。原核表达并纯化相应的3种融合蛋白PET32a-rMμCH1-CH4、PET32a-rMμCH1-CH2和PET32a-rMμCH3-CH4,并分别免疫BALB/c小鼠。同时设天然人IgM、IgMμ链和IgG免疫组为对照。再用ELISA法检测6种血清,分析比较其抗原性及免疫原性。结果利用OE-PCR方法体外成功合成1 359 bp的IgMμ链(CH1-CH4)全长基因、651 bp的IgMμ链CH1CH2和708 bp的IgMμ链CH3CH4,并构建相应原核表达质粒PET32a-rMμ1-4、PET32a-rMμ1-2和PET32a-rMμ3-4,血清ELISA检测结果显示:①IgG免疫原性>IgM>IgMμ链>rMμ1-4>rMμ1-2>rMμ3-4;②IgM免疫的血清与IgG有较强的交叉反应性,IgG免疫的血清与IgM也存在较强的交叉反应性;IgMμ链和重组μ链的各肽段免疫的血清与IgG均无明显的交叉反应性。结论重组的IgMμ链及其各肽段与天然IgMμ链有着相似的免疫原性和特异性,为基因工程得到抗人IgMμ链单克隆抗体奠定了研究基础。(本文来源于《安徽医科大学学报》期刊2013年09期）
戴东升,安俊[10]（2013）在《重组免疫球蛋白恒定区-肿瘤坏死因子受体II的应用研究》一文中研究指出目的基因经pEE12.4质粒扩增,脂质体Free Style TM MAX转染至中国仓鼠卵巢细胞(CHO-细胞),构建出细胞株.细胞株经50μmol/L L-Methionine Sulfoximine加压筛选、培养基、添加剂等优化后,最终获得活性蛋白表达量高达58.54mg/L的细胞株,培养液纯化后,目的蛋白在SDS-PAGE为一条带,HPLC纯度为96.5%.(本文来源于《山西大学学报(自然科学版)》期刊2013年03期）
和恒定区论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的真核表达、纯化人IgE重链恒定区2～4区(IgECε2-4)蛋白,利用表面等离子体共振技术(SPR)捕获其相互作用蛋白。方法构建3个含不同信号肽序列的IgECε2-4重组真核表达载体,分别瞬时转染HEK293FT悬浮细胞,优化选用表达量最高的重组质粒进行大量瞬转表达,镍柱亲和层析纯化。免疫荧光技术鉴定重组蛋白与KU812细胞表面IgE受体FcεRⅠ的结合,采用SPR技术捕捉人血清中与IgECε2-4相互作用的蛋白。结果含信号肽3(SP3)的重组质粒表达量最高,表达量约为6.2 mg/L;亲和纯化获得高纯度的人IgECε2-4蛋白;免疫荧光技术鉴定显示重组蛋白IgECε2-4可与KU812细胞表面受体结合。通过SPR技术捕获到人血清中39种可能与IgECε2-4结合的蛋白。结论获得纯化的重组蛋白IgECε2-4,IgECε2-4能与KU812细胞表面FcεR1α受体结合,靶标垂钓结果显示IgECε2-4能与人血清中的39种蛋白存在相互作用或有间接结合作用。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
和恒定区论文参考文献
[1].曹志伟,陈红英.鲫和虹鳟IgM重链恒定区的融合表达及抗血清的制备[J].水产学杂志.2019
[2].黄慧慧,王哲彦,杨正根,李珍,王萍.人IgE重链恒定区2～4区蛋白的真核表达、纯化及其相互作用分子捕获[J].细胞与分子免疫学杂志.2018
[3].苏畅.恒定区结构域替换对TCR分子功能的影响[D].广东药科大学.2016
[4].王培,王蓓,鲁义善,简纪常,吴灶和.吉富罗非鱼mIgD基因恒定区序列的原核表达及多克隆抗体的制备[J].安徽农学通报.2016
[5].翟真真.雉鸡IgY重链恒定区片段的遗传及生物学功能分析[D].山东农业大学.2016
[6].赵景壮,徐黎明,刘淼,曹永生,尹家胜.虹鳟IgM重链恒定区的表达及兔抗血清的制备[J].水产学报.2014
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[8].盛巧玲,郭永丽,魏双施,王璞,高明春.鹅IgA重链恒定区的原核表达及其多克隆抗体的制备[J].黑龙江畜牧兽医.2013
[9].张婧,章萍萍,祁培培,吴莉莉,刘超.人IgMμ链恒定区各肽段的基因合成原核表达及免疫原性分析[J].安徽医科大学学报.2013
[10].戴东升,安俊.重组免疫球蛋白恒定区-肿瘤坏死因子受体II的应用研究[J].山西大学学报(自然科学版).2013
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