中性胞苷脂材包载部分磷硫代反义核酸的生物活性评价及作用机制初探

论文摘要

目的反义核酸是一段与靶基因互补的单链寡核苷酸序列,通过与细胞内核酸杂交成双链结构抑制靶基因转录和翻译过程,从而调控基因表达。然而,无载体递送反义核酸跨膜能力较差且寡核苷酸磷酸二酯键易被核酶水解。为提高反义核酸入胞效率,并对活性作用的发挥进行进一步优化,本课题主要从寻求高效低毒的载体系统及优化修饰策略入手对其进行研究。方法本研究利用中性胞苷脂材（DNCA）混合阳离子脂质体（CLD）对反义核酸G3139包载递送,结合部分位点磷硫代（PS）修饰方式,考察不同修饰位点的序列活性与作用机制。结果与结论采用混合脂材包载能显著提高反义核酸G3139的抗MCF7/ADR细胞增殖能力,并发现9～16位（5′-端计算）区域内多位点（≥4）修饰物抗肿瘤活性较高。此外,G3139部分位点PS修饰物有效激活RNase H降解靶mRNA,并降低杂交双链Tm（DNA的熔解温度）值。结合转录组学与蛋白组学研究,确证减少PS修饰位点数可以降低反义核酸与非特异性靶标结合,从而降低毒副作用。

论文目录

• 1 方法与材料
•   1.1 细胞培养
•   1.2 中性脂质体包载反义核酸体系制备
•   1.3 混合脂质体包载反义核酸体系制备
•   1.4 细胞增殖抑制实验
•   1.5 电位及粒径考察
•   1.6 聚合酶链式反应 （PCR） 实时定量
•   1.7 圆二色谱 （CD） 检测
•   1.8 靶基因预测
•   1.9 血清稳定性实验
• 2 结果与讨论
•   2.1 混合脂质体包载反义核酸活性考察结果
•   2.2 离子环境对 G3139/mix 包封率及表面电性的影响
•   2.3 N-G3139 的部分位点磷硫代 （PS） 修饰对反义核酸对肿瘤细胞增殖抑制能力的影响
•   2.4 N-G3139 的 9～16 位附近区域磷硫代修饰序列活性评价
•   2.5 nS-G3139 对 Bcl-2 的 mRNA 沉默活性评价
•   2.6 nS-1316 的转录组学与蛋白组学分析
• 3 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 李伊丁,马元,赵文婷,潘宇飞,于小桐,王舒鹤,关注,王芳,张礼和,杨振军

关键词: 核苷碱基脂质材料,阳离子脂质材料,反义核酸,磷硫代修饰

来源: 中国药物化学杂志 2019年02期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,工程科技Ⅰ辑

专业: 有机化工,药学

单位: 北京大学药学院天然药物及仿生药物国家重点实验室,北京盈科瑞创新医药股份有限公司

基金: 国家科技部项目(2017ZX09303013),国家自然科学基金项目(21778006,21332010)

分类号: R943

DOI: 10.14142/j.cnki.cn21-1313/r.2019.02.001

页码: 87-95

总页数: 9

文件大小: 1340K

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