邓丽娟王洪州(通讯作者)银春王利民谷红明(四川绵阳四0四医院<川北医学院附属第二医院>四川绵阳621000)
【摘要】目的：探讨肺腺癌组织中基质金属蛋白酶9（MMP-9）、表皮生长因子受体（EGFR）的表达情况，分析MMP-9、EGFR的表达在肺腺癌侵袭、转移及预后中的生物学意义。方法：对85例肺腺癌组织及22例正常肺组织切片标本应用免疫组织化学方法检测MMP-9、EGFR的表达，进行统计学分析。结果：肺腺癌组织MMP-9表达显著高于癌旁正常肺组织(P<0.01)，有淋巴结转移者高于无淋巴结转移者(P<0.01)，Ⅲ～Ⅳ期高于I一Ⅱ期(P<0.05)肺腺癌组织中，MMP-9、EGFR表达明显升高，与肿瘤的分化程度、临床分期、淋巴结转移均有相关性（均P<0.05），与肿瘤的大小无关（均P>0.05）。结论：MMP-9、EGFR在人肺腺癌组织中高表达，并且与肿瘤的分化程度、临床分期、淋巴结转移的密切相关，可能在肺腺癌发生发展和侵袭转移中发挥着重要作用。
【关键词】肺腺癌基质金属蛋白酶9表皮生长因子受体免疫组织化学
【中图分类号】R73-3【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2012）27-0111-02
ExpressionofMMP-9andEGFRinLungAdenocarcinoma
DengLi-juan,WangHong-zhou,YinChun,WangLi-min,GuHong-ming
SichuanMianyang404hospital(ThesecondhospitalaffiliatedtotheNorthSichuanmedicalcollege)MianyangSichuan621000
【Abstract】Objective:Toinvestigattheexpressionandbiologicalcharacteristicsofmatrixmetalloproteinase-9(MMP-9),epidermalgrowthfactorreceptor(EGFR)inlungadenocarcinoma.Toanalyzetherelationshipwithinvasion,metastasisandprognosisinlungadenocarcinoma.Methods:ImmunohistochemicalmethodwasusedtodetecttheexpressionsofMMP-9andEGFRin85casesoflungadenocarcinomaand22casesofnormallungtissues.Results:TheexpressionofMMP-9inlungadenocarcinomatissueswassignificantlyhigherthanthatinpara-cancerousnormallungtissues(P<0.01).TheexpressionofMMP-9wassignificantlyhigherinlungadenocarcinomawithlymphnodemetastasisthaninlungadenocarcinomawithoutlymphnodemetastasis(P<0.01).TheexpressionofMMP-9wassignificantlyhigherinstage-Ⅲandstage-Ⅳtumoursthaninstage-Ⅰandstage-Ⅱtumours(P<0.05).TheexpressionsofMMP-9andEGFRwassignificantlycorrelatedinlungadenocarcinomatodifferentiation，TNMstageandlymphnodemetastasis(P<0.05).Itwasnorelationshipwiththehistologicaltypesandtumorsizeoflungadenocarcinoma(P>0.05).Conclusion:MMP-9、EGFRisover—expressedinhumanlungadenocarcinomatissueandwassignificantlycorrelatedinthedifferentiation,TNMstageandlymphnodemetastasisoftumour.MMP-9andEGFRmaybeplayanimportantroleintheintheevolution、invasionandmetastasiswithlungadenocarcinoma.
【Keywords】LungAdenocarcinomaMMP-9EGFRimmunohistochemistry
1材料与方法
1.1研究对象
选择我院病理科2002～2011年手术切除后经病理证实的肺腺癌存档标本85例，其中男性53例，女性32例；年龄35～78岁，中位年龄55岁，病理分级高中分化48例，低分化37例。根据2005年AJCC癌症分期手册》的TNM分期标准Ⅰ期27例、Ⅱ期33例、Ⅲ期19例、Ⅳ期5例。伴淋巴结转移组45例，无淋巴结转移组40例。所有的患者术前均未接受放、化疗。另取22例癌旁正常肺组织作为阴性对照，所取组织距病灶边缘5cm以上。
1.2方法
全部试剂均购于武汉博士德生物工程有限公司。依常规免疫组化方法，按试剂盒说明书操作，取阳性对照片同步操作作阳性对照；用PBS代替一抗作阴性对照。
1.3判断标准
MMP-9与EGFR的阳性细胞为瘤细胞浆或膜染成棕黄色，高倍镜下取5个不同视野，各计数400个细胞，按阳性细胞所占的百分率分为+～+++。无阳性细胞为阴性-；阳性细胞<30%为+；阳性细胞占30%-60%为++；阳性细胞>60%为+++。
1.4统计学处理
应用SPSS18.0统计软件进行统计学分析，计量资料采用x±s表示，均数比较采用t检验或方差分析；采用秩和检验分析MMP-9、EGFR肺腺癌组织中的表达与肺腺癌临床病理参数之间的关系,P<0.05为差异有显著性。
2结果
肺腺癌癌组织MMP-9表达显著高于癌旁正常肺组织(P<0.01)，有淋巴结转移者高于无淋巴结转移者(P<0.01)，Ⅲ～Ⅳ期高于I一Ⅱ期(P<0.05)。肺腺癌组织中MMP-9、EGFR表达明显升高，与肿瘤的分化程度、临床分期、淋巴结转移均有相关性（均P<0.05），与肿瘤的大小、病理分型无关（均P>0.05）。MMP-9与EGFR在肺腺癌中的表达呈显著正相关。
2.1肺腺癌组织和正常组织中MMP-9、EGFR的表达的比较。
85例肺腺癌组织中MMP-9、EGFR的阳性表达率分别为64.7.0%（55/85）、58.8%（50/85）。20例癌旁正常组织中MMP-9、EGFR的阳性表达率分别为18.2%（4/22）、9.0%（2/22）。肺癌组织和正常组织中MMP-9、EGFR的阳性表达率比较差异有统计学意义（P<0.05）（表1）。
表1MMP-9、EGFR在肺腺癌及正常肺组织中的表达
Table1ExpressionofMMP-9andEGFRinlungAdenocarcinomaandnormallungtissue
组织来源nMMP-9阳性数（%）PEGFR阳性数（%）P
肺癌组织8555（64.7）<0.0550（58.8）<0.05
正常肺组织224（18.2）2（9.0）
2.2MMP-9表达与肺腺癌临床病理特征关系
1）平均直径≤5cm的肺腺癌组织MMP-9阳性表达率为62.3%，平均直径>5cm的肺腺癌组织MMP-9阳性表达率为66.4.0%，两者间无显著差异（P>0.05）。
2）MMP-9表达的阳性率在高中分化和低分化肺腺癌组织中分别为48.3%、81.5%，高中分化组与低分化组MMP-9阳性表达有显著性差异（P<0.05）。
3）MMP-9阳性表达率在无淋巴结转移组为47.2%，有淋巴结转移组为82.3%，两组之间差异有显著性（P<0.05）。
4）MMP-9在肺腺癌组织中表达的阳性率Ⅰ+Ⅱ期为56.4%、Ⅲ+Ⅳ期为83.5%，两组间MMP-9阳性表达的差异有显著性（P<0.05）。
2.3EGFR表达与肺腺癌临床病理特征关系
1）平均直径≤5cm肺腺癌EGFR阳性表达率为49.3%，平均直径>5cm肺腺癌组织EGFR阳性表达率为65.6%，两者间无显著差异（P>0.05）。
2）EGFR表达的阳性率在高中分化和低分化肺腺癌组织中分别为43.4%、75.6%，高中分化组与低分化组EGFR阳性表达有显著性差异（P<0.05）。
3）EGFR阳性表达率在无淋巴结转移组为42.1%，有淋巴结转移组为72.2%，两组之间差异有显著性（P<0.05）。
4）EGFR在肺腺癌组织中表达的阳性率Ⅰ+Ⅱ期为45.2%，Ⅲ+Ⅳ期为78.3%，两组间EGFR阳性表达的差异有显著性（P<0.05）
3讨论
本研究显示，肺癌MMP-9表达高于癌旁正常肺组织(P<0.01)，与Melliek[1]及Jumper等[2]的研究结论一致。同时，本研究也显示有淋巴结转移者高于无淋巴结转移者(P<0.05)，Ⅲ一Ⅳ期高于I一Ⅱ期(P<0.05)。本实验中研究发现MMP-9表达与肺腺癌患者的组织类型和肿瘤大小无关，阳性率随着组织分化级别、临床分期升高而升高，有淋巴结转移的肿瘤组织MMP-9阳性率明显高于无淋巴结转移者，提示MMP-9阳性表达与肺腺癌转移能力呈正相关。Ruokolaine[3]认为MMP-9的阳性表达率越高，提示肿瘤的预后越差，这与本研究结果基本相似。MMP-9是基质金属蛋白酶（matrixmetalloproteinasesMMPs）中最为重要一种酶，MMPs有相似的结构特点，其分子基本结构由氨基端的信号肽和前肽区、中间的催化区和羧基端的类血红素结合蛋白区构成。MMPs中的MMP-9可降解细胞外基质中的Ⅳ型、V型胶原和明胶[4]。我们认为MMP-9表达增强后分解弹性蛋白和胶原蛋白，活化炎症细胞，破坏正常组织细胞的物理屏障，同时还可促进肿瘤血管的形成，从而促进癌细胞向周围正常组织侵袭。
表皮生长因子受体（EGFR）是跨膜受体酪氨酸激酶ErbB家族的一员，在所有的表皮细胞、基质细胞、部分神经胶质细胞和平滑肌细胞均表达。它在很多上皮性肿瘤中异常激活。受体异常激活有几种机制，包括受体高表达、基因扩增、基因突变、受体的配体高表达、和(或)负性调节机制失活等。EGFR介导的信号通路中任一环节受到干扰或破坏，都会使细胞的增殖、生长、分裂、分化从有控制状态转变为失控状态，导致肿瘤等恶性疾病的发生[5]。本实验观察到肺癌组织EGFR阳性表达率为58.8%，显著高于正常组织5.0%（P<0.05），提示EGFR过表达促进了肺腺癌的发生，术前检测肺癌组织标本的EGFR的表达情况可作为肺腺癌诊断参考指标之一，与TNM分期、分化程度及有无淋巴结转移显著相关（P<0.05），这与张志红[6]等研究基本一致。进一步研究发现EGFR表达水平与组织学类型无明显相关性（P>0.05），与尹广浩[7]等研究相似。这表明EGFR表达在肺腺癌中可能发挥促肿瘤细胞生长、增殖以及加速肿瘤细胞淋巴转移功能，参与肺腺癌的发展、转移。
综上所述，本研究结果提示了MMP-9、EGFR在人肺癌组织中功能性地高表达，并且与肿瘤的分化程度、临床分期、淋巴结转移的密切相关，可能在肺癌发生发展、侵袭转移和肿瘤血管生成中发挥着重要作用。肺腺癌组织的MMP-9、EGFR的表达对判断肿瘤的恶性程度、估计预后及抗肿瘤药物研制方面具有一定的指导意义。
参考文献
[1]MelliekAS，BlaekmoreD，WeinsteinSR，eta1.AnassesmentofMMPandTIMPgeneexpressionincelllinesandstroma-tumourdifferencesinmicrodissectedbreastcancerbiopsies[J].TumourBiol，2003，24(5)：258—270
[2]JumperC，CobosE，Loxc.Determinationoftheserummatrixmet-allopmteirase-9(MMP-9)andtissueinhibitorofmatrixmetalloproteinase-l(TIMP-1)inpatientswitheitheradvancedsmall—celllungcancerornon-small-celllungcancerpriortotreatment[J].RespirMed，2004，98(2)：173-177.
[3]RuokolainenH，PaakkoP，Turppeenniemi-HujanenT.expressionofMatrixprognosis[J].ClinCancerRes，2004(9)：310—313
[4]刘雪雁，徐刚，薛辛东.MMP-9和TIMP—I在高氧致CLD新生大鼠肺组织的动态变化及其对Ⅳ割胶原的影响[J].中国现代医学杂志，
[5]覃裕露，赵杨，申兴斌.EGF、、EGFR、C-erbB-2在恶性肿瘤中的研究进展[J].承德医学院学报,2012,29(2):182-185
[6]张志红，于敏，倪琛琛，等.EGFR在非小细胞肺癌组织中的表达及其初步临床意义[J].1临床肺科杂志，2010，15(8)：1079-1081.
[7]尹广浩,刘伟，刘国津，等.非小细胞肺癌的EGFR表达与EGFR基因突变的比较[J].ChinJLabDiagn，2009，13(2)：200-202。