一、LPS受体及其信号传导通路（论文文献综述）
高晓慧[1]（2021）在《苯并恶唑酮类抗炎化合物W3D对MD2和TLR4蛋白调控作用的研究》文中研究说明目的:课题组前期以苯并恶唑酮为母环设计合成了系列4位取代衍生物,并发现4-5’-二甲氨基萘-1’-磺酰氧基-苯并恶唑酮（W3D）具有较好的抗炎活性,且对TLR4/My D88/NF-κB信号通路具有调控作用,但其作用靶点尚不明确。本论文旨在以MD2和TLR4为候选靶蛋白,利用体外、体内及化学生物学等多种方法,研究W3D对上述蛋白的调控机制,为合理设计苯并恶唑酮类抗炎小分子化合物提供靶点依据。方法:第一部分化合物W3D对MD2、TLR4蛋白表达调控的作用研究1.Western Blot法检测化合物W3D对LPS诱导的RAW264.7细胞TLR4、MD2、p-IRAK4蛋白表达的影响。2.ELISA法检测化合物W3D对LPS诱导的RAW264.7细胞上清液中TLR4、MD2蛋白表达的影响。3.细胞免疫荧光法检测化合物W3D对LPS诱导的RAW264.7细胞NF-κB p65核转移的影响。第二部分MD2抑制剂MD2-IN-1对化合物W3D抗炎活性的影响MD2抑制剂MD2-IN-1阻断MD2蛋白后,LPS与化合物W3D共同处理细胞:1.Griess法测定LPS诱导的RAW264.7细胞上清液中NO释放量。2.ELISA法测定LPS诱导的RAW264.7细胞上清液中IL-6、TNF-α释放量。3.Western Blot法测定化合物W3D对LPS诱导的RAW264.7细胞MD2、TLR4蛋白表达的影响。4.细胞免疫荧光法检测化合物W3D对LPS诱导的RAW264.7细胞NF-κB p65核转移的影响。第三部分化合物W3D与MD2、TLR4蛋白相互作用研究1.流式细胞术检测化合物W3D对FITC-LPS结合细胞膜表面受体的竞争性抑制作用。2.DARTS和CETSA技术检测化合物W3D对MD2、TLR4蛋白稳定性的影响。3.荧光光谱技术检测化合物W3D与bis-ANS竞争性结合MD2蛋白的作用。4.BLI生物层干涉技术检测化合物W3D与MD2、TLR4蛋白的平衡解离常数KD。5.分子对接法模拟化合物W3D与MD2蛋白的结合。第四部分化合物W3D对LPS诱导的急性肺损伤的药效学研究气道滴注1 g·L-1LPS造成小鼠肺损伤,采用灌胃方式给予药物,并在12 h后处死小鼠:1.HE染色法观察小鼠肺组织损伤程度并计算肺组织湿干比。2.ELISA法检测小鼠肺组织中MPO活性和血清中TNF-α、IL-6、IL-1β、iNOS的释放量。3.Western Blot法检测小鼠肺组织TLR4信号通路相关蛋白的表达水平。结果:1.化合物W3D可显着抑制LPS诱导的RAW264.7细胞MD2、TLR4蛋白的表达,抑制IRAK4磷酸化和NF-κB p65的入核,减少细胞上清液中MD2、TLR4蛋白的表达,且呈现一定的剂量依赖性。2.流式细胞术荧光值表明化合物W3D可抑制LPS与RAW264.7细胞膜受体的结合。3.MD2抑制剂MD2-IN-1的加入,在一定程度上减弱了化合物W3D对NO、IL-6、TNF-α释放的抑制活性,降低了其对MD2、TLR4蛋白表达以及NF-κB p65入核的抑制作用。4.DARTS实验和CETSA实验表明化合物W3D可显着增强MD2、TLR4蛋白的酶稳定性和热稳定性。5.荧光光谱实验分析发现化合物W3D可以竞争性抑制bis-ANS与MD2蛋白结合,而使荧光强度减弱。6.BLI实验表明化合物W3D可与MD2蛋白发生直接作用,平衡解离常数KD值为5.875×10-6mol·L-1,而与TLR4蛋白无直接作用。7.计算机Docking结果显示化合物W3D与MD2蛋白疏水囊中的SER-120、SER118残基形成氢键。8.体内药效学研究显示化合物W3D可减轻LPS诱导的小鼠急性肺损伤,降低肺湿干重比、MPO酶活性以及血清中iNOS、TNF-α、IL-6和IL-1β的表达水平,同时可显着减轻肺组织中MD2、TLR4、NF-κB p65蛋白的表达,抑制IRAK4磷的酸化,呈现一定的剂量依赖性。结论:1.化合物W3D可抑制LPS诱导的RAW264.7细胞MD2、TLR4蛋白的表达。2.化合物W3D可通过氢键作用直接与MD2蛋白结合,竞争性抑制LPS与膜表面受体的结合,与bis-ANS竞争性结合MD2蛋白,与MD2蛋白的平衡解离常数为5.875×10-6mol·L-1,该结合作用使得MD2、TLR4蛋白酶稳定和热稳定性有所增强,为新型的MD2抑制剂。3.化合物W3D可通过调控TLR4/MD2/p IRAK4/NF-κB p65信号通路发挥治疗小鼠急性肺损伤的作用。
叶永慧[2]（2021）在《基于IRS-1/PI3K/AKT通路探讨枳葛口服液对酒精性肝病大鼠胰岛素抵抗的影响》文中研究表明目的:通过酒精诱导成功构建酒精性肝病大鼠模型,证实酒精诱导的酒精性肝病大鼠合并存在胰岛素抵抗状态,并探讨枳葛口服液对酒精性肝病大鼠胰岛素抵抗的影响及其可能机制。方法:将100只SD雄性大鼠随机分为五组,各组20只,正常组给予蒸馏水1.0 m L/100g/d灌胃,酒精性肝病大鼠模型组以52%泸州老白干1.0 m L/100g/d灌胃,枳葛口服液低、中、高剂量组分别在模型组基础上间隔6-8小时后给予不同剂量枳葛口服液0.25m L/100g/d、0.5 m L/100g/d和1.0 m L/100g/d灌胃。各组大鼠每四周取尾静脉血ELisa法检测空腹血糖（Fasting Blood Glucose,FBG）和空腹胰岛素（Fasting Insulin,FINS）水平,并据此计算胰岛素抵抗指数（Homa Insulin Resistance Index,HOMA-IR）及胰岛素敏感指数（Homa Insulin sensitivity Index,HOMA-IS）,持续处理12周后,随机处死模型组3只大鼠行HE染色检测证实存在酒精性肝病,继续处理4周即持续处理16周后,末次给药12小时后禁食不禁饮,取空腹尾静脉血（ELisa法检测FBG、FINS）后灌胃50%葡萄糖,行口服葡萄糖耐糖试验（Oral Glucose Tolerance Test,OGTT）并计算曲线下面积（Area under the curve,AUC）,处死大鼠,腹主动脉取血,末次检测FBG、FINS,计算胰岛素抵抗指数,证实酒精性肝病大鼠模型存在胰岛素抵抗状态;取肝组织行HE染色及免疫组化法观察各组大鼠肝脏组织病理学变化,并取肝脏提取总蛋白western blotting法检测IRS-1、PI3K、AKT、GLUT-2等IRS-1/PI3K/AKT通路相关蛋白表达水平。结果:1.各组大鼠肝脏组织病理学变化比较（HE染色×400）:正常组肝细胞形态结构整齐规则,边界分明,呈放射状分布,未见明显脂滴,脂肪空泡等;模型组肝细胞结构排列紊乱,可见肝细胞明显肿大,边界模糊,细胞内可见大量大小不一的泡性脂肪空泡;高剂量组肝细胞结构较整齐规则,大多接近正常组肝细胞,呈放射状排列,可见少量微小脂肪空泡;与模型组相比较,中剂量组肝细胞形态结构有所改善,但差于高剂量组,肝细胞稍肿胀,可见散在脂肪空泡,边界稍模糊;低剂量组可见肝细胞肿大明显,结构不规则,散在大小不等脂肪空泡,与模型组比较无明显改善。2.各阶段各组大鼠胰岛素抵抗相关指标变化比较:与正常组相比较,各阶段模型组大鼠胰岛素抵抗相关指数（FBG、FINS、HOMA-IR）明显升高,HOMA-IS显着降低（P<0.01或P<0.05）,与模型组相比较,枳葛口服液高、中剂量组胰岛素抵抗相关指数（FBG、FINS、HOMA-IR）明显降低（P<0.05）,HOMA-IS显着升高（P<0.05）;通过计算OGTT AUC可知,与正常组相比较,模型组OGTT AUC明显升高（P<0.01）;与模型组比较,枳葛口服液各剂量组OGTT AUC均明显降低（P<0.01或P<0.05）。3.各组大鼠肝脏IRS-1/PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达水平比较:Western blotting对平均灰度值进行半定量分析:与正常组相比较,模型组IRS-1、PI3K、P-PI3K、AKT、P-AKT、GLUT-2蛋白表达水平显着降低（P<0.01）;与模型组比较,枳葛口服液高、中剂量组以上各蛋白表达水平均有所升高（P<0.01或P<0.05）,但中剂量组次于高剂量组;低剂量组与模型组相比,PI3K、P-PI3K、AKT较前有所改善（P<0.01或P<0.05）,GLUT-2、IRS-1、P-AKT无明显改善（P>0.05）。免疫组化法对平均光密度值进行半定量分析:与正常组相比较,模型组肝脏组织IRS-1、PI3K、P-PI3K、AKT、P-AKT、GLUT-2蛋白表达水平显着降低（P<0.01）;与模型组相比较,枳葛口服液高、中、低剂量组肝脏组织内IRS-1、PI3K、P-PI3K、AKT、P-AKT、GLUT-2蛋白表达水平均有所升高,其中高、中剂量组最显着（P<0.01）,低剂量次之（P<0.05）。结论:1.酒精能成功诱导酒精性肝病大鼠模型,且酒精诱导的酒精性肝病大鼠模型合并存在胰岛素抵抗状态及对IRS-1/PI3K/AKT信号通路的改变;2.酒精能抑制IRS-1/PI3K/AKT信号通路相关蛋白的表达,枳葛口服液可改善酒精性肝病大鼠胰岛素抵抗状态,其作用机制可能与激活IRS-1/PI3K/AKT信号通路参与糖代谢的调节密切相关。
彭龙[3]（2021）在《代谢综合征并发症回顾性研究及柴芪汤调控代谢综合征肠道菌群机制研究》文中认为本文共分为文献综述、临床研究及动物实验研究三部分,在文献综述部分阐述了现代医学和中医学对代谢综合征（Metabolic Syndrome,MetS）和肠道菌群以及二者之间关系的认识,在临床研究部分则对MetS并发症发病规律、中医证型分布规律和潜在危险因素进行了探寻,在动物实验研究部分探讨了饮食诱导的肠道菌群紊乱引起MetS的机制及柴芪汤对该机制的调控作用。一、文献综述本研究在Pubmed和Cnki上检索收集近十年的中英文文献资料,并进行归纳整理,总结了 MetS及其并发症的流行病学、病因学、诊断学、治疗方式等方面的研究进展,以及肠道菌群与MetS关系的研究进展,并将中医学对MetS的认识进行了归纳总结。二、临床研究目的:探讨MetS并发症的发病规律和潜在危险因素和中医证型分布规律。方法:收集2018年9月至2019年8月北京中医药大学东方医院内分泌科住院患者中符合MetS诊断标准的患者,整理并统计分析MetS患者的年龄、体重、身高、空腹血糖、血脂、血压、空腹胰岛素、空腹C肽、HbA1c、中医证型并发症发病情况。结果:共收集MetS患者606例,男性259人,女性347人,男女比1:1.3,年龄区间20-94岁,50-69岁人群占比最高（57.9%）。肥胖（BMI>25kg/m2）占比与年龄呈负相关,血糖控制不佳（HbA1c>8%）、血脂控制不佳占比在80岁以下人群与年龄呈负相关,高血压占比与年龄呈正相关,肝郁脾虚证在所有人群中均占比最高,且与年龄呈负相关,脾肾两虚证MetS患者CKD发病率较高。各MetS并发症发病率由高到低依次为:颈动脉硬化症（carotid atherosclerosis,CAS）（77.9%）>下肢动脉硬化症（low extremity atherosclerosis disease,LEASD）（73.4%）>代谢相关性脂肪肝病（metabolic dysfunction-associated fatty liver disease,MAFLD）（71.1%）>冠状动脉粥样硬化心脏病（coronary atherosclerotic heart disease,CHD）（33.0%）>脑卒中（cerebralvascularaccident,CVA）（28.4%）>慢性肾脏病（chronic kidney diseases,CKD）（8.6%）。各并发症相关因素分析结果分别为:并发CAS的危险因素为罹患高血压、年龄≥ 40岁,并发LEASD的危险因素为男性、罹患高血压、年龄≥60岁,并发MAFLD的危险因素为BMI≥25kg/m2、TG>1.7mmol/L,并发CHD的危险因素为罹患高血压、年龄≥60岁,并发CVA的危险因素为女性、罹患高血压、年龄≥ 80岁,并发CKD的危险因素为罹患高血压、年龄≥ 80岁、空腹C肽>4.4ng/mL。结论:50-69岁是MetS的高发年龄段,年轻MetS患者普遍血糖、血脂、体重普遍控制不佳。肝郁脾虚是MetS的主要病机,并且更常见于发病初期。MetS并发症中,CAS、LEASD、MAFLD发病率最高,CHD、CVA次之,CKD最低。年龄和高血压是CAS、LEASD、CHD、CVA、CKD的共同危险因素,其中年龄≥40岁是CAS的危险因素,年龄≥60岁是CHD、LEASD的危险因素,年龄≥80岁是CVA、CKD的危险因素。性别是LEASD和CVA的特殊危险因素,男性更易患LEASD,女性更易患CVA,空腹C肽>4.4ng/mL是CKD的特殊危险因素,肥胖、甘油三脂升高是MAFLD的危险因素。三、实验研究目的:探讨饮食诱导的肠道菌群紊乱引起MetS的机制及柴芪汤对该机制的调控作用。方法:以高脂高糖高盐饲料喂养SD大鼠建立MetS模型,8周建模成功后,予药物干预。实验第16周末测量体重、脂肪重量、血压后处死取材,检测血糖、血脂,检测血清中LPS、IL-6、TNF-α含量,检测脂肪组织中NF-κBp65、TLR4、MyD88蛋白及基因表达情况,以及脂肪组织中巨噬细胞浸润情况,并应用16S rRNA高通量测序技术检测粪便中菌群基因。结果:模型组相较于空白对照组、中药组、饮食干预组,血糖、血脂、血压、体重显着增加,且血清LPS、IL-6、TNF-α含量升高,脂肪组织中NF-κB p65、TLR4、MyD88蛋白及基因表达增加,脂肪组织巨噬细胞浸润明显;而柴芪汤和限制热量摄入均能有效逆转上述指标变化及病理改变,且柴芪汤强于限制热量摄入。模型组相较于空白对照组、中药组、饮食干预组,肠道菌群物种组成及功能发生改变,厚壁菌门/拟杆菌门比例升高,G-菌比例升高,Blautia、Turicibacter和螺菌科下的OTU504、OTU552、OTU485相对丰度升高,乳杆菌、瘤胃菌科和Clostridiaceae1科下的OTU276相对丰度降低,肠道菌群的异常凋亡与迁移活跃,宿主对食物中营养物质的吸收利用能力的下降,肠道致病菌相对比例增加;柴芪汤和限制热量摄入均可有效逆转上述肠道菌群物种组成和功能的改变,且柴芪汤提高瘤胃菌科丰度的作用显着强于正常饮食和限制热量摄入。结论:柴芪汤和限制热量摄入均能有效改善MetS大鼠体重、血压、血脂、血糖,并且柴芪汤减重和降压效果优于限制热量摄入。肠道菌中G-菌相对丰度增加,LPS释放增多,通过LPS-TLR4/MyD88-NF-κB信号传导途径引起代谢性内毒素血症,这可能是饮食诱导的肠道菌群紊乱引起MetS发病的主要机制。同时肠道菌群物种组成改变,肠道菌群的异常凋亡与迁移以及宿主对食物中营养物质的吸收利用能力的下降和肠道致病菌比例增加,可能是MetS发病的潜在机制。柴芪汤和限制热量摄入治疗MetS,主要通过降低肠道菌群中G-菌相对丰度和抑制LPS释放,进而抑制LPS-TLR4-MyD88-NF-κB信号传导通路,减轻代谢性内毒素血症来实现,且柴芪汤效果优于限制热量摄入。同时二者还能够通过逆转MetS肠道菌群物种组成变化,减少细菌的异常凋亡与迁移,增强宿主对营养物质的吸收利用能力,降低肠道内致病菌相对比例等机制改善MetS的代谢障碍,并且瘤胃菌科的丰度增加可能是柴芪汤治疗代谢综合征的重要潜在机制。
郑波[4]（2020）在《热挤压3D打印构建大米淀粉-儿茶素复合物的消化性能及抗肥胖机理研究》文中研究说明随着经济的快速增长和疾病谱的不断演变,由于过度能量摄入和消耗不平衡导致的肥胖症与日俱增,已成为威胁人类健康和社会发展不可忽视的世界性公共卫生问题。而基于膳食干预理念设计具有个性化健康食品实现对肥胖的防御与治疗,已成为当今食品营养科学领域的研究前沿和热点。本论文考察了目前国内外对肥胖症营养干预研究的现状,及热挤压3D打印技术个性化营养食品定制的特点和发展趋势,提出利用热挤压3D打印协同儿茶素分子相互作用调控大米主要营养成分大米淀粉的消化性能和营养功能,深入系统研究所构建的大米淀粉-儿茶素复合物（3DP-REC）的抗酶解机理和抗肥胖机制,以期从新的视觉设计健康主食等淀粉类食品。研究具有前沿性和重要的科学意义,对热挤压3D打印技术应用于健康淀粉类食品的个性化定制及膳食干预防治肥胖起到积极的促进作用。采用现代结构表征技术和分子动力学模拟方法,阐明3DP-REC结构演变与抗消化性能的关系及其抗酶解机理。结果显示,热挤压3D打印可增加糊化大米淀粉的单螺旋结构、双螺旋结构、相对结晶度、纳米聚集体有序结构和表面短程有序结构,减少无定形结构,提高整体结构有序化程度;儿茶素分子的引入一方面通过疏水作用力进入直链淀粉螺旋空腔形成单螺旋复合物和V型结晶结构,及与淀粉分子发生氢键相互作用,导致形成新的双螺旋结构、纳米聚集体有序结构和局部排列致密结构等短程有序结构,进一步增加大米淀粉结构的有序化。结构有序化的提高即分子链排列更加致密能有效阻碍胰α-淀粉酶在淀粉分子中的迁移和结合,促进SDS和RS生成;另一方面3DP-REC无定形结构区域中儿茶素分子与淀粉分子形成结合力较弱的以π-π为主导、氢键为辅的相互作用,在消化环境中易发生解离,游离儿茶素与胰α-淀粉酶的Trp59位点发生结合,屏蔽淀粉与胰α-淀粉酶特异结合的正构活性位点,起到酶抑制剂的作用。可见,3DPREC的抗酶解机理为通过演变形成长程有序和短程有序结构及儿茶素解离成酶抑制剂,协同作用有效阻隔胰α-淀粉酶的降解,从而降低RDS含量,提高SDS和RS含量。结合脂质组学及肝脏转录组学等方法,从基因水平揭示不同儿茶素添加量（2.5%、5%和7.5%）的3DP-REC对高脂膳食肥胖受试鼠的抗肥胖作用机制。研究发现,3DPREC干预是通过调节肝脏糖脂代谢通路中关键基因的表达促进肝脏糖原生成和胰岛素分泌,促进脂肪酸β-氧化、肝脏胆汁酸合成、抑制脂肪酸合成及胆固醇合成来显着降低机体血糖水平,及通过降低血清磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、甘油三酯、神经酰胺、磷脂酰甘油、鞘胺醇等脂质合成改善血脂水平,从而有效抑制脂质沉积,抵御由高脂膳食引起的肥胖。此外,3DP-REC干预还可下调促炎关键基因改善肝功能代谢紊乱、炎症状态、氧化应激和由炎症引起的组织损伤。除血糖外其余的上述改善作用随3DP-REC中儿茶素含量增加而增强,3DP-7.5%REC的干预效果最佳,达到正常组水平。利用16S r RNA高通量测序等方法进一步探究3DP-REC干预对高脂膳食肥胖大鼠肠道微生态的影响及与抗肥胖的关系。结果显示,3DP-REC干预显着改善由高脂膳食引起的结肠组织损伤,通过促进胃肠道激素的表达及降低肠道中总胆汁酸水平能有效降低能量摄入和抑制脂质沉积,且干预效果存在对3DP-REC中儿茶素含量的依赖性;3DPREC干预还可促进肠道中如乳杆菌属和双歧杆菌属等有益菌的丰度,改善肠道菌群结构,尤其是通过促进产短链脂肪酸菌的生长繁殖显着提高肠道中丙酸和丁酸的含量,其中3DP-2.5%REC干预显着提高丁酸含量,3DP-5%REC干预显着提高丙酸含量;KEGG功能预测结果显示,3DP-REC干预可通过激活产热功能、调节蛋白质代谢通路等防止脂质沉积;对3DP-REC干预后差异菌群变化与机体生理代谢指标的相关性分析发现,3DPREC进入结肠后通过有效抑制Romboutsia等有害菌的生长代谢,促进Veillonella、Butyricicoccus、Ruminococcaceae、Bifidobacterium等产丙酸和丁酸有益菌的繁殖,实现对机体由高脂膳食引起的血脂紊乱、肝功能代谢异常和氧化应激损伤的改善。基于上述结果初步建立了“REC膳食干预-肠道菌群结构-肥胖相关代谢生化指标”的相互影响关系。融合TSE能量代谢监测及分子生物学方法,阐明3DP-REC对棕色脂肪组织产热功能的影响及调节能量代谢和抗肥胖作用的机制。研究表明,3DP-REC干预可显着促进棕色脂肪及米色脂肪组织中脂质分解相关关键酶和基因的表达和加快脂质分解速率,为线粒体提供能量从而显着提高UCP1蛋白的表达,激活棕色脂肪的产热功能,提高机体的能量消耗,增加静息状态下的基础代谢,改善由高脂膳食引起的胰岛素抵抗继而有效抵御脂肪沉积,降低机体体重和体脂肪含量,最终达到抗肥胖的效果。而其中干预促进室温下机体产热的效果随3DP-REC中儿茶素的含量增加趋势更为明显。上述研究表明利用热挤压3D打印协同儿茶素复合作用可有效调控大米淀粉的抗消化性能,所构建的3DP-REC具有很好的抗肥胖作用及营养功能,所获得的研究结果和提出的机理具有很好的学术价值,可望为实现个性化营养健康淀粉类食品的创制提供新的设计思路和理论指导。
王申锋[5]（2020）在《“固元颗粒”免疫增强剂研制及其在鸡疫苗免疫中的应用》文中研究指明中药具有很好的增强免疫力的作用,成为当前替代饲料中抗生素添加的一个重要方向。“固元颗粒”原方出自《新药转正标准》,由黄芪和生晒参芦头配方而成,其功效是益气固本。如果直接将其应用于兽医临床,提高动物的免疫功能,成本偏高,很难在养殖业中推广。但是,人用中药加工过程中产生的一些附属提取物,以及在非贵重药材中提取到的一些有效成分,成本相对较低,具有开发兽医临床用药的潜力。为此,我们以黄芪多糖（Astragalus Polysaccharides,APS）和人参茎叶皂苷（Ginseng Stem-leaf Saponins,GSLS）代替“固元颗粒”配方中的黄芪和生晒参芦头,大幅降低成本,配伍组方,制成可溶性颗粒,称为兽用“固元颗粒”,用于增强动物抗病能力和疫苗免疫效果。本论文研究该制剂工艺、质量标准,并评估其对鸡的安全性、有效性和最适添加量。检测该制剂对免疫抑制条件下鸡和小鼠的免疫调节作用,初步揭示其对蛋鸡淋巴细胞TLR4信号通路的激活及相关细胞因子的分泌机制,并在蛋鸡鸡群进行应用试验,为预防禽病毒性疾病提供新方法。主要结果总结如下:1.优化并确定了“固元颗粒”的制剂工艺。通过制剂成型工艺预实验、辅料选择、润湿剂筛选和验证试验确定了最佳成型工艺。配方为:APS 110 g、GSLS100 g、蔗糖590 g和糊精200 g。制备工艺为:将上述原材料混合均匀,采用75%乙醇为润湿剂,制软材,制粒,60℃烘干,整粒。所得颗粒易成型,颗粒完整,细粉较少。3个试验批次所得颗粒质量一致,该工艺稳定可行。2.建立了“固元颗粒”中人参皂苷Rg1、Re、Rd含量的高效液相色谱测定方法。通过精密度试验、重复性试验、稳定性试验及回收率试验证实,RSD<2%,测定三批“固元颗粒”,每1 g颗粒中Rg1+Re+Rd总量均在30 mg以上。该方法操作简便,测量准确,可作为对该制剂质量控制的内容记入质量标准。3.“固元颗粒”具有良好的安全性和有效性。对鸡按推荐量的1、3、5、10倍（0.05、0.15、0.25和0.5 g/kg体重）剂量混饮,连续7 d,停药后继续饲养2周。记录鸡行为、体重的变化,检测血常规和血液生化指标以及脏器指数,结果均未见异常,表明该制剂对鸡临床用药具有较高的安全性。另外,不同剂量的“固元颗粒”均可有效提高蛋鸡的抗体效价水平、红细胞花环率和生产性能指标,其中50 mg/kg为最适应用剂量。“固元颗粒”对注射新城疫（ND）疫苗的鸡群具有免疫增强作用。使用50mg/kg该颗粒对鸡进行免疫调节试验,测定脏器指数、新城疫抗体效价和脾淋巴细胞转化指数,证实用药2-3周后其体内NDV抗体效价显着高于对照组（P<0.05）。“固元颗粒”对免疫抑制鸡具有免疫调理作用。对经环磷酰胺（Cyclophosphamide,CTX）导致的免疫抑制鸡使用“固元颗粒”后,可使其免疫抑制现象得到显着缓解（P<0.05）。另外,在疫苗免疫后7、14和21d,上述4个给药处理组的脾淋巴细胞经刀豆蛋白A（ConA）和LPS诱导,淋巴细胞刺激指数均显着高于CTX组（P<0.05）。“固元颗粒”对免疫抑制小鼠亦有免疫调节作用。“固元颗粒”中、高剂量组可显着提高免疫抑制小鼠的脾脏指数和胸腺指数（P<0.05）。给药15 d后,免疫抑制小鼠IL-2和IFN-γ含量接近正常小鼠水平,其中“固元颗粒”中剂量组（50 mg/kg）效果最为明显。另外,各剂量组的脾淋巴细胞转化率与CTX组相比较极显着提升（P<0.01）。4.“固元颗粒”促进蛋鸡淋巴细胞TLR4信号通路的激活及相关细胞因子的分泌。分离蛋鸡外周血淋巴细胞,与不同浓度的“固元颗粒”（终浓度200、100、50、25、0μg/mL,阳性对照为浓度100μg/mL的APS）分别培养16 h、24h、32 h、48 h,采用RT-PCR方法检测淋巴细胞中TLR4、MyD88、TRAF-6、TRIF、IRF3、IFN-βmRNA表达量。收集培养24 h的淋巴细胞上清液,用ELISA测定cGMP、cAMP、NO、iNOS和Ca2+的含量。结果显示,“固元颗粒”通过TLR4受体激活MyD88依赖性和TRIF依赖性两条信号通路,还可降低鸡外周淋巴细胞培养上清中cAMP的含量,提高cGMP、Ca2+、NO和iNOS的含量,从而调节蛋鸡的免疫功能。5.“固元颗粒”在鸡群中应用可促进疫苗免疫效果。随机选择2栋鸡舍,分为“固元颗粒”+疫苗免疫组和单独疫苗免疫组,各3100只鸡,按剂量50 mg/kg体重饮水进行临床应用试验。结果显示,与单独疫苗对照组相比,“固元颗粒”试验组的疫苗免疫抗体效价显着提高,发病率和死亡率分别下降0.7和0.8个百分点,表明“固元颗粒”在大群临床试验中,能够有效降低发病率和死亡率,增加养殖收益。综上所述,本研究确定了“固元颗粒”稳定的制备工艺并制定了其质量标准,证实制剂安全有效。初步证实该颗粒制剂可通过TLR4受体激活MyD88和TRIF通路,降低cAMP含量,提高cGMP、Ca2+、NO、iNOS含量,从而调节鸡的免疫应答。“固元颗粒”能够明显提高蛋鸡的疫苗免疫后特异性抗体的分泌水平,降低发病率和死亡率,具有较好的应用前景。
解颖颖[6]（2020）在《HMGB1/TLR2对奶牛卵巢颗粒细胞排卵相关基因的影响及姜黄素对其干预作用》文中提出卵巢疾病是导致奶牛繁殖障碍的重要原因之一。深入探讨奶牛卵巢生理功能和发病学机制,可为奶牛卵巢疾病更加合理治疗方案的制定和靶向治疗药物的筛选提供科学依据。大量研究证明,哺乳动物排卵过程类似于炎症,先天免疫在其中发挥着重要作用。TLRs是动物先天免疫系统中一类具有重要功能的PRRs,已被证明存在于多种哺乳动物卵巢组织,在卵巢生理活动和卵巢相关疾病发生发展过程中发挥重要作用。随着人们对TLRs在卵巢先天免疫研究方面的深入,TLR2/4的内源性配体HMGB1在卵泡液中的作用引起了研究者的兴趣。但是到目前为止,HMGB1和TLRs在卵巢活动及相关卵巢疾病中的功能还不甚明确,其在奶牛卵巢颗粒细胞中的作用研究报道较少。本论文以原代奶牛卵巢颗粒细胞为对象,采用qRT-PCR、免疫印迹、免疫组化、免疫共沉淀、间接免疫荧光、ELISA和基因沉默等技术,研究了HMGB1和TLR2在不同发育阶段卵泡来源的颗粒细胞中的表达规律及调控其表达的因素,分析了HMGB1/TLR2对排卵相关基因的影响及姜黄素通过HMGB1/TLR2/NF-κB对排卵相关基因的干预作用。结果表明:来源于不同发育阶段的健康卵泡颗粒细胞均可高表达TLR3、TLR1、TLR6、TLR2、TLR10和HMGB1,低表达TLR4和TLR5,不表达TLR7/8/9,TLRs和HMGB1的表达水平随着卵泡的发育呈逐渐升高趋势;TLR2分别与HMGB1、TLR1和TLR6之间存在交叉对话,这种对话也会随着卵泡的发育呈增强趋势;用5种浓度的FSH刺激卵巢颗粒细胞6 hr,其中12.5、25、50 mIU/mL FSH不会抑制细胞活性,25和50 mIU/mL FSH能显着上调HMGB1、TLR2、TLR1、TLR6和MyD88的表达水平,12.5、100和500 mIU/mL FSH对这些蛋白的调节作用不明显。在细胞培养液中加入0.2、1和5μg/mL HMGB1孵育6 hr后,5μg/mL HMGB1能显着上调卵巢颗粒细胞内TLR2、EGFR、VEGF、StAR、TIMP1/2的mRNA水平与TLR2、TLR1、TLR6、p-NF-κB p65蛋白水平,引起细胞NF-κB p65发生核易位和大量分泌IL-6;HMGB1分别与TLR2、TLR1、TLR6和p-NF-κB p65之间存在交叉对话,对话强度与HMGB1有剂量依赖性,siRNA靶向基因沉默TLR2能显着逆转HMGB1引起的上述变化。分别用1.25、2.5和5μg/mL姜黄素预孵育卵巢颗粒细胞6 hr,再用5μg/mL HMGB1孵育卵巢颗粒细胞6 hr后,5μg/mL姜黄素能显着下调HMGB1引起的TLR2与排卵相关基因的mRNA水平变化、显着下调TLR2、TLR1、TLR6和p-NF-κB p65蛋白水平、抑制NF-κB p65的核易位和IL-6的分泌,降低HMGB1与TLR2、TLR1、TLR6和p-NF-κB p65的交叉对话。综上所述,奶牛不同发育阶段的卵泡颗粒细胞能表达TLRs家族成员和HMGB1,表达水平与卵泡发育程度有相关性;FSH对卵巢颗粒细胞HMGB1和TLR2的表达有一定调控作用;HMGB1能通过TLR2激活颗粒细胞中的NF-κB信号通路,刺激细胞大量分泌IL-6,进而影响排卵相关基因表达;姜黄素干预能显着逆转HMGB1对TLR2/NF-κB的激活,抑制IL-6的分泌,影响排卵相关基因的表达。HMGB1可以作为评估卵泡发育程度的指示性指标及治疗卵巢相关疾病的潜在性靶点,但仍需深入研究。
王佳丽[7]（2020）在《脂多糖通过诱导IFIT1表达促进人脐静脉内皮细胞炎症反应》文中研究指明研究背景和目的:动脉粥样硬化（Atherosclerosis,AS）是一种严重危害人类健康的慢性炎症性疾病,其发病率和死亡率呈明显上升趋势,尽管AS形成过程非常复杂,但目前普遍认为从内皮细胞损伤、AS斑块的破裂到血栓形成,炎症反应贯穿了 AS发生发展的全部阶段。血管壁在AS早期表现为急性渗出性炎症,在AS进展期表现为慢性增生性炎症。既往的研究证明,促炎因子白细胞介素（Interleukin,IL）-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α（Tumor necrosis factor-α,TNF-α）和核转录因子-kappa B（Nuclear factor kappa B,NF-κB）在AS的发生发展及其转归中发挥关键作用。脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）是革兰氏阴性细菌细胞壁的主要成分,是细菌死亡溶解后,从细菌胞壁中释放出来的重要免疫调节分子,所以又称内毒素（Endotoxin）。吸收外源性脂多糖导致血管内皮细胞损伤,引起促炎因子IL-1β、IL-6、TNF-α和核转录因子NF-κB的表达升高,从而诱导机体的炎症反应。尽管众多研究表明LPS可诱导IL-1β、IL-6、TNF-α和NF-κB的表达,但其具体机制仍不清楚,还有待进一步研究。干扰素刺激基因（IFN stimulated genes,ISGs）共有 4 个成员:IFIT1/ISG56,IFIT2/ISG54,IFIT3/ISG60 和 IFIT5/ISG5,其中 ISG56 又称为 IFIT1（Interferon-induced protein with tetratricopeptide repeats 1）基因,人类 IFIT1 基因定位于10q23.31,IFIT1诱导蛋白为胞浆蛋白,正常生理状态时,绝大多数细胞不表达IFIT1,但干扰素、病毒感染或LPS可以诱导其转录。研究发现IFIT1 mRNA水平在M1极化的巨噬细胞中明显上调,IFIT1在AS小鼠主动脉窦和头臂动脉切片的巨噬细胞亚群中高表达,说明IFIT1可能与炎症反应有关。但是IFIT1是否参与内皮细胞炎症反应,及其相关机制仍需要进一步探索。研究材料与方法:1.LPS对人脐静脉内皮细胞IFIT1的影响使用0,250,500,1000ng/mL四个浓度梯度的LPS处理人脐静脉内皮细胞,24h后,提取mRNA和总蛋白,分别用实时荧光定量PCR（Real-time Quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR）和 western blotting（WB）检测IFIT1 mRNA和蛋白的表达水平。此外,为研究LPS处理人脐静脉内皮细胞不同时间对IFIT1表达的影响,分别使用1000ng/mL的LPS处理内皮细胞0,6,12,24h后,提取mRNA和总蛋白,采用qRT-PCR和WB检测IFIT1的mRNA和蛋白表达水平。2.构建IFIT1过表达的人脐静脉内皮细胞模型构建过表达IFIT1的质粒以及阴性对照质粒载体,转染人脐静脉内皮细胞后,分别通过qRT-PCR技术和WB检测IFIT1的表达情况,验证IFIT1过表达效率;加或不加LPS处理24h后,用qRT-PCR和WB检测IFIT1、IL-1β、IL-6、TNF-α和NF-κB的mRNA和蛋白表达水平。3.构建IFIT1敲减的人脐静脉内皮细胞模型构建特异靶向IFIT1的siRNA以及阴性对照siRNA载体,转染人脐静脉内皮细胞后,分别通过qRT-PCR技术和WB检测IFIT1的表达情况,验证IFIT1干扰效率;加或不加LPS处理24h后,用qRT-PCR和WB检测IFIT1、IL-1β、IL-6、TNF-α和NF-κB的mRNA和蛋白表达水平。研究结果:1.使用0,250,500,1000ng/mL四个浓度梯度的LPS处理人脐静脉内皮细胞24h后,通过qRT-PCR和western blotting检测IFIT1的mRNA和蛋白表达水平,结果发现LPS可浓度依赖性上调IFIT1的表达,且1000ng/mL时效果较明显。此外,用1000ng/mL的LPS分别处理人脐静脉内皮细胞0,6,12,24h后,通过qRT-PCR和WB检测IFIT1的mRNA和蛋白表达水平,结果发现LPS可呈时间依赖性上调人脐静脉内皮细胞中IFIT1 mRNA和蛋白的表达水平。2.对转染IFIT1过表达的质粒以及阴性对照质粒载体的人脐静脉内皮细胞中IFIT1的表达量进行qRT-PCR和WB检测,结果发现转染IFIT1过表达质粒载体的人脐静脉内皮细胞中IFIT1的表达量明显高于对照细胞株（P<0.05）;使用LPS处理已成功构建的过表达IFIT1的人脐静脉内皮细胞模型,通过qRT-PCR 和 WB 检测 IFIT1、IL-1β、IL-6、TNF-α 和 NF-κB 的 mRNA 和蛋白表达水平,结果发现过表达IFIT1可上调IL-1β、IL-6、TNF-α和NF-κB的mRNA和蛋白的表达水平,且发现LPS处理过表达IFIT1的人脐静脉内皮细胞模型可进一步上调上述炎性因子和NF-κB的mRNA和蛋白表达水平。3.对转染IFIT1小干扰RNA载体以及阴性对照载体的人脐静脉内皮细胞中IFIT1的表达量进行qRT-PCR和WB检测,结果发现干扰细胞株中IFIT1的表达量明显低于对照细胞株（P<0.05）,表明敲减IFIT1的人脐静脉内皮细胞模型已成功构建。使用LPS处理已成功构建的敲减IFIT1的人脐静脉内皮细胞模型,通过qRT-PCR和WB检测IL-1β、IL-6、TNF-α和NF-κB的mRNA和蛋白表达水平,结果发现敲减IFIT1可下调IL-1β、IL-6、TNF-α和NF-κB的mRNA和蛋白的表达水平,且可抑制LPS诱导的IL-1β、IL-6、TNF-α和NF-κB的高表达。结论:IFIT1在动脉粥样斑块组织中的表达明显升高;LPS可以上调IFIT1的表达,并诱导人脐静脉内皮细胞IL-1β、IL-6、TNF-α和NF-κB的表达;IFIT1通过上调IL-1β、IL-6、TNF-α和NF-κB的水平调节细胞的炎症反应,进而促进AS的发生发展。因此,针对IFIT1的干预措施可能有助于减轻与AS相关的炎症反应。
都慧[8]（2020）在《基于RNAi分析美国白蛾胰岛素受体及其信号通路基因功能》文中认为美国白蛾（Hyphantria cunea）是近年来危害严重的一种检疫性农林害虫,目前美国白蛾的防治仍以化学防治为主,但是长期使用杀虫剂导致环境被破坏。随着分子生物学的发展,寻求新的分子作用靶标来开发分子干预或创制新型杀虫剂进行绿色防治成为新的研究领域。胰岛素信号通路与个体的营养代谢、生长、生殖及寿命密切相关。目前美国白蛾胰岛素信号通路的生理功能缺乏广泛与深入的研究。本研究以美国白蛾为对象,利用RNAi技术研究胰岛素信号通路的关键因子对其生长发育的影响,包括:胰岛素受体（Insulin Receptor,InsR）;蛋白激酶 B（Protein Kinase B,AKT/PKB）;叉头状转录因子 O 家族（Forkhead Box-containing Protein,FOXO）;磷脂酞肌-3-激酶（Phosphotidylinositol-3-kinase,PI3K）和雷帕霉素靶蛋白（Mammalian Target Of Rapamycin,mTOR）。具体研究结果如下:1、从美国白蛾基因组中获得了HcInsR、HcAKT、HcFOXO、HcPI3K和HcmTOR基因序列,并利用RT-PCR进行序列验证。生物信息学分析表明5个基因开放阅读框长度分别为 4617、1626、1506、3102 和 7296bp,编码 1538、541、501、1033 和 243 1 个氨基酸;保守结构域分析表明HcInsR、HcAKT和HcPI3K属于蛋白激酶C家族成员;HcmTOR属于PIKK蛋白家族成员;HcFOXO属于FH超级家族。2、HcInsR、HcAKT、HcFOXO、HcPI3K和HcmTOR基因在美国白蛾各个发育阶段表达不同,卵期HcInsR、HcAKT、HcPI3K和Hcm TOR基因表达量均高于其它发育阶段,且幼虫期表达量均较低。组织特异性表达结果显示5个胰岛素信号通路基因在幼虫消化系统中表达量较高,尤其是中肠和后肠,与对照相比最高可达对照的85.26倍,推测胰岛素信号通路的关键基因在美国白蛾分泌消化酶及吸收养分的过程中有重要作用。3、注射dsRNA成功沉默美国白蛾HcInsR基因,沉默效率在24h、48h和72h达到64.77%、64.21%和57.82%。注射dsRNA沉默HcInsR基因会干扰幼虫的正常生长发育,24h、48h和72h三个时间点的对照组体重分别是处理组体重的1.19倍、1.17倍和1.16倍;对照组的死亡率是6.67%,注射组死亡率高达53.33%;4龄幼虫变5龄幼虫以及5龄幼虫变为6龄幼虫的开始时间均比对照延迟了 1d。4、注射 siRNA 成功沉默HcInsR、HcAKT、OcHFOX、HcPI3K和HcmTOR基因,5个不同位点的沉默范围为10.60～93.15%;其中HcFOXO基因的沉默效果最好,沉默效率最高可达93.15%。注射siRNA的幼虫出现生长迟缓的情况,注射组幼虫的体重均小于对照组,其中AKT1474在72h体重比对照组低24.27mg;注射组死亡率最高可达42.5%,与对照组的死亡率（2.5%）有显着差异;幼虫5龄时注射了 siRNA导致5龄至化蛹结束的时间延长了 2～4.5d。这些研究结果表明美国白蛾胰岛素信号通路关键基因参与调控了幼虫的生长发育,胰岛素信号通路可以影响细胞对糖分的吸收、脂肪的合成和蛋白质的储存等,当这些生命活动必须的物质被干扰,昆虫的体重、历期及寿命等同样被影响。本文的研究结果丰富了胰岛素信号通路关键基因的功能,这将有助于我们更好地了解美国白蛾的生长发育机制。
韩雄哲[9]（2019）在《猴腿蹄盖蕨提取物体内外抗炎作用研究》文中研究说明蕨类植物在中草药领域应用广泛。一段时期以来,全球各地对新药的开发工作越来越得到众人的重视,对药用蕨类植物更是青睐有加。在众多的蕨类植物中,猴腿蹄盖蕨作为生长在长白山地区的中草药,是能够同时满足药用和食用两方面需求的重要蕨类植物。相关研究显示,该种药用蕨类植物能够起到抗氧化以及抑制细菌增长等作用,然而国内外尚无有关蕨类植物-猴腿蹄盖蕨抗炎作用及其机制的系统研究。本文为探讨猴腿蹄盖蕨乙醇提取物对LPS刺激诱导的小鼠肺损伤的抗炎功效和对LPS刺激的小鼠腹腔巨噬细胞的影响,借助信号转导通路平台,探析其对相关的关键蛋白分子以及炎性因子蛋白表达的作用,研究猴腿蹄盖蕨乙醇提取物对小鼠体内外抗炎作用,对猴腿蹄盖蕨的抗炎免疫功效给出科学合理的解释,为猴腿蹄盖蕨的开发与利用提供可靠的理论参考。本文采用MTT方法,深入分析猴腿蹄盖蕨乙醇提取物对小鼠腹腔巨噬细胞的毒害影响;借助ELISA方法,探讨猴腿蹄盖蕨乙醇提取物对LPS引发的TNF-α以及IL-6分泌情况的作用;结合Western blot方法,研究炎症信号通路中相关的关键蛋白分子的影响。通过仔细的研究发现:当猴腿蹄盖蕨乙醇提取物的浓度处于0-200.0μg/mL的水平时,其不会毒害到小鼠腹腔的巨噬细胞;同时明显阻碍了TNF-α和IL-6的分泌;此外,猴腿蹄盖蕨乙醇提取物能够以有效调节炎症信号通路的方式起到抗炎的功效。另外,还探讨了猴腿蹄盖蕨乙醇提取物对LPS刺激诱导的炎症通路的影响以及对小鼠急性肺损伤模型的保护功能。在实验过程中,笔者设置了空白对照、LPS诱导、猴腿蹄盖蕨（5.0 mg/kg体重、10.0 mg/kg体重）+LPS以及地塞米松（7.8 mg/kg体重）+LPS等多组实验。将猴腿蹄盖蕨乙醇提取物通过小鼠胃部注入小鼠体内,并连续注药8天,在LPS开始诱导的两个小时前将地塞米松通过小鼠腹腔注入小鼠体内。之后再拿出小鼠肺脏,形成肺泡灌洗液,并对该灌洗液中的炎性细胞的具体数量进行监测;采取Griess方法,检测炎症介质NO的水平;结合ELISA方法,检测TNF-α、IL-1β以及IL-6的水平,做好病理切片以研究其中的组织病变情况。分析得到,猴腿蹄盖蕨乙醇提取物能够大幅度减少小鼠肺泡灌洗液内炎性细胞的含量,抑制NO、TNF-α、IL-1β以及IL-6等的产生。结果提示,猴腿蹄盖蕨乙醇提取物对LPS诱导下的小鼠急性肺损伤模型起到了显着的抗炎功效。实验进一步观察了部分猴腿蹄盖蕨萃取物对小鼠腹腔巨噬细胞抗氧化能力的实验。在作者所萃取的三种物质中,石油醚层与二氯甲烷层清除DPPH、ABTS效果最好,石油醚层在0.2 mg/mL清除DPPH效果达到了 87.33%,在0.2 mg/mL时,清除ABTS效果达到98.73%,乙酸乙酯层铁离子螯合能力最佳,乙酸乙酯在10 mg/mL时,螯合能力达到75%。通过研究得出如下结论:1.猴腿蹄盖蕨提取物可能通过MyD88和TRIF双通路以及抑制炎症因子的产生,抵抗LPS对小鼠的致炎作用;2.猴腿蹄盖蕨乙酸乙酯萃取层的抗一氧化氮能力最佳,石油醚与二氯甲烷萃取层清除DPPH、ABTS效果最好,乙酸乙酯萃取层铁离子螯合能力最佳。
张冉冉[10]（2019）在《基于TLR4/TRIF信号通路探讨逍遥散治疗NASH肝郁脾虚证的机制》文中进行了进一步梳理目的研究逍遥散对非酒精性脂肪性肝炎（nonalcoholic steatohepatitis,NASH）肝郁脾虚证大鼠以及巨噬细胞炎症模型Toll样受体4（toll like receptor 4,TLR4）/β干扰素TIR结构域衔接蛋白（TIR domain containing adaptor protein inducing interferon-β,TRIF）通路的影响,探讨NASH肝郁脾虚证的发病机制和逍遥散的抗炎机制。方法第一部分逍遥散对NASH肝郁脾虚证大鼠TLR4/TRIF信号通路的影响将40只雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠,随机分为空白对照组（Control组,n=10）和病证结合模型组（n=30）,采用高脂高糖饲料喂养配合“慢性束缚+饥饱失常”法复制NASH肝郁脾虚证模型14周。将病证结合模型大鼠分为模型组（Model组,n=10）、逍遥散治疗组（XYS组,n=10）、甘氨酸治疗组（Glycine组,n=10）,其中XYS组和Glycine组大鼠分别以逍遥散和甘氨酸干预4周。观察大鼠体重及行为学变化;检测血清甘油三酯（triglyceride,TG）、总胆固醇（total cholesterol,TC）、丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase,ALT）含量;检测血浆内毒素（endotoxin,ET）含量;检测下丘脑5-羟色胺（serotonin,5-HT）和去甲肾上腺素（norepinephrine,NE）含量;检测尿D-木糖含量,计算D-木糖排泄率;苏木素-伊红（hematoxylin-eosin,HE）染色观察肝脏病理组织学改变;实时荧光定量聚合酶链反应（real-time quantitative polymerase chain reaction,Real-time PCR）检测肝组织TLR4 mRNA、TRIF mRNA的含量。第二部分逍遥散对巨噬细胞炎症模型的影响及作用机制研究1.选择巨噬细胞炎症模型的最佳条件实验分为5μg/mL脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）作用巨噬细胞0h组、6h组、12h组、24h组,ELISA检测肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-alpha,TNF-α）、白介素-6（interleukin-6,IL-6）、白介素-4（interleukin-4,IL-4）、白介素-10（interleukin-10,IL-10）的含量。2.CCK-8检测不同浓度逍遥散对巨噬细胞炎症模型增殖的影响实验分为5%逍遥散含药血清培养液组（5%XYS组）、10%逍遥散含药血清培养液组（10%XYS组）、20%逍遥散含药血清培养液组（20%XYS组）。制备含药血清,用CCK-8检测不同浓度含药血清培养液作用巨噬细胞炎症模型0h、6h、12h、24h后,对细胞增殖的影响。3.逍遥散对巨噬细胞炎症模型的影响实验分为正常组（Control组）、模型组（Model组）、逍遥散组（XYS组）。将逍遥散和5μg/mL LPS共同作用于巨噬细胞6h,ELISA检测细胞外炎性因子TNF-α、IL-6、IL-4、IL-10的含量;免疫蛋白印迹法（western blot）和免疫细胞化学法检测细胞TLR4、TRIF蛋白的表达。结果第一部分逍遥散对NASH肝郁脾虚证大鼠TLR4/TRIF信号通路的影响1.与Control组相比,Model组大鼠尿D-木糖排泄率、海马组织5-HT和NE含量显着降低（p<0.01）;血清TG、TC及ALT含量显着升高（p<0.01）;血浆ET含量显着升高（p<0.01）;HE染色结果显示,肝细胞以大泡性脂肪变性为主,可见气球样变,肝小叶结构破坏,可见散在点状坏死和炎细胞浸润,NAS积分显着增高（p<0.01）;Real-time PCR结果显示肝组织TLR4 mRNA、TRIF mRNA含量显着增加（p<0.01）。2.与Model组相比,XYS组和Glycine组大鼠尿D-木糖排泄率、海马组织5-HT和NE含量显着增加（p<0.01）;血清TG、TC及ALT含量显着降低（p<0.01）;血浆ET含量显着降低（p<0.01）;HE染色结果显示,肝细胞脂肪变性程度明显减轻,仅见少许小泡性脂肪变性,炎细胞浸润减轻,NAS积分显着降低（p<0.01）;Real-time PCR结果显示肝组织TLR4 mRNA、TRIF mRNA含量显着减少（p<0.01）。3.与Glycine组相比,XYS组肝组织TLR4 mRNA、TRIF mRNA含量明显降低（p<0.05、p<0.01）;HE染色可见小泡性脂肪变性减少;而尿D-木糖排泄率、海马组织5-HT及NE含量、血浆ET含量和肝组织NAS评分差异无统计学意义（p>0.05）。第二部分逍遥散对巨噬细胞炎症模型的影响及作用机制研究1.选择细胞炎症模型的最佳条件与LPS作用巨噬细胞0h组相比,6h组、12h组、24h组细胞外TNF-α、IL-6含量显着增加（p<0.01）;与6h组相比,12h组、24h组TNF-α、IL-6含量显着增加（p<0.01）;12h组与24h组TNF-α、IL-6含量差异无统计学意义（p>0.05）。与LPS作用巨噬细胞0h组相比,6h组、12h组、24h组细胞外IL-4含量明显增加（p<0.05、p<0.01、p<0.01）;6h组、12h组、24h组细胞外IL-10含量明显增加（p<0.01、p<0.05、p<0.05）;其余各组间差异无统计学意义（p>0.05）。2.CCK-8检测不同浓度逍遥散对巨噬细胞炎症模型增殖的影响含药血清作用6h时,与5%XYS组相比,10%XYS组、20%XYS组细胞存活率显着增加（p<0.01）;10%XYS组和20%XYS组差异无统计学意义（p>0.05）。含药血清作用12h时,各组情况与6h时相似。药物作用0h与24h时,各组间差异无统计学意义（p>0.05）。相同浓度的含药血清作用不同时间对细胞增殖的影响:5%XYS作用时,各时间点无差异（p>0.05）。10%XYS作用时,与6h组相比,0h组、24h组细胞存活率明显降低（p<0.05）;其余各组间比较无统计学意义（p>0.05）。20%XYS作用时,与6h组相比,0h组、24h组细胞存活率显着降低（p<0.01）;与12h组相比,24h组细胞存活率明显降低（p<0.05）。3.逍遥散对巨噬细胞炎症模型的影响与Control组相比,Model组细胞外TNF-α、IL-6含量显着增加（p<0.01）;IL-4、IL-10含量明显增加（p<0.05）;western blot结果显示细胞TLR4和TRIF蛋白的表达显着增加（p<0.01）;免疫细胞化学染色结果显示TLR4和TRIF的表达增高。与Model组相比,XYS组细胞外TNF-α、IL-6含量显着降低（p<0.01）;IL-4、IL-10含量明显增加（p<0.05、p<0.01）;western blot结果显示细胞TLR4和TRIF蛋白的表达显着降低（p<0.01）;免疫细胞化学染色结果显示TLR4和TRIF的表达降低。结论1.NASH肝郁脾虚证的发病机制可能与TLR4/TRIF信号通路有关。2.逍遥散改善NASH肝郁脾虚证大鼠内毒素血症及肝脏炎性反应的机制可能与降低TLR4 mRNA、TRIF mRNA的含量有关。3.逍遥散对巨噬细胞炎症模型的抗炎作用机制可能与降低TLR4、TRIF蛋白的表达有关。
二、LPS受体及其信号传导通路（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、LPS受体及其信号传导通路（论文提纲范文）
（1）苯并恶唑酮类抗炎化合物W3D对MD2和TLR4蛋白调控作用的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 常用缩写词中英文对照表 |
| 前言 |
| 第一部分 化合物W3D对 TLR4、MD2 蛋白表达调控的作用研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 化合物与细胞来源 |
| 1.1.2 主要仪器和试剂 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 细胞培养的技术和方法 |
| 1.2.2 Western Blot法检测RAW264.7 细胞中TLR4、MD2、p-IRAK4 蛋白的表达 |
| 1.2.3 ELISA法检测RAW264.7 细胞上清液TLR4、MD2 蛋白的表达 |
| 1.2.4 细胞免疫荧光法检测RAW264.7 细胞中NF-κB p65 的核转移 |
| 1.2.5 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 化合物W3D对 LPS诱导的RAW264.7 细胞TLR4、MD2、p-IRAK4 蛋白表达的影响 |
| 2.2 化合物W3D对 LPS诱导的RAW264.7 细胞NF-κB p65 核转移的影响 |
| 2.3 化合物W3D对 LPS诱导的RAW264.7 细胞上清液中TLR4、MD2 蛋白表达的影响 |
| 2.4 4-取代苯并恶唑酮类衍生物对LPS诱导的RAW264.7 细胞MD2 蛋白表达的构效关系分析 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第二部分 MD2抑制剂MD2-IN-1对化合物W3D抗炎活性的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 细胞与化合物来源 |
| 1.1.2 仪器及试剂 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 Griess法检测RAW264.7 细胞上清液中NO的含量 |
| 1.2.2 ELISA法检测细胞上清液中IL-6、TNF-α的释放量 |
| 1.2.3 Western Blot法测定RAW264.7 细胞中TLR4、MD2 蛋白的表达 |
| 1.2.4 免疫荧光法检测RAW264.7 细胞中NF-κB p65 的核转移 |
| 1.2.5 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 化合物W3D对 MD2-IN-1 阻断后LPS诱导的RAW264.7 细胞上清液NO抑制活性的影响 |
| 2.2 化合物W3D对 MD2-IN-1 阻断后LPS诱导的RAW264.7 细胞上清液IL-6、TNF-α抑制活性的影响 |
| 2.3 化合物W3D对 MD2-IN-1 阻断后对 LPS诱导的RAW264.7 细胞中MD2、TLR4 蛋白表达的影响 |
| 2.4 化合物W3D对 MD2-IN-1 阻断后对 LPS诱导的RAW264.细胞中NF-κB p65核转移的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第三部分 化合物W3D与 MD2、TLR4 蛋白的相互作用研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 细胞与化合物来源 |
| 1.1.2 仪器及试剂 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 流式细胞术检测FITC-LPS结合细胞膜表面受体的强度 |
| 1.2.2 DARTS技术与Western Blot联用检测MD2、TLR4 蛋白的酶解稳定性 |
| 1.2.3 CETSA技术与Western Blot联用检测MD2、TLR4 蛋白的热稳定性.. |
| 1.2.4 荧光光谱实验检测化合物与MD2 蛋白的结合 |
| 1.2.5 BLI生物层干涉技术检测化合物与MD2、TLR4 蛋白平衡解离平衡常数 |
| 1.2.6 分子对接法模拟化合物与MD2、TLR4 蛋白的相互作用 |
| 1.2.7 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 化合物可以抑制FITC-LPS与 RAW264.7 细胞膜上LPS受体的结合 |
| 2.2 化合物W3D可增强MD2、TLR4 蛋白酶稳定性 |
| 2.3 化合物W3D可增强MD2、TLR4 蛋白热稳定性 |
| 2.4 化合物W3D可竞争性抑制bis-ANS与 rh MD2 蛋白结合 |
| 2.5 BLI技术检测化合物W3D与 MD2、TLR4 蛋白解离结合常数 |
| 2.6 化合物与MD2 蛋白分子对接结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第四部分 化合物W3D对LPS诱导的小鼠急性肺损伤的药效学研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 实验动物及来源 |
| 1.1.2 仪器和试剂 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 HE染色行肺组织病理学检查 |
| 1.2.2 肺组织湿干重比 |
| 1.2.3 小鼠肺组织中MPO(髓过氧化物酶)活性检测 |
| 1.2.4 ELISA法测定小鼠血清中TNF-α、IL-6、IL-1β、iNOS的释放量 |
| 1.2.5 Western Blot法检测小鼠肺组织中TLR4、MD-2、p-IRAK4、NF-κB p65蛋白的表达水平 |
| 1.2.6 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 化合物W3D对LPS诱导的小鼠肺组织病理学的影响 |
| 2.2 化合物W3D对小鼠肺组织湿干重比的影响 |
| 2.3 化合物W3D对小鼠肺组织MPO活性的影响 |
| 2.4 化合物W3D对小鼠血清中TNF-α、IL-6、IL-1β、iNOS含量的影响 |
| 2.5 化合物W3D对 TLR4、MD2、p-IRAK4、p65 蛋白表达的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 全文结论 |
| 结果展望 |
| 参考文献 |
| 综述 MD2抑制剂的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（2）基于IRS-1/PI3K/AKT通路探讨枳葛口服液对酒精性肝病大鼠胰岛素抵抗的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 英汉缩略词对照表 |
| 中医药改善抵抗素抵抗相关信号通路的研究进展(综述) |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 |
| 致谢 |
（3）代谢综合征并发症回顾性研究及柴芪汤调控代谢综合征肠道菌群机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 代谢综合征的诊疗进展 |
| 综述二 代谢综合征与肠道菌群关系研究进展 |
| 综述三 中医对代谢综合征的认识 |
| 参考文献 |
| 第二部分 临床研究 |
| 前言 |
| 技术路线图 |
| 资料与方法 |
| 结果 |
| 小结与讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 第三部分 实验研究 |
| 前言 |
| 技术路线图 |
| 资料与方法 |
| 结果 |
| 小结与讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 创新性 |
| 存在问题及对策 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（4）热挤压3D打印构建大米淀粉-儿茶素复合物的消化性能及抗肥胖机理研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 肥胖概述 |
| 1.1.1 肥胖产生的影响因素及危害 |
| 1.1.2 肥胖与能量代谢 |
| 1.1.3 肥胖与胰岛素抵抗 |
| 1.1.4 肥胖与血脂代谢 |
| 1.1.5 肥胖与肠道微生物 |
| 1.1.6 肥胖对其他生理功能的影响 |
| 1.2 肥胖的预防及营养干预 |
| 1.2.1 肥胖的治疗与预防 |
| 1.2.2 碳水化合物及其营养功能 |
| 1.2.3 淀粉的消化性能与营养功能 |
| 1.3 淀粉消化性能调控 |
| 1.3.1 淀粉酶与淀粉消化性能 |
| 1.3.2 淀粉多尺度结构与消化性能 |
| 1.3.3 淀粉多尺度结构修饰对其消化性能的调控 |
| 1.3.4 热挤压3D打印技术调控淀粉的多尺度结构 |
| 1.4 本论文的研究意义、研究目标和研究内容 |
| 1.4.1 研究意义 |
| 1.4.2 研究目标 |
| 1.4.3 研究内容 |
| 第二章 热挤压3D打印协同儿茶素复合调控大米淀粉消化性能的机理研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料与仪器 |
| 2.2.1 主要实验材料 |
| 2.2.2 主要实验仪器及设备 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 热挤压3D打印大米淀粉-儿茶素复合物的制备 |
| 2.3.2 热挤压3D打印大米淀粉-儿茶素复合物消化性能的测定 |
| 2.3.3 热挤压3D打印大米淀粉-儿茶素复合物螺旋结构的测定 |
| 2.3.4 热挤压3D打印大米淀粉-儿茶素复合物表面短程有序结构的测定 |
| 2.3.5 热挤压3D打印大米淀粉-儿茶素复合物结晶结构的测定 |
| 2.3.6 热挤压3D打印大米淀粉-儿茶素复合物表面分形及糊体系亚微观结构的测定 |
| 2.3.7 分子对接技术 |
| 2.3.8 分子动力学模拟 |
| 2.3.9 数据分析 |
| 2.4 结果与讨论 |
| 2.4.1 热挤压3D打印大米淀粉-儿茶素复合物的消化性能 |
| 2.4.2 热挤压3D打印大米淀粉-儿茶素复合物的螺旋结构 |
| 2.4.3 热挤压3D打印大米淀粉-儿茶素复合物的表面分子短程有序化结构 |
| 2.4.4 热挤压3D打印大米淀粉-儿茶素复合物的结晶结构 |
| 2.4.5 热挤压3D打印大米淀粉-儿茶素复合物的分形结构 |
| 2.4.6 热挤压3D打印大米淀粉-儿茶素复合物糊体系的亚微观结构 |
| 2.4.7 大米淀粉-儿茶素复合物消化性能与多尺度结构的相关性分析 |
| 2.4.8 大米淀粉-儿茶素复合物与胰α-淀粉酶分子间相互作用的分子动力学模拟 |
| 2.4.9 热挤压3D打印协同儿茶素复合调控大米淀粉消化性能的分子机制 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三章 大米淀粉-儿茶素复合物对高脂膳食肥胖大鼠脂代谢及肝脏转录组的影响 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料与仪器设备 |
| 3.2.1 主要实验试剂 |
| 3.2.2 主要实验仪器与设备 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 动物实验方案及饮食设计 |
| 3.3.2 样品采集及处理 |
| 3.3.3 组织切片观察 |
| 3.3.4 血清生化指标测定 |
| 3.3.5 血清脂质组学测定 |
| 3.3.6 肝脏组织中基因的表达量测定 |
| 3.3.7 肝脏转录组测序 |
| 3.3.8 数据分析 |
| 3.4 结果与讨论 |
| 3.4.1 大米淀粉-儿茶素复合物对肥胖受试鼠体重的影响 |
| 3.4.2 大米淀粉-儿茶素复合物对受试鼠血糖的影响 |
| 3.4.3 大米淀粉-儿茶素复合物对受试鼠血脂的影响 |
| 3.4.4 大米淀粉-儿茶素复合物对受试鼠肝功能指标的影响 |
| 3.4.5 大米淀粉-儿茶素复合物对受试鼠氧化应激指标的影响 |
| 3.4.6 大米淀粉-儿茶素复合物对受试鼠组织切片的影响 |
| 3.4.7 大米淀粉-儿茶素复合物对受试鼠血清脂质代谢的影响 |
| 3.4.8 大米淀粉-儿茶素复合物对肝脏组织基因相对表达量的影响 |
| 3.4.9 大米淀粉-儿茶素复合物对受试鼠肝脏转录组的影响 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 大米淀粉-儿茶素复合物对高脂膳食肥胖大鼠肠道微生态的影响 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料与仪器设备 |
| 4.2.1 主要实验试剂 |
| 4.2.2 主要实验仪器与设备 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 组织切片观察 |
| 4.3.2 肠道中短链脂肪酸的测定 |
| 4.3.3 胃肠激素水平测定 |
| 4.3.4 肠道中总胆汁酸水平测定 |
| 4.3.5 粪便脂质组学测定 |
| 4.3.6 肠道微生物检测 |
| 4.3.7 数据分析 |
| 4.4 结果与讨论 |
| 4.4.1 大米淀粉-儿茶素复合物干预对受试鼠结肠组织的影响 |
| 4.4.2 大米淀粉-儿茶素复合物干预对受试鼠肠道短链脂肪酸含量的影响 |
| 4.4.3 大米淀粉-儿茶素复合物干预对受试鼠胃肠激素水平的影响 |
| 4.4.4 大米淀粉-儿茶素复合物干预对受试鼠肠道胆汁酸及肠道脂代谢影响 |
| 4.4.5 大米淀粉-儿茶素复合物干预对受试鼠肠道微生物的影响 |
| 4.4.6 大米淀粉-儿茶素复合物干预对受试鼠生理生化指标与肠道菌群相关性的分析 |
| 4.5 本章小结 |
| 第五章 大米淀粉-儿茶素复合物对肥胖小鼠能量代谢及棕色脂肪调节作用的影响 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验材料与仪器设备 |
| 5.2.1 主要实验试剂 |
| 5.2.2 主要实验仪器与设备 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 动物实验方案及饲养 |
| 5.3.2 受试鼠活体脂肪和肌肉含量分析及代谢水平、能量支出监测 |
| 5.3.3 受试鼠低温造模、体温及体表温度测定 |
| 5.3.4 胰岛素耐量试验 |
| 5.3.5 取材及处理方法 |
| 5.3.6 血清中生化指标测定 |
| 5.3.7 脂肪组织形态学观察 |
| 5.3.8 脂肪组织基因表达量测定 |
| 5.3.9 免疫印迹试验 |
| 5.3.10 数据分析 |
| 5.4 结果与讨论 |
| 5.4.1 大米淀粉-儿茶素复合物干预对受试鼠体重及体脂比的影响 |
| 5.4.2 大米淀粉-儿茶素复合物干预对受试鼠胰岛素耐受性的影响 |
| 5.4.3 大米淀粉-儿茶素复合物干预对受试鼠血脂和血浆游离脂肪酸的影响 |
| 5.4.4 室温环境下大米淀粉-儿茶素复合物干预对受试鼠能量代谢的影响 |
| 5.4.5 大米淀粉-儿茶素复合物干预对受试鼠体温的影响 |
| 5.4.6 大米淀粉-儿茶素复合物干预对受试鼠脂肪组织形态学的影响 |
| 5.4.7 大米淀粉-儿茶素复合物干预对受试鼠i BAT和 ing WAT中产热相关基因及蛋白表达的影响 |
| 5.4.8 室温环境下大米淀粉-儿茶素复合物干预对受试鼠iBAT中脂代谢相关基因及蛋白表达的影响 |
| 5.5 本章小结 |
| 结论与展望 |
| 一、结论 |
| 二、创新点 |
| 三、展望 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 附件 |
（5）“固元颗粒”免疫增强剂研制及其在鸡疫苗免疫中的应用（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第一章 中药免疫增强剂的研究进展 |
| 1.1 免疫增强剂的分类 |
| 1.2 中药免疫增强剂概述 |
| 1.3 中药免疫增强剂的有效成分 |
| 1.4 中药免疫增强剂的作用机理 |
| 1.5 人参、黄芪免疫增强作用研究进展 |
| 1.6 中药免疫增强剂在养禽业中的应用 |
| 第二章 中药对TOLL样受体和信号传导的研究进展 |
| 2.1 先天性免疫 |
| 2.2 ToLL样受体 |
| 2.3 中药对TLRs信号传导途径的研究 |
| 2.4 中药对信号转导的影响 |
| 第二篇 试验研究 |
| 第一章 “固元颗粒”制剂工艺研究 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 结果 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 小结 |
| 第二章 “固元颗粒”质量标准研究 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 “固元颗粒”的安全性和有效性研究 |
| 3.1 材料 |
| 3.2 试验方法 |
| 3.3 试验结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 “固元颗粒”对蛋鸡TLR4 信号通路及胞内分子的调节 |
| 4.1 材料 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.3 结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第五章 “固元颗粒”在蛋鸡疫苗免疫中的应用 |
| 5.1 材料 |
| 5.2 方法 |
| 5.3 结果 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 导师简介 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（6）HMGB1/TLR2对奶牛卵巢颗粒细胞排卵相关基因的影响及姜黄素对其干预作用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 科学问题 |
| 1.2 选题背景和意义 |
| 1.3 TLRs及其在卵巢活动中的作用 |
| 1.3.1 Toll样受体家族概况 |
| 1.3.2 家畜的TLRs及其在卵巢中的表达 |
| 1.3.3 TLRs在卵巢活动中的作用 |
| 1.4 HMGB1及其对卵巢功能的影响 |
| 1.4.1 HMGB1的损伤相关分子模式作用 |
| 1.4.2 HMGB1的生物学功能 |
| 1.4.3 HMGB1释放的机制 |
| 1.4.4 HMGB1受体和炎症反应 |
| 1.4.5 卵巢中的HMGB1 |
| 1.5 姜黄素针对TLRs的抗炎作用及其对生殖的影响 |
| 1.5.1 姜黄素的安全性评价及其药理作用 |
| 1.5.2 姜黄素的作用靶点 |
| 1.5.3 姜黄素抑制TLRs的分子机制 |
| 1.5.4 姜黄素对生殖系统的影响 |
| 第二章 奶牛不同发育阶段卵泡颗粒细胞中TLRs/HMGB1 表达差异分析 |
| 2.1 材料与仪器设备 |
| 2.1.1 主要试剂及耗材 |
| 2.1.2 仪器与设备 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 奶牛卵巢颗粒细胞的分离与培养 |
| 2.2.2 免疫细胞化学 |
| 2.2.3 奶牛卵巢颗粒细胞总RNA的提取及c DNA的合成 |
| 2.2.4 q RT-PCR |
| 2.2.5 蛋白免疫印迹 |
| 2.2.6 免疫共沉淀 |
| 2.2.7 免疫组织化学 |
| 2.2.8 数据统计与分析 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 奶牛卵巢颗粒细胞形态及鉴定 |
| 2.3.2 奶牛卵巢颗粒细胞TLRs基因转录水平差异 |
| 2.3.3 奶牛卵巢颗粒细胞TLRs及 HMGB1 蛋白水平表达差异 |
| 2.3.4 奶牛卵巢颗粒细胞TLRs与 HMGB1 交叉对话 |
| 2.3.5 奶牛卵巢颗粒细胞层中TLRs及 HMGB1 的表达 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 FSH对颗粒细胞HMGB1/TLRs表达的调控作用 |
| 3.1 材料与仪器设备 |
| 3.1.1 主要试剂及耗材 |
| 3.1.2 设备与仪器 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 奶牛卵巢颗粒细胞的分离与培养 |
| 3.2.2 MTT实验 |
| 3.2.3 细胞凋亡检测 |
| 3.2.4 FSH处理卵巢颗粒细胞 |
| 3.2.5 奶牛卵巢颗粒细胞总RNA的提取及c DNA的合成 |
| 3.2.6 q RT-PCR |
| 3.2.7 蛋白免疫印迹 |
| 3.2.8 数据统计与分析 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 FSH对奶牛卵巢颗粒细胞活性的影响 |
| 3.3.2 FSH对奶牛卵巢颗粒细胞凋亡的影响 |
| 3.3.3 FSH对卵泡颗粒细胞中HMGB1/TLRs m RNA水平的调控作用 |
| 3.3.4 FSH对卵泡颗粒细胞中HMGB1/TLRs蛋白水平的调控作用 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 HMGB1 对卵泡颗粒细胞TLR2 信号通路与排卵相关基因的影响 |
| 4.1 材料与仪器设备 |
| 4.1.1 主要试剂及耗材 |
| 4.1.2 仪器与设备 |
| 4.2 方法 |
| 4.2.1 奶牛卵巢颗粒细胞的分离与培养 |
| 4.2.2 MTT实验 |
| 4.2.3 siRNA合成与细胞转染 |
| 4.2.4 细胞处理 |
| 4.2.5 奶牛卵巢颗粒细胞总RNA的提取及cDNA的合成 |
| 4.2.6 qRT-PCR |
| 4.2.7 蛋白免疫印迹 |
| 4.2.8 间接免疫荧光 |
| 4.2.9 免疫共沉淀 |
| 4.2.10 酶联免疫吸附试验 |
| 4.2.11 数据统计 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 HMGB1对颗粒细胞活性的影响 |
| 4.3.2 TLR2基因沉默 |
| 4.3.3 HMGB1对TLR2 及排卵相关基因mRNA水平的影响 |
| 4.3.4 HMGB1对TLR2/NF-κB的影响 |
| 4.3.5 HMGB1对NF-κB核易位的影响 |
| 4.3.6 浓度对HMGB1 结合TLR2、TLR1、TLR6及p-NF-κB p65 蛋白的影响 |
| 4.3.7 HMGB1对IL-6与TNF-α表达水平的影响 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第五章 姜黄素干预卵泡颗粒细胞HMGB1/TLR2 信号通路对排卵相关基因的影响 |
| 5.1 材料与仪器设备 |
| 5.1.1 主要试剂及耗材 |
| 5.1.2 仪器与设备 |
| 5.2 方法 |
| 5.2.1 奶牛卵巢颗粒细胞的分离与培养 |
| 5.2.2 MTT实验 |
| 5.2.3 细胞凋亡检测 |
| 5.2.4 细胞处理 |
| 5.2.5 奶牛卵巢颗粒细胞总RNA的提取及c DNA的合成 |
| 5.2.6 q RT-PCR |
| 5.2.7 蛋白免疫印迹 |
| 5.2.8 间接免疫荧光 |
| 5.2.9 免疫共沉淀 |
| 5.2.10 ELISA |
| 5.2.11 数据统计 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 姜黄素对颗粒细胞活性的影响 |
| 5.3.2 姜黄素对颗粒细胞凋亡及坏死的影响 |
| 5.3.3 姜黄素对HMGB1 诱导的TLR2 及排卵相关基因转录水平的影响 |
| 5.3.4 姜黄素对HMGB1 诱导的TLR2/NF-κB蛋白水平的影响 |
| 5.3.5 姜黄素对HMGB1 诱导的NF-κB核易位的影响 |
| 5.3.6 姜黄素对HMGB1与TLR1、TLR2、TLR6、p-NF-κB p65 结合水平的影响 |
| 5.3.7 姜黄素对HMGB1 诱导的IL-6及TNF-α表达水平的影响 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 小结 |
| 第六章 结论 |
| 6.1 全文结论 |
| 6.2 创新点 |
| 6.3 进一步研究的问题 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（7）脂多糖通过诱导IFIT1表达促进人脐静脉内皮细胞炎症反应（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 实验结果 |
| 1. LPS处理人脐静脉内皮细胞后,IFIT1的表达上调 |
| 2. pcDNA-IFIT1上调LPS诱导的NF-κB和炎症因子的表达 |
| 3. siRNA-IFIT1下调LPS诱导的NF-κB和炎症因子的表达 |
| 讨论 |
| 1. 炎症在动脉粥样硬化病理形成中发挥重要作用 |
| 2. IFIT1介导LPS诱导的人脐静脉内皮细胞炎症反应 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 缩写词简表 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间成果 |
| 致谢 |
（8）基于RNAi分析美国白蛾胰岛素受体及其信号通路基因功能（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 绪论 |
| 1.1 胰岛素信号通路及相关基因的研究进展 |
| 1.1.1 胰岛素受体(InsR) |
| 1.1.2 三磷酸肌醇激酶(PI3K) |
| 1.1.3 丝氨酸/苏氨酸激酶(AKT) |
| 1.1.4 叉状头转录因子(FOXO) |
| 1.1.5 哺乳动物雷帕霉素靶标(mTOR) |
| 1.2 RNAi技术在昆虫中的研究进展 |
| 1.3 美国白蛾生物学特性及防治研究进展 |
| 1.4 本文研究目的及意义 |
| 2 美国白蛾胰岛素受体及其信号通路基因特性分析 |
| 2.1 实验材料与方法 |
| 2.1.1 供试昆虫 |
| 2.1.2 主要仪器设备 |
| 2.2 基因生物信息学分析 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 HcInsR基因特性分析 |
| 2.3.2 HcAKT基因特性分析 |
| 2.3.3 HcFOXO基因特性分析 |
| 2.3.4 HcPI3K基因特性分析 |
| 2.3.5 HcmTOR基因特性分析 |
| 2.4 本章小结与讨论 |
| 3 美国白蛾胰岛素受体及信号通路相关基因发育和组织表达特异性 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 供试昆虫 |
| 3.1.2 实验仪器 |
| 3.1.3 主要试剂(盒) |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 试虫处理 |
| 3.2.2 总RNA的提取 |
| 3.2.3 cDNA第一链合成 |
| 3.2.4 实时荧光定量RT-PCR分析 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 RNA提取和消化 |
| 3.3.2 HcInsR基因发育阶段和组织表达特异性 |
| 3.3.3 HcAKT基因发育阶段和组织表达特异性 |
| 3.3.4 HcFOXO基因发育阶段和组织表达特异性 |
| 3.3.5 HcPI3K基因发育阶段和组织表达特异性 |
| 3.3.6 HcmTOR基因发育阶段和组织表达特异性 |
| 3.4 本章小结与讨论 |
| 4 RNAi介导美国白蛾胰岛素信号通路基因功能分析 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 供试昆虫 |
| 4.1.2 实验仪器 |
| 4.1.3 主要试剂(盒) |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 dsRNA合成与显微注射 |
| 4.2.2 dsRNA沉默效率检测 |
| 4.2.3 siRNA合成与显微注射 |
| 4.2.4 siRNA沉默效率检测 |
| 4.2.5 基因沉默对生长发育影响 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 dsRNA质量检测 |
| 4.3.2 HcInsR基因沉默效率 |
| 4.3.3 美国白蛾dsInsR沉默对体重和死亡率的影响 |
| 4.3.4 美国白蛾dsInsR基因沉默对历期影响 |
| 4.3.5 siRNA基因沉默效率检测 |
| 4.3.6 siRNA基因沉默对美国白蛾体重的影响 |
| 4.3.7 基因沉默对死亡率的影响 |
| 4.3.8 siRNA基因沉默对历期的影响 |
| 4.4 本章小结与讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（9）猴腿蹄盖蕨提取物体内外抗炎作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 名词中英文对照和缩略语 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 蹄盖蕨研究 |
| 1.1.1 蹄盖蕨化学成分研究 |
| 1.1.2 蹄盖蕨药理活性研究 |
| 1.2 炎症研究 |
| 1.2.1 脂多糖诱导炎症反应 |
| 1.2.2 中药抗炎免疫调控 |
| 1.2.3 急性肺损伤研究进展 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 实验用主要试剂及药物的配制 |
| 2.1.3 实验主要设备仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 猴腿蹄盖蕨活性成分的提取 |
| 2.2.2 小鼠腹腔巨噬细胞的诱导 |
| 2.2.3 药物处理及实验分组 |
| 2.2.4 细胞毒性实验 |
| 2.2.5 一氧化氮检测 |
| 2.2.6 酶联免疫吸附(ELISA)实验 |
| 2.2.7 蛋白质免疫印迹(WESTERN BLOT)实验 |
| 2.2.8 急性肺损伤动物模型建立及相关因子检测 |
| 2.2.9 AM的指纹图谱及总黄酮含量检测 |
| 2.2.10 体外抗氧试验 |
| 2.2.10.1 清除DPPH试验 |
| 2.2.10.2 铁离子螯合能力 |
| 2.2.10.3 清除ABTS试验 |
| 2.2.11 数据处理 |
| 第三章 结果 |
| 3.1 AM提取物的细胞毒性 |
| 3.2 AM提取物对炎症介质表达的影响 |
| 3.2.1 AM提取物对LPS刺激诱导NO表达的影响 |
| 3.2.2 AM提取物对LPS刺激诱导iNOS、COX-2蛋白表达的影响 |
| 3.2.3 AM提取物对LPS刺激后TNF-α表达的影响 |
| 3.2.4 AM提取物对LPS诱导IL-6表达的影响 |
| 3.2.5 AM提取物对LPS诱导IL-1β表达的影响 |
| 3.3 AM提取物对LPS刺激PM细胞诱导MAPKs信号转导通路关键蛋白表达的影响 |
| 3.4 AM提取物对LPS刺激PM细胞诱导NF-κB蛋白表达的影响 |
| 3.5 AM提取物对LPS刺激PM细胞诱导JAK/STAT信号转导通路关键蛋白表达的影响 |
| 3.6 AM对急性肺损伤小鼠的影响 |
| 3.7 AM提取物的指纹图谱及总黄酮量 |
| 3.8 不同溶剂对AM的萃取率 |
| 3.9 AM萃取物细胞毒性试验 |
| 3.10 AM萃取层对NO释放量影响对比试验 |
| 3.11 AM体外抗氧化试验 |
| 第四章 讨论 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
（10）基于TLR4/TRIF信号通路探讨逍遥散治疗NASH肝郁脾虚证的机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 主要缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 逍遥散对NASH肝郁脾虚证大鼠TLR4/TRIF信号通路的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第二部分 逍遥散对巨噬细胞炎症模型的影响及作用机制研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 附录A 综述 |
| 参考文献 |
| 附录B 脂肪肝肝郁脾虚证中医证候积分评价量表 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
四、LPS受体及其信号传导通路（论文参考文献）
- [1]苯并恶唑酮类抗炎化合物W3D对MD2和TLR4蛋白调控作用的研究[D]. 高晓慧. 山西医科大学, 2021
- [2]基于IRS-1/PI3K/AKT通路探讨枳葛口服液对酒精性肝病大鼠胰岛素抵抗的影响[D]. 叶永慧. 西南医科大学, 2021(01)
- [3]代谢综合征并发症回顾性研究及柴芪汤调控代谢综合征肠道菌群机制研究[D]. 彭龙. 北京中医药大学, 2021(01)
- [4]热挤压3D打印构建大米淀粉-儿茶素复合物的消化性能及抗肥胖机理研究[D]. 郑波. 华南理工大学, 2020
- [5]“固元颗粒”免疫增强剂研制及其在鸡疫苗免疫中的应用[D]. 王申锋. 吉林大学, 2020(08)
- [6]HMGB1/TLR2对奶牛卵巢颗粒细胞排卵相关基因的影响及姜黄素对其干预作用[D]. 解颖颖. 中国农业科学院, 2020
- [7]脂多糖通过诱导IFIT1表达促进人脐静脉内皮细胞炎症反应[D]. 王佳丽. 南方医科大学, 2020
- [8]基于RNAi分析美国白蛾胰岛素受体及其信号通路基因功能[D]. 都慧. 东北林业大学, 2020(02)
- [9]猴腿蹄盖蕨提取物体内外抗炎作用研究[D]. 韩雄哲. 延边大学, 2019(03)
- [10]基于TLR4/TRIF信号通路探讨逍遥散治疗NASH肝郁脾虚证的机制[D]. 张冉冉. 山西中医药大学, 2019(01)