戈壁异常球菌角蛋白酶基因的克隆及功能研究

论文摘要

旨为深入发掘角蛋白酶重要的基因资源,进一步提高其水解酶活,为工业生产提供理论基础。从分离于新疆戈壁沙漠的戈壁异常球菌（Deinococcus gobiensis）I-0中克隆出一个编码角蛋白酶的基因并命名Dgker。构建原核表达载体pET-22b-Dgker并进行体外诱导表达纯化,通过对羽毛水解活性的测定探究粗酶液的最适温度和pH。结果显示,Dgker蛋白N端前50个氨基酸对蛋白的表达纯化有很大影响。Dgker的重组菌株3d完全分解羽毛,在奶粉平板上重组菌株粗酶液比空载菌株粗酶液降解圈更显著。Dgker适应的温度和pH较为广泛其中最适温度是60℃、最适pH是5.0。Dgker能降解羽毛在以后的工业生产及处理废弃羽毛有极大的应用空间。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 菌株及培养基
•     1.1.2主要试剂
•   1.2 方法
•     1.2.1 Dgker蛋白生物信息学分析
•     1.2.2 Dgker重组E.Coli菌株的构建
•     1.2.3 重组E.coli菌株诱导表达
•     1.2.4 重组E.coli菌株功能试验
•     1.2.5 羽毛粉为底物酶活力的测定
•     1.2.6 角蛋白酶最适温度和最适pH的测定
• 2 结果
•   2.1 Dgker蛋白生物信息学分析
•   2.2 构建pET-22b-Dgker表达载体
•   2.3 Dgker降解羽毛实验
•   2.4 Dgker酶活最适温度和pH实验
• 3 讨论
• 4 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 耿秀秀,周正富,刘盈盈,平淑珍,王劲

关键词: 角蛋白,戈壁异常球菌,角蛋白酶,酶活

来源: 生物技术通报 2019年03期

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学

单位: 西南科技大学生命科学与工程学院,中国农业科学院生物技术研究所

基金: 国家自然科学基金项目(31500063),国家重点基础研究发展计划(“973”计划)(2013CB733903),西南科技大学博士基金(18zx7127)

分类号: Q93;Q78

DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2018-0976

页码: 65-70

总页数: 6

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