WK蛋白在转基因抗旱小麦和大肠杆菌中的等同性验证

论文摘要

目的作为转基因抗旱小麦安全性风险评价的重要前提,对转基因抗旱小麦中表达的蛋白和大肠杆菌外源表达蛋白进行等同性验证。方法本研究首先在大肠杆菌中表达了His-WK融合蛋白,然后提取了对照小麦种子和转基因抗旱小麦种子的总蛋白,最后通过SDS-PAGE凝胶电泳、蛋白免疫印迹、糖基化修饰检测和液相色谱-串联质谱（LC-MS-MS）技术分析WK蛋白在转基因抗旱小麦和大肠杆菌中的等同性。结果本研究在大肠杆菌中表达了His-WK融合蛋白,并成功进行了纯化;大肠杆菌中表达的His-WK融合蛋白和转基因抗旱小麦的WK蛋白的表观分子量和免疫原性具有一致性;大肠杆菌中表达的His-WK融合蛋白和转基因抗旱小麦的WK蛋白都没有翻译后糖基化修饰;大肠杆菌中表达的His-WK融合蛋白和转基因抗旱小麦的WK蛋白的一级结构具有一致性。结论本研究验证了WK蛋白在转基因抗旱小麦和大肠杆菌中的等同性,为后续转基因抗旱小麦在营养学、毒理学、致敏性、免疫性等安全性评价研究中提供了可靠的参考依据。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 主要仪器与试剂
•   1.2 重组质粒pET28a-WK的诱导表达
•   1.3 重组蛋白His-WK的纯化
•   1.4 小麦种子总蛋白的提取
•   1.5 蛋白表观分子量分析
•   1.6 蛋白免疫印迹分析
•   1.7蛋白翻译后糖基化修饰分析
•   1.8 液相色谱-串联质谱（LC-MS-MS）分析
• 2 结果
•   2.1 重组蛋白His-WK的表达与纯化
•   2.2 重组蛋白His-WK的表观分子量和免疫原性测定
•   2.3 蛋白翻译后糖基化修饰分析
•   2.4 一级结构分析
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 吴超,李树飞,赵淼,周庆红,姜淑卿,钱智勇

关键词: 转基因抗旱小麦,蛋白,原核表达,蛋白等同性验证,安全性评价

来源: 环境与健康杂志 2019年09期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学

单位: 天津市疾病预防控制中心毒理室

基金: 国家科技重大专项(2016ZX08011005)

分类号: Q943.2

DOI: 10.16241/j.cnki.1001-5914.2019.09.008

页码: 786-789

总页数: 4

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