导读:本文包含了心脏保存论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:心脏,氧化碳,心肌,供体,损伤,器官,低温。
心脏保存论文文献综述
张梦然[1]（2019）在《心脏低温保存关键机理找到》一文中研究指出科技日报北京10月8日电（记者张梦然）据英国《自然·代谢》杂志最新发表的一项研究，英国科学家团队发现，通过快速冷却动物和人类供体心脏，可以减少一种会损害移植后组织的化学物质。这一发现未来有望改进全球有限的捐献器官的保存。全球正在面临可供移植器官缺(本文来源于《科技日报》期刊2019-10-09）
王硕[2]（2019）在《3-硝基-N-甲基水杨酰胺对大鼠离体心脏保存的效应》一文中研究指出目的:离体心脏的保存时间和保存后心损伤程度是成功的心脏移植的一个关键问题,目前已开发出多种离体心脏保护液,以提高待移植心脏的质量,但均有各种缺点。本研究拟以新合成的线粒体复合体Ⅲ的半抑制剂3-NNMS为基础,配制出一种新型的心脏保护液,或者在已有的商品化心脏保护液中加入3-NNMS,以在保护期减缓线粒体的电子流速,有效降低线粒体ROS的产生量,从而避免细胞造成过大的氧化应激,降低线粒体损伤,保护细胞结构的稳定,防止代谢紊乱。通过对新型心脏保护液的研究,可以延长离体心脏保存时间,减轻被保存心脏的损伤程度,为今后的研究和临床应用提供理论和实验基础。方法:将49只成年雄性Wistar大鼠随机分为7组:1)对照组:不保存;2)Base组:不加3-NNMS的新型保护液;3)3-NNMS组:含有3-NNMS的新型保护液;4)HTK组:HTK solution;5)Cel组:Celsior solution;6)HN组:HTK solution+3-NNMS;7)LN组:Celsior solution+3-NNMS。每组均采用7只实验动物。构建心脏离体再灌注模型,具体方法是:大鼠麻醉取心后,将心脏固定于Langendorff灌流装置上,常温(37℃)灌注15分钟,心跳稳定后,分别以六种不同的保护液进行心脏停博,并将心脏置于不同保护液中4℃静置保存8小时;之后取出心脏重新固定于Langendorff灌流装置上,再灌注60分钟,再灌注期间采用ADINSTRUMENTS小动物压力容积测定系统实时监测心脏血流动力学变化,灌注结束后提取心肌线粒体进行线粒体力能学指标检测,评价线粒体功能;通过分析血流动力学、心肌损伤标志物(c Tn-T、CK-MB、LDH)、HE染色、MPO免疫组化、MDA等指标,评价心脏功能及心脏损伤程度;通过细胞毒性实验、细胞呼吸抑制实验验证3-NNMS的细胞毒性。结果:在心脏长时间低温静置保存过程中,3-NNMS新型心脏保护液相比HTK和Celsior保护液显着提高了心肌线粒体膜电位水平(7.62±2.99 vs 2.99±1.52,7.62±2.99 vs 3.58±1.86,p<0.05),且将3-NNMS加入到Celsior中可提高ATPase活力;在心脏收缩功能上3-NNMS新型保护液具备与HTK和Celsior同等效力的保存效果;3-NNMS组和HN组灌流液上清中心肌酶水平显着下降,将3-NNMS加入Celsior中可显着提高心肌组织水平c Tn-T和CK-MB浓度,表明3-NNMS可有效减轻心肌损伤;将3-NNMS加入HTK中,HN组心肌组织ROS水平显着下降。细胞毒性实验和细胞呼吸测定结果证实,在不同浓度条件下3-NNMS均未影响细胞活性,不会导致细胞明显死亡,且将3-NNMS浓度提高到100μg/ml时,其对H9C2细胞呼吸抑制效率达到50%。结论:3-NNMS可有效提高线粒体膜电位水平,维持线粒体正常功能,并可降低较长时间下离体保存的大鼠心肌损伤发生及氧化水平。将3-NNMS应用于HTK保护液和Celsior保护液中,均可以在不同水平提高心肌保护效果;细胞实验证明,在各种浓度水平3-NNMS对H9C2细胞均无细胞毒性作用。因此,3-NNMS可能作为一种安全有效的线粒体抑制剂应用于临床心脏保护中,并有望有效延长心脏离体保存时间。(本文来源于《天津体育学院》期刊2019-04-08）
崔君,廖荣恒,汪永义[3]（2019）在《常用心脏保存液及其改良方法》一文中研究指出心脏移植是治疗终末期心力衰竭的最佳方案,但由于捐献器官的不足,心脏移植手术的开展受到极大限制。心脏保存液的改良对于扩大移植心脏供体池极为关键,该文介绍UW液、HTK液和Celsior液等3种常见的心脏保存液及其改良方法。(本文来源于《国际心血管病杂志》期刊2019年02期）
李勇男[4]（2019）在《不同心脏保存液对供体心脏保护效果评价与供体心脏中冷诱导RNA结合蛋白作用机制的研究》一文中研究指出第一部分不同心脏保存液的供体心脏保护效果的网状Meta分析目的:心脏移植中,将供体心脏浸泡于4℃心脏保存液中。心脏保存液对供体心脏的保护效果直接影响着患者的生存率与生活质量。临床实践中最常用的叁种心脏保存液有HTK液(Histidine-Tryptophan-Ketoglutarate solution)、Celsior液及UW液(University of Wisconsin solution),但何种保存液保护效果最佳尚无定论。本研究部分通过对HTK液、Celsior液及UW液进行网状Meta分析,评价3种心脏保存液的临床效果。方法:检索电子文献数据库PubMed、Embase、the Cochrane Library、the Centre for Evidence in Transplantation、the International Clinical Trials Registry Platform。所有电子文献数据库从建立日期检索至2019年1月17日。纳入患者年龄大于18岁、心脏移植患者及供体心脏使用HTK液、Celsior液及UW液保存的临床研究。主要终点指标是患者心脏移植术后30天生存率,次要终点指标是患者心脏移植术后原发性移植物功能障碍发生率。利用Newcastle-Ottawa Scale(NOS)评分量表对纳入的研究进行研究质量评价。传统Meta分析采用RevMan5.3软件,网状Meta分析采用GeMTC软件。结果:共有8篇研究文献纳入,其中2篇比较HTK液与Celsior液,2篇比较HTK液与UW液,4篇比较Celsior液与UW液。应用UW液保存供体心脏移植后,患者的30天生存率高于HTK液与Celsior液(OR=0.55,95%CI:0.37-0.69,P<0.0001;OR=0.72,95%CI:0.54-0.94,P=0.02),但HTK液与Celsior液之间无差异。对于心脏移植术后30天生存率,网状Meta分析共纳入患者共计6658名,其中HTK组有467名患者,Celsior组有2098名患者,UW组有4093名患者。UW液排序第一的概率为95%,Celsior液排序第二的概率为85%,HTK液排序第叁的概率为90%。应用UW液保存供体心脏移植后,患者的心脏移植术后原发性移植物功能障碍发生率低于Celsior液(OR=1.34,95%CI:1.10-1.62,P=0.003)。对于术后原发性移植物功能障碍发生率,网状Meta分析共纳入患者共计5600名,其中HTK组有244名患者,Celsior组有2067名患者,UW组有3289名患者。HTK液排序第一的概率为96%,Celsior液排序第二的概率为89%,UW液排序第叁的概率为92%。结论:心脏移植患者应用UW液保存的30天生存率高于Celsior液与HTK液,并且原发性移植物功能障碍发生率低于Celsior液与HTK液。Celsior液与HTK液对比发现,二者之间供体心脏效果无差异。网状Meta分析提示,UW液供体心脏保存效果最佳,Celsior液的保存效果可能优于HTK液。第二部分不同心脏保存液的供体心脏保护效果的iTRAQ定量蛋白质组学研究目的:心脏保存液主要由不同离子、非渗透性物质、能量代谢底物、缓冲物质及抗氧化物等成分构成,其临床应用效果不同,尚未有定论何种心脏保存液效果最佳。蛋白质组学可以分析发现特定条件下蛋白质整体的变化水平。本研究部分通过iTRAQ定量蛋白质组学技术,评价UW液、Celsior液及HTK液保存后,心肌细胞内整体蛋白质数量与功能的变化。方法:选取Sprague-Dawley(SD)成年雄性大鼠12只,分为假手术组、HTK组、Celsior组及UW组。分别灌注不同组别对应心脏保存液,保存供体心脏6小时取材。各组提取蛋白质,进行iTRAQ标记与质谱鉴定。对鉴定出差异蛋白质筛选,分别进行GO功能注释、GO功能显着性富集分析、KEGG功能注释及KEGG Pathway显着性富集。结果:共鉴定到1804个蛋白质,进一步进行差异分析,3种保存液保存后差异蛋白变化总数相近,其中UW液差异蛋白总数最低,HTK液差异蛋白总数最高,Celsior液居中,并且差异蛋白均以蛋白下调变化为主。GO功能注释分析发现,相比于对照组,3种保存液差异蛋白主要涉及细胞(cell)、细胞区域部分(cell part)、细胞器(organelle)、结合(binding)、催化活性(catalytic activity)、结构分子活性(structural molecule activity)、细胞过程(cellular process)、单组织过程(single-organism process)及代谢过程(metabolic process)。GO富集分析,相比于对照组,HTK液与Celsior液上调差异蛋白与氧运输活性(oxygen transporter activity)、氧结合(oxygen binding)及血红素结合(heme binding)相关。HTK液下调差异蛋白与组蛋白赖氨酸甲基化(histone lysine methylation)及组蛋白H3-K4甲基化(histone H3-K4 methylation)。Celsior液下调差异蛋白与核小体结构、定位及功能相关。UW液下调差异蛋白与肽链内切酶抑制活性(endopeptidase inhibitor activity)、肽酶抑制活性(peptidase inhibitor activity)及肽链内切酶调节活性(endopeptidase regulator activity)相关。KEGG功能注释与Pathway富集分析,相比于对照组,HTK液、Celsior液及UW液下调差异蛋白分别与蛋白质消化吸收(Protein digestion and absorption)、糖尿病并发症AGERAGE信号通路(AGE-RAGE signaling pathway in diabetic complications)及补体与凝血级联(Complement and coagulation cascades)相关。结论:3种心脏保存液差异蛋白主要涉及细胞内核小体与蛋白酶体系统水平改变。HTK液与Celsior液下调差异蛋白涉及I型与III型胶原,UW液下调蛋白涉及补体系统。相比于UW液,HTK液与Celsior液上调差异蛋白均可能执行补体与凝血级联(Complement and coagulation cascades),并且Celsior液上调差异蛋白与HIF-1信号通路(HIF-1 signaling pathway)存在相关性。第叁部分冷诱导RNA结合蛋白在供体心脏保存中的iTRAQ定量蛋白质组学研究目的:除心脏保存液添加各种成分达到保护效果外,维持低温也是供体心脏保护的核心要点之一,但其相关的分子机制并不明确。在冷刺激状态下,冷诱导RNA结合蛋白(Cold inducible RNA-binding protein,CIRBP)表达升高,参与细胞的各种生理过程,发挥着重要作用。本研究内容评价在供体心脏保存过程中,CIRBP涉及的相关分子机制。方法:选取SD、Cirbp-/-及Cirbp-Tg成年雄性大鼠各6只,分为假手术组、wild-type组、Cirbp-/-组及p CMV-Cirbp组。使用UW液保存供体心脏6小时取材。各组提取蛋白质,进行iTRAQ标记与质谱鉴定。对鉴定出差异蛋白质筛选,分别进行GO功能注释、GO功能显着性富集分析、KEGG功能注释及KEGGPathway显着性富集。结果:共鉴定得到2192种蛋白质,差异分析发现,UW液保存后差异蛋白以下调蛋白为主,相比于wild-type组,Cirbp-/-组及p CMV-Cirbp组差异蛋白变化数量较多,但差异蛋白均以下调为主。GO功能注释分析,相比于wild-type组,Cirbp-/-组及p CMV-Cirbp组差异蛋白主要涉及细胞(cell)、细胞区域部分(cell part)、细胞器(organelle)、结合(binding)、催化活性(catalytic activity)、结构分子活性(structural molecule activity)、细胞过程(cellular process)、单组织过程(single-organism process)及代谢过程(metabolic process)。GO富集分析,Cirbp-/-组下调差异蛋白富集得到与核小体结构、定位及功能相关,p CMV-Cirbp组下调差异蛋白主要富集得到血液微粒(blood microparticle)。KEGG功能注释分析,相比于wild-type组,Cirbp-/-组上调差异蛋白与糖酵解与糖异生(Glycolysis/Gluconeogenesis)相关,p CMV-Cirbp组下调差异蛋白与氧化磷酸化(Oxidative phosphorylation)相关。KEGG Pathway富集分析,Cirbp-/-组上调差异蛋白有组氨酸代谢(Histidine metabolism)、甘氨酸、丝氨酸与苏氨酸代谢(Glycine,serine and threonine metabolism)、色氨酸代谢(Tryptophan metabolism)、精氨酸与脯氨酸代谢(Arginine and proline metabolism)及丙酮酸代谢(Pyruvate metabolism)相关,p CMV-Cirbp组下调差异蛋白与半乳糖代谢(Galactose metabolism)与氨基酸糖与核苷酸糖代谢(Amino sugar and nucleotide sugar metabolism)相关。结论:在供体心脏保存过程中,CIRBP可能参与DNA损伤修复过程、维持细胞内能量稳态及降低活性氧自由基,并且当其过表达时可能降低心肌细胞的应激刺激。(本文来源于《兰州大学》期刊2019-03-01）
魏嘉[5]（2018）在《猪心脏移植供心冷保存的研究及评价体系的建立》一文中研究指出心脏移植是挽救终末期心脏病患者生命和生活质量唯一有效的治疗手段。然而,心脏移植过程中缺血再灌注损伤(Ischemia reperfusion injury,IRI)和供心冷保存时限较短的问题,一直是困扰心脏移植推广应用的主要瓶颈。心脏移植过程中,供心必然经历缺血缺氧-再灌注重新获氧这一过程,导致组织损伤和炎症反应。IRI是供心术后急、慢性功能不全甚至功能衰竭,致使死亡率上升的主要因素。目前临床通常使用冷保存液灌注和保存离体供心,然而,在此低温条件下的心肌代谢并未停止,有害代谢产物的积聚最终会在再灌注阶段引起供心损伤。目前该法的心肌有效保存时限仅有4~6 h,进一步加剧了待移植患者与供心不足的矛盾。由此可见,研制可减轻IRI和延长供心冷保存时限的冷保存液,是心脏移植的重要技术关键和研究热点。IRI诱导多条信号通路的激活并调控一系列基因的表达,导致细胞凋亡坏死最终引起器官损伤,业已证明:细胞凋亡、补体激活和炎症皆为参与IRI的经典关键通路。研究发现将针对上述通路中关键基因的化学合成小干扰RNA(Small interfering RNA,siRNA)加入器官保存液,可有效抑制IRI所致的器官损伤,然而,这些研究仅局限于小动物模型,很难客观模拟人类疾患过程。猪在解剖结构、生理生化和免疫反应等方面与人类极为相似,是学术界公认的最适合模拟人类心血管系统疾病的模型动物。有鉴于此,我们以小型猪为实验动物,根据RNA干扰理论,研制可减轻IRI和延长有效保存时限的含siRNA心肌保存液。在siRNA体内给药中,转染效率一直是个技术难点。小动物实验证明,大剂量裸siRNA分子加入保存液可有效减少IRI,但大剂量siRNA给药策略不适用于大动物或人医临床。而转染试剂(Transfection reagent,TR)广泛应用于siRNA的体内和体外转染中,可减少siRNA使用剂量,较适合临床给药。为此,我们选取IRI相关的4个基因:Complement component 3(C3)(补体激活)、Nuclear Factor kappa B-p65(p65)(炎症)、Caspase 8和Caspase 3(细胞凋亡),设计并合成siRNA,用猪肾细胞(PK15)和猪睾丸细胞(ST)筛选出抑制效率最强的4对siRNA。再将不同剂量化学修饰的siRNA-TR混合物或单纯siRNA加入常规心脏保存液Celsior液中,灌注并冷保存离体猪心。研究发现含低剂量siRNA-TR的保存液(4 OD siRNA-TR)在抑制4个目的基因表达和减少细胞凋亡作用上均优于只含有高剂量单纯siRNA的保存液(16 OD siRNA)。为减少和降低供心离体冷保存和再灌注引起的组织损伤和功能障碍,我们研究发现含siRNA-TR的保存液可减少冷保存供心的凋亡细胞,但其对再灌注复跳心的作用尚不清楚。为此,我们设计和构建了大动物供心保存评价体系,在国内率先建立大动物离体心灌流系统,通过灌注温血灌流液可使各类大动物供心在离体情况下跳动,再与心脏原位移植模型结合,构成供心体内外各项主要生物学参数综合评价平台。保存后供心在连接于离体心灌流系统或原位移植到受体时,经监测复跳过程中左心室血流动力学参数、心肌生存率、组织结构改变、心肌坏死、氧化应激、免疫激活和炎症反应等一系列生物学参数,可全面客观评判不同保存方式保存后的供心质量,为大动物心功能监测和人医心血管疾病临床相关研究奠定了坚实的研究基础和技术平台。为检验含siRNA-TR的保存液对再灌注猪心的保护效果,使用500 ml含2、4、6 OD siRNA(siRNA组)或4 OD scramble siRNA(阴性对照组,Ctrl)与TR混合物的Celsior液,以及500 ml单纯Celsior液(常规保存组,CEL),灌注并冷保存离体猪心12 h后再将供心连接于体外灌流系统,温血灌注供心以左心做功模式跳动3 h。结果发现:siRNA组供心做功血流动力学参数均好于对照组CEL和Ctrl;做功结束后,其组织细胞凋亡水平低;组织结构改变轻微;血浆中的心肌酶学标志物和组织中的氧化应激标志物水平低;心肌组织中促炎因子和4个靶蛋白表达下调;组织中TLR-7及其配体MyD88水平未见升高。3个siRNA组之间相比,4 OD组综合效果最好,与冷保存未复跳猪心试验结果一致。从而提示siRNA保存液具有保护心功能、抑制细胞凋亡、保护心肌正常组织结构、减轻心肌坏死和氧化应激、控制炎症反应的作用且具备良好的生物安全性。基于离体心试验结果,为证实4 OD-TR的siRNA保存液在原位移植中同样具有较好心肌保护效力,我们将6只成年雄性小型猪供心分为2组,常规保存组供心冷保存6 h,而灌注siRNA-TR保存液的供心冷保存时间延长到12 h。冷保存结束后全部原位移植到受体胸腔并开放主动脉使其复跳做功3 h,期间记录血流动力学参数。所有供心冷停跳后、检测与离体心复跳心相同的指标。结果发现,与常规冷保存6 h的供心相比,延长保存时间到12 h的供心在凋亡水平、组织结构变化、心肌坏死、炎症反应和先天免疫激活等方面都有所减轻,心功能参数良好。在延长一倍时间的基础上,仍具有比常规临床保存供心更好的质量参数。本研究证明:通过含抑制炎症和凋亡途径的siRNA心肌保存液冷保存猪供心,能有效提高供心质量和延长保存时限,为深入研发临床新型供心保存液提供了新思路和新途径,具有广阔的应用前景和潜在的开发价值。(本文来源于《上海交通大学》期刊2018-01-01）
耿蔚然[6]（2017）在《利格列汀促进大鼠心脏低温保存后心功能恢复的研究》一文中研究指出在心脏疾病晚期心脏移植常作为主要的治疗手段,减轻心脏低温保存导致的心肌损伤是保证和提高整个手术成功的关键。利格列汀是一种选择性极强的二肽基肽酶4(dipeptidylpeptidase4,DPP-4)抑制剂。早期研究发现,利格列汀可以抑制DPP-4、减少胰高血糖素样肽-1和抑胃肽的分解代谢,从而降低血糖浓度,由于DPP-4抑制剂改善高血糖状况,保护胰岛β细胞的作用显著,因此最初作为一种新型降糖药被广泛运用于临床。近年来的研究表明,DPP-4抑制剂在心血管保护方面也具有重要作用。研究发现,DPP-4抑制剂具有抗氧化应激的功能,通过降低慢性心肌梗死大鼠心肌的氧化应激水平,改善心率变异性和左心室功能。DPP-4抑制剂还可通过减少巨噬细胞浸润、降低炎性因子CD11b和CD11c的水平,从而达到心血管保护作用。故我们推测在Celsior液心脏低温保存液中添加利格列汀,具有减轻低温保存导致的心脏功能下降的作用。目的本实验主要在离体大鼠心脏低温保存模型上观察利格列汀是否可以促进低温保存心脏在复灌期心功能的恢复,并探讨其可能的机制方法1)建立心脏Langendorff灌流模型。SD大鼠离体心脏固定于Langendorff装置上,从主动脉根部逆行恒压灌注(76mmHg)。灌流液选用37℃氧合的Krebs-Henseleit 液体(KH 液)。2)建立心脏低温保存模型:大鼠心脏在Celsior液中4℃低温保存9h后,固定在Langendorff装置上,用KH液再灌注60 min。3)心功能的测定:通过MedLab生物信号采集处理系统记录心功能指标,包括:左心室舒张末期压力(left ventricular end-diastolic pressure,LVEDP)、左心室发展压力(left ventricular developed pressure,LVDP)、心室最大收缩速率(Maximal systolic velocity of left ventricular pressure,+dP/dtmax)、心室最大舒张速率(Maximal diastolic velocity of left ventricular pressure,-dP/dtmax)、心率、(heart rate,HR)等。4)Western blotting法检测蛋白:提取心肌组织总蛋白和线粒体蛋白,Western blotting 法检测心脏组织中 Drp1、Drp1 S616、CaMK Ⅱ、p-CaMK Ⅱ、RhoA、mitofusin 1(Mfn 1)、mitofusin2(Mfn2)等蛋白的表达水平。5)心肌活性氧生成的测定:参照活性氧检测试剂盒的说明书,用DCFH-DA法测定心肌活性氧生成。6)心肌脂质氧化的测定:利用脂质氧化的产物丙二醛(Malondialdehyde,MDA)可与硫代巴比妥酸反应产生红色产物的显色反应的原理。参照脂质氧化检测试剂盒说明书测定组织脂质氧化水平。7)心肌MnSOD活性检测:参照MnSOD活性检测试剂盒,用WST-8法测定组织中MnSOD活性。8)透射电镜观察大鼠心肌线粒体形态。结果1)SD大鼠离体心脏在低温保存9 h后,再灌注60 min时,LVEDP明显升高,LVDP、+dP/dtmax和-dP/dtmax均明显下降。与低温保存组相比,加入不同浓度的利格列汀后,发现中、高浓度的利格列汀(0.50、0.75nM)组能明显抑制低温保存所致的LVEDP的抬高,以及LVDP、+dP/dtmax和-dP/dtmax的降低,低、中、高浓度利格列汀组均能增加低温保存心脏复灌后冠脉流量。2)与空白对照组相比,大鼠离体心脏低温保存后再灌注60 min时,心室肌组织NOX2的表达明显增高。中、高浓度利格列汀(0.5、0.75 nM)组能明显抑制低温保存后NOX2的高表达。与低温保存液组比,各个浓度利格列汀均能减少低温保存心脏ROS的产生,同时中、高浓度利格列汀还能抑制低温保存诱导的丙二醛水平增高。3)与空白对照组相比,大鼠离体心脏低温保存后心肌组织总Drp1水平无显着变化,但p-Drp1S616和线粒体Drp1蛋白水平却明显增加。同时空白对照组和单纯低温保存组相比,线粒体Mfn1、Mfn2和Opa1的表达水平无统计学差异。4)与空白对照组相比,大鼠离体心脏低温保存后CaMKⅡ和RhoA蛋白表达量无明显变化;但p-CaMKⅡ的表达却明显增高。5)心脏低温保存后p-CaMKⅡ和p-Drp1S616水平明显升高,而高浓度利格列汀与NOX2的特异性抑制剂Phox-I2能显着降低低温保存诱导的p-CaMK Ⅱ,p-Drp1 S616和线粒体Drp1表达增加。同时,CaMK Ⅱ特异性抑制剂KN-93也能显着对抗低温保存诱导的p-Drp1 S616和线粒体Drp1表达量的增加。6)单纯低温保存后大鼠心肌肌丝紊乱程度增加,出现空泡,线粒体片段化程度增加。利格列汀组能显着降低低温保存引起的线粒体片段化。结论本实验结果表明利格列汀可以促进大鼠心脏低温保存后心功能的恢复。其作用机制可能与抑制NOX2的过度表达,降低Drp1 S616磷酸化和线粒体转位,减少线粒体分裂有关。(本文来源于《浙江大学》期刊2017-11-01）
张瑞[7]（2016）在《高压干燥保存小鼠心脏的机制研究》一文中研究指出目的终末期心脏病的治疗方法中,心脏移植无论是从病人的治愈率还是病人的术后生存时间来看,都是无可非议的,甚至是最好的。等待接受心脏移植的患者数量每年都在增加。供者来源少,受者数量却增加,对供心的要求就越来越急迫。常用心脏保存液保存离体心脏限制在4-6 h,离体供心保存时间短,限制了心脏移植手术的开展。通过改良保存液的成分,如加入钙离子、抗氧化剂等可以减轻保存过程中对供心的损伤,但效果仍不理想。如若找到一种全新的离体器官(心脏)保存方法,在保证保存质量的同时大大延长保存时间,可缓解目前供心紧缺的现状,造福广大复杂先天性心脏病和终末期心脏病的患者。本实验课题采用一氧化碳(Carbon monoxide,CO)高压干燥保存这一全新的器官保存方法,用以保存小鼠离体供心,观察一氧化碳和氧气混合气体的高压干燥保存方式是否优于目前常用的康斯特保护液(HistidiBe Tryptophan Ketoglurate Solution,HTK液)浸泡保存,并对该保存方式的可能作用机制进行探讨。方法一SPF级C57BL/6雄性小鼠,84只。供体鼠4-6周龄,体重(21±2)g,共48只;受体鼠6-8周龄,体重(29±2)g,共36只,所有实验用鼠均购自中山大学实验动物中心,饲养在屏障环境内。供体鼠随机分为4组,每组12只：空白对照组、 即刻移植组、HTK浸泡保存24移植组(HTK组)及CO高压干燥保存24 h移植组(CO组)。受体鼠随机分为3组,每组12只：即刻移植受体组、HTK受体组及高压干燥受体组。供体小鼠处理：小鼠术前均不禁食禁水,称重后,10%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉,麻醉成功后剪开腹壁,下腔静脉予以暴露,4℃肝素水1 mL(100 u/mL),经下腔静脉注射。剪开胸壁及膈肌,向心脏以1 mL注射器缓慢注射高钾停搏液,直至心脏完全停止跳动。分离心脏和肺脏周围组织,将心肺联合取下并迅速放入4℃装有肝素生理盐水的塑料培养皿中。供心处理：空白对照组取心后不做移植,马上取材进行相关检测；HTK保存组则是15 mL 4℃HTK液中保存24 h；高压干燥保存组则是处理完供心后悬挂于已预冷至4℃的干燥高压保存罐内。往罐内注入800 hPa的C0及3,200 hPa的02,密封后将罐置于4℃冰箱中保存24 h,注意高压灌内气体变化并及时补充气体。同系小鼠颈部异位心脏移植模型建立：受体鼠6-8周龄,按供体鼠处理方法麻醉满意后仰卧位固定。采用改良cuff方法进行小鼠异位心脏移植术。分离静脉残端多于组织,将静脉残端修正后穿入静脉套管,然后后翻呈袖套样套于套管壁上,10-0丝线套扎固定。移植后观察供心2h,记录供心复跳情况质地及颜色变化等。记录供心复跳率；依据复灌后供心的收缩强度、颜色及供心的硬度进行移植物活力评分,2h观察完毕后,缝皮,受体鼠置于电热毯保温、独笼饲养。术后供心取样检测：空白对照组小鼠取心后即刻送检,即刻移植组、HTK保存组、高压干燥保存组于移植后24h取心送检。苏木精—伊红(hematoxylin-eosinstaining,HE)染色法进行组织切片的染色,观察切片病理变化情况,缺口末端标记法(Terminal-deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling,Tunnel)检测凋亡细胞,进行凋亡细胞计数(高倍显微镜下),免疫印迹法(Western-blot,WB)检测自噬标志性蛋白微管相关蛋白1-轻链3-Ⅱ(Microtubule-associated protein 1 light chain 3-Ⅱ, LC3-Ⅱ)及B细胞白血病／淋巴瘤-2(B cell lymphoma/leukemia-2, Bcl-2)蛋白。结果供心移植后复跳率结果为：即刻移植组有9只复跳(n=12)、HTK保存组有1只复跳(n=12),高压干燥保存组有8只复跳(n=12),复跳率结果分别为75%、8.3%、66.7%,组间差异有统计学意义(I2=12.667,P=0.002<0.01),调整检验水准a'=a/3=0.0167,多样本间行两两比较,即刻移植组与高压干燥保存组复跳率差异无统计学意义(P=0.653>0.0167),高压干燥保存组复跳率明显高于HTK液保存组(P=0.003<0.0167),即刻移植组复跳率明显高于HTK保存组(P=0.001<0.0167)。各组移植物活力评分分别用中位数、第1四分位数(P25%)及第3四分位数(P75%)表示,即刻移植组、HTK保存组及高压干燥保存组活力评分分数为4.5(4.0-4.5)、0.75(0.5-1.0)、2.5(2.0-2.875),差异有统计学意义(P<0.01)。与即刻移植组移植物功能评分比较,HTK保存组、高压干燥保存组降低(P<0.01)。高压干燥保存组移植物功能评分高于HTK保存组(P<0.01)。Western-blot检测发现结果：空白对照组、即刻移植组、HTK组、CO组LC3-Ⅱ蛋白表达量分别为(0.125±0.03)、(1.243±0.20)、(0.157±0.06)、(0.867±0.18),组间差异有统计学意义(F=187,P<0.05)。组间行两两比较,LC3-Ⅱ蛋白在即刻移植组表达最高,空白对照组和HTK组相比,差异没有统计学意义(P>0.05),CO组表达高于HTK组,差异有统计学意义(P<0.01)。空白对照组、即刻移植组、HTK组、CO组Bcl-2蛋白表达量分别为(0.187±0.018)、(2.065±0.319)、(0.261±0.075)、(2.058±0.292),组间差异有统计学意义(F=280,P<0.05)。Bcl-2蛋白在即刻移植组表达最高,CO组和即刻移植组相比,差异没有统计学意义(P>0.05),CO组表达高于HTK组,差异有统计学意义(P<0.01)。光学显微镜下观察HE染色结果,空白对照组心肌细胞染色均一,间质未见水肿,即刻移植组供心,心肌结构完整,间质稍水肿但无炎细胞浸润和红细胞渗出,HTK组供心,心肌细胞变性、细胞间质水肿,间质可见大量炎细胞浸润和红细胞渗出,CO组供心细胞排列致密,结构基本完整,染色比较均匀,间质可见少量的中性粒细胞浸润,无明显的红细胞渗出。Tunnel染色显示,光镜下空白对照组心肌细胞染色均一淡染,未发现异常核。Tunnel标记的阳性细胞细胞核呈绿色,即刻移植组心肌细胞染色均匀,未发现绿色阳性细胞,HTK组可见大量绿色阳性凋亡细胞,明显较CO组增加。空白对照组、即刻移植组、HTK组、CO组四组凋亡细胞指数分别1.08±0.56、2.13±1.71、26.72±5.23、5.04±1.77,差异有统计学意义(F=209,P<0.01)。组间两两比较差异有统计学意义(P<0.01)：与空白对照组、即刻移植组比较,HTK、CO两组凋亡细胞指数升高,差异有统计学意义(P<0.01)； CO组凋亡指数较HTK组低,差异有统计学意义(P<0.01)；空白对照组、即刻移植两组间凋亡细胞指数差异无统计学意义。方法二SPF级C57BL/6小鼠,雄性,60只。供体鼠4-6周龄,36只,体质量21±2 g；受体鼠6-8周龄,24只,体质量29±2 g,均购自中山大学实验动物中心,饲养在屏障环境内,供体鼠随机分为3组,每组12只,为空白对照组、HTK浸泡保存16h移植组(HTK组)及CO高压干燥保存16 h移植组(CO组)。受体鼠随机分为2组,每组12只,分组如下：HTK保存受体组及高压干燥保存受体组。供体小鼠处理：小鼠术前均不禁食禁水,称重后,10%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉,麻醉成功后剪开腹壁,下腔静脉予以暴露,4℃肝素水1 mL(100 u/mL)经下腔静脉注射。剪开膈肌及胸壁,向心脏以1 mL注射器缓慢注射高钾停搏液,直至心脏完全停止跳动。分离心脏和肺脏周围组织,将心肺联合取下并迅速放入4℃装有肝素生理盐水的塑料培养皿中。供心处理空白对照组取心后不做移植,马上取材进行相关检测；HTK保存组则是15 mL 4℃HTK液中保存16 h；高压干燥保存组则是处理完供心后悬挂于已预冷至4℃的干燥高压保存罐内。往罐内注入400 hPa的CO及1,600 hPa的02,密封后将罐置于4℃冰箱中保存16 h,注意高压灌内气体变化并及时补充气体。同系小鼠心脏腹部异位移植模型建立：6-8周龄小鼠作为受体鼠,麻醉满意后仰卧位固定在手术台上,显微镊游离腹主动脉血管及下腔静脉血管,显微血管夹夹闭所移植部位的血管的近心端及远心端。将供体心脏放在受体小鼠腹腔右侧,10-0尼龙线将受体小鼠腹主动脉与供体心的升主动脉作端侧吻合,受体鼠下腔静脉与供体心肺动脉血管作端侧吻合。移植后的供心2h,记录供心复跳情况质地及颜色变化等。依据开放血管夹恢复血流后供心的搏动情况来记录供心复跳率；进行移植物活力评分。2h观察完毕后,缝皮,受体鼠置于电热毯保温、独笼饲养。术后供心取样检测：空白对照组小鼠取心后即刻送检,HTK保存组、高压干燥保存组于移植后24 h取心送检。取叁组供心的心肌组织,苏木精—伊红HE染色法进行组织切片的染色,观察切片中心肌细胞排列、间质水肿及炎细胞浸润情况,Tunnel检测凋亡细胞,进行凋亡细胞计数(高倍显微镜下),并比较四组心肌细胞的凋亡程度,行聚合酶链式反应RT-PCR检测肿瘤坏死因子-a(Tnecrosis factor α,TNF-a),白细胞介素-1β(Interleukin-1β,JL-1β),白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6),,细胞间黏附分子-1(Intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1)和白细胞介素-10(Interleukin-10,ILI-10)的表达,推断高压干燥保存法的可能作用机制。结果供心移植后复跳率结果为：HTK保存组有3只复跳(n=12),高压干燥保存组有10只复跳(n=12),复跳率结果分别为25%、83.3%,组间差异有统计学意义(P=0.012<0.05),CO组供心复跳率高于HTK组。移植物活力评分结果,各组移植物活力评分分别用中位数、第1四分位数(P2s%)及第3四分位数(P75%)表示,HTK保存组及高压干燥保存组活力评分分数为1.30(0.963-1.54)、3.50(3.125-3.938),两组间比较采用Mann-Whitney U检验,CO组移植物功能优于HTK组,差异有统计学意义(Z=-3.447,P<0.01)。RT-PCR检测结果HTK组、CO组TNF-a的基因表达的相对单位为(5.095±0.421)、(3.602±0.219),HTK组表达较CO组高,t=10.902,P<0.01,差别有统计学意义；HTK组、CO组IL-1p基因表达的相对单位为(4.924±0.825)(2.891±0.278),HTK组表达较CO组高,t=8.084,P<0.01,差别有统计学意义；HTK组、CO组IL-6基因表达的相对单位为(5.345±0.667)、(3.033±0.320),HTK组表达较CO组高,t=10.821,P<0.01,差别有统计学意义；HTK组、CO组ICAM-1基因表达的相对单位为(4.892±0.817)、(3.073±0.524),HTK组表达较CO组高,t=6.493,P<0.01,差别有统计学意义；HTK组、CO组IL-10基因表达的相对单位为(3.617±0.419)、 (7.190±1.048),CO组表达较HTK组高,t=10.971,P<0.01,差别有统计学意义。光学显微镜下观察HE染色结果,空白对照组心肌细胞染色均一,结构完整,HTK组供心,心肌细胞变性,间质可见大量炎细胞浸润和红细胞渗出,CO组供心细胞排列致密,结构基本完整,间质可见少量的中性粒细胞浸润,无明显的红细胞渗出。Tunnel染色显示,光镜下空白对照组心肌细胞染色均一淡染,未发现异常核。Tunnel标记的阳性细胞细胞核呈绿色,HTK组可见大量绿色阳性凋亡细胞,明显较CO组增加。空白对照组、HTK组、CO组叁组凋亡细胞指数分别1.36±0.30、14.18±4.75、6.61±1.06,差异有统计学意义(F=62.963,P<0.01)。组间两两比较差异有统计学意义(P<0.01)；与空白对照组比较,HTK组、CO两组凋亡细胞指数升高,差异有统计学意义(P<0.01)； CO组凋亡指数较HTK组低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论综上所述,高压干燥的保存方式是一种有效的心脏保存方法,该方法通过CO作用于心肌细胞,发挥抗炎症、抗凋亡的细胞保护作用,使心肌细胞中Bcl-2蛋白上调,抑制心肌细胞凋亡,该保存方法亦可能利于冷缺血过程中自噬作用的发挥,通过清除无用的细胞器和蛋白质为心肌细胞提供能量,达到保护心肌的作用,但其在供心保存过程中的机制仍值得进一步探讨。(本文来源于《南方医科大学》期刊2016-03-25）
刘佳,李建军[8]（2016）在《LifePort保存供肾对心脏死亡器官捐献肾移植术的研究现状》一文中研究指出心脏死亡器官捐献(DCD)供肾的质量对肾脏移植术后受者的生存质量、存活率及移植肾的功能恢复有着重大影响。然而,不同的供肾保存方法对维持供肾的活性有不一样的效果。目前DCD供肾的保存方法有传统静态低温保存和以Life Port为代表的肾转运器机械灌注低温保存两种,前者简单方便、价格便宜、使用安全,但是肾脏移植术后肾功能延迟恢复(DGF)发生率相对较高,而后者能有效弥补其相对不足,本文主要就Life Port保存DCD供肾对肾脏移植术的利弊进行综述。(本文来源于《中南医学科学杂志》期刊2016年02期）
张瑞,黄成锋,李潇,郑少忆,郭惠明[9]（2016）在《高压干燥保存移植心脏机制的实验研究》一文中研究指出目的探索一种全新的器官保存方式——高压干燥保存,并通过检测炎性因子水平探讨该方式优于目前常用的浸泡保存方式的可能作用机制。方法 2014年12月—2015年8月选取SPF级C57BL/6小鼠60只,其中4~6周龄供体小鼠36只,6~8周龄受体小鼠24只。供体小鼠采用随机数字表法分为空白对照组、组氨酸-色氨酸-酮戊二酸盐液(HTK液)浸泡保存组、高压干燥保存组,每组12只。受体小鼠采用随机数字表法分为HTK液浸泡保存受体组、高压干燥保存受体组,每组12只。空白对照组仅取供心,不做移植;HTK液浸泡保存组供心浸泡于HTK液中;高压干燥保存组供心悬挂并置于高压气体罐中(P_(O_2):1 600 h Pa+P_(CO):400 h Pa=2 000 h Pa)。移植后2 h,对比观察HTK液浸泡保存受体组、高压干燥保存受体组供心复跳率及供心移植物功能评分。移植后24 h,采用荧光实时定量-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测3组供体小鼠心肌细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素(IL)1β、IL-6、IL-10、细胞间黏附分子1(ICAM-1)表达水平及心肌细胞凋亡指数。结果高压干燥保存受体组小鼠供心复跳率高于HTK液浸泡保存受体组〔83.3%(10/12)与25.0%(3/12),P=0.012〕。高压干燥保存受体组小鼠供心移植物功能评分高于HTK液浸泡保存受体组〔3.5(1.0)分与1.3(0.5)分,Z=-3.447,P<0.01〕。HTK液浸泡保存组和高压干燥保存组小鼠心肌细胞TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10、ICAM-1表达水平高于空白对照组(P<0.05);HTK液浸泡保存组小鼠心肌细胞TNF-α、IL-1β、IL-6、ICAM-1表达水平高于高压干燥保存组(P<0.05);高压干燥保存组小鼠心肌细胞IL-10表达水平高于HTK液浸泡保存组(P<0.05)。空白对照组、HTK液浸泡保存组、高压干燥保存组小鼠心肌细胞凋亡指数分别为(1.36±0.30)%、(14.18±4.75)%、(6.61±1.06)%,差异有统计学意义(F=62.963,P<0.05);HTK液浸泡保存组、高压干燥保存组小鼠心肌细胞凋亡指数高于空白对照组(P<0.05);HTK液浸泡保存组小鼠心肌细胞凋亡指数高于高压干燥保存组(P<0.05)。结论氧气和一氧化碳(P_(O_2):1 600 h Pa+P_(CO):400 h Pa=2 000 h Pa)的高压干燥环境通过抗凋亡和减轻炎性损伤作用,对供心有保护作用,促进移植后供心功能恢复,有效延长供心保存时间。(本文来源于《中国全科医学》期刊2016年09期）
周鹏宇[10]（2016）在《一氧化碳高压干燥保存方法抗凋亡对移植心脏的保护作用》一文中研究指出研究背景心脏移植术是终末期心脏衰竭的治疗手段之一。然而,供心不足成为了心脏移植术发展的瓶颈。即使现在,为了寻找捐献的供心而远赴国外的患者及其家属仍不在少数。然而事实上,国外的医院也难以确保有充足的供体心脏以满足日益增长的心脏移植术需求。因此,很多患者到了国外也不一定能接受心脏移植术,患者及其家属长时间的等待给社会及其家庭带来了沉重的经济负担。供心供给不充分的重要原因之一,是供心无法长期保存。目前,供体心脏的保存方式普遍采用低温保存液浸泡保存的方式。但由于细胞水肿、细胞酸中毒、代谢底物耗竭等原因,其保存的安全时限只有4-6小时。因此,寻找一种新的器官保存方法是具有必要性的。相关研究表明,缺血再灌注损伤(ischemia/reperfusion injury, IRI)是心脏移植最常见的病理过程,是导致移供体心脏术后早期功能不全的主要原因和晚期并发症(如冠状动脉血管病变)的主要相关因素。因此,减轻缺血再灌注损伤是心脏移植能否成功的关键。目前,大量的实验和临床资料均表明心肌细胞凋亡是心肌缺血再灌注过程中心肌损伤的重要病理学基础之一,该病理生理过程受多种基因表达的调控,如Bcl-2、Bax和半胱氨酸天冬氨酸酶(Cysteine aspartase, Caspase)家族。因此,我们可以从抗心肌细胞凋亡途径保护供体心脏,这将为心脏移植提供了新的研究角度。1998年,Seki等发现由40000个细胞组成、拥有神经细胞的水熊虫在体内水分减少的状态下,被暴露于6000个大气压的极限高静水压环境后复苏并存活,并建议该成果能够应用于多细胞生物的保存。最初,Seki等通过使用全氟化碳(perfluorocarbon, PFC)溶液提供干燥环境保存离体小鼠心脏,然后再对离体心脏进行复苏,但发现实验结果重复率并不理想。然而,这代表着一种全新的脏器保存方法——脏器干燥保存方法开始在实验室得到运用。一氧化碳(Carbon Monoxide,CO)被认为是一种毒性气体,具有强烈的致命性。然而随着一氧化氮作为气体信使分子作用逐渐被发现,同样为气体小分子的CO,其在体内的生理作用也深受关注,CO成为第二种可以治疗疾病的体内重要信号分子。近年来研究表明,CO可以通过其血管舒张效应、抗凝、抗凋亡、抗炎症等机制发挥其对移植器官的缺血再灌注损伤的保护作用。因此,日本研究人员结合干燥保存脏器技术和CO对移植器官的缺血再灌注损伤现象具有保护作用的优势,发明CO高压干燥保存这一全新方法,Yoshida等将离体小鼠心脏暴露在总压力为2个标准大气压的不同比例混合气体(CO和O2)当中,放置在一个特制高压罐保存24小时,通过降低水分和气体环境的代谢抑制来提高心脏保存效果,然后再将离体心脏进行颈部异位移植,结果发现在P02:PCO=4:1条件下,小鼠心脏复跳率最为理想(复跳率为80%)。随后,Hatayama等用同样的气体干燥保存方法保存离体小鼠心脏,但混合气体总压力和比例有所不同(P02=3000hPa,PCO=4000hPa),心脏保存时间延长至48小时,结果发现小鼠心脏复跳率为100%。但是,上述的研究结果当中的机制尚不明确,仍然停留在现象阶段,并且实验动物对象只停留在小鼠层面,检测终点只有心脏复跳率、复跳心脏的心电图等较为主观的检测指标,所以需要对CO高压干燥保存方法的相关分子机制作进一步的探究,这可以为这种全新的心脏保存方法的临床研究提供科学依据。因此本研究在家兔腹腔异位移植基础上,延长供心保存时间至18小时,探讨CO高压干燥保存方法抗移植心脏心肌细胞凋亡的效果及其可能机制。研究目的及意义在日方研究人员对CO高压干燥心脏保存方法研究基础上,本实验采用新西兰兔作为实验动物,进一步探讨此方法在不同物种的可行性,同时验证CO高压干燥心脏保存方法抗心肌细胞凋亡的效果及其可能机制,为该方法的基础研究提供科学依据。因此,通过中日科学家的合作,针对于改进和完善供体脏器保护技术,以及解决可供移植脏器严重不足这两大突出问题,该实验具有十分重要的意义。研究创新之处(1)以新西兰兔作为实验对象研究CO高压干燥保存方法的保存效果。(2)本实验采用新西兰兔作为实验动物,弥补了日方在CO高压干燥心脏保存方法这一技术基础只开展在小鼠层面的欠缺, 日方在前期实验已确立CO高压干燥保存方法在保存小鼠心脏方面的显着效果,但检测终点只有心脏复跳率、复跳心脏的心电图等较为主观的检测指标,本实验在蛋白层面初步探讨CO高压干燥保存方法可能的保存机制,同时验证CO高压干燥保存方法抗心肌细胞凋亡的效果及其可能机制,为该方法的基础研究提供科学依据。研究方法(1)将48只新西兰兔随机分成叁组,其中空白对照组(修剪好的供心后,立即将供心作移植处理)有8对,HTK浸泡组(将修剪好的供心放在无菌盘中水浴,用注射器将5m1的HTK溶液从主动脉缓慢地顺灌到心肌中,再将心脏完全浸泡在装有HTK溶液的玻璃皿当中,最后将该玻璃皿放在4℃环境下保存18小时)有8对,CO高压干燥组(将修剪好的供心放在无菌盘中水浴,用注射器将5m1的KH溶液(含有4倍高渗葡萄糖)从主动脉缓慢地顺灌到心肌中,再将心脏悬挂于特制高压气体罐中缓慢加压后保存18小时,其中总体压力缓慢提升至4000hPa, PaO2::PaCO=4:1)有8对,其中特制CO高压干燥保存罐见图1-1。(2)建立兔心腹腔异位移植灌注模型,将新西兰兔麻醉后切开后腹膜,沿着血管鞘钝性分离并且暴露腹主动脉以及下腔静脉。首先,在腹主动脉上选定理想吻合位置,用血管夹阻断主动脉的上下两端；其次,切开腹主动脉,切口大小应该大于供体主动脉的口径；最后用肝素水冲洗腹主动脉,将供体心脏主动脉和受体腹主动脉行端侧吻合。同样,上述相同操作用在供体心脏主肺动脉和受体下腔静脉吻合上。开放血管夹检查吻合口有无出血,若有出血,则需针对出血处进行补针。等待心脏恢复规则有力搏动后,将其放置安稳,确保吻合的血管无扭曲以及压迫。(3)待供体心脏复跳1小时后,测定各实验组血清心肌酶(肌酸激酶(Creatine Kinase, CK)及同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)、谷草转氨酶(Aspartate transaminase, AST)),取各实验组供心的心肌组织后,用Wsetern免疫印迹法(Wstern Blot)法检测移植术后心肌细胞Bcl-2/Bax和Caspase-3蛋白的表达情况,采用原位末端标记染色法(Transferased UTP nick end labelling, TUNEL)检测心肌细胞凋亡阳性率,利用苏木素伊红染色(Hematoxylin-Eosin staining, HE staining)评估心肌组织病理学改变。研究结果(1)与空白对照组相比,CO高压干燥保存组、HTK浸泡组血清中CK、CK-MB、LDH、AST含量均显着增多。而与HTK浸泡组,CO高压干燥保存组血清中CK、CK-MB、LDH、AST含量均显着减少(P<0.05)(2)与空白对照组相比,CO高压干燥保存组、HTK浸泡组的心肌细胞Caspase-3表达均显着增多,而Bcl-2/Bax表达均显着减少(P<0.05)。与HTK浸泡组,CO高压干燥保存组的心肌细胞Caspase-3表达均显着减少,而Bcl-2/Bax表达均显着增大(P<0.05)。(3)与空白对照组相比,CO高压干燥保存组、HTK浸泡组的心肌组织凋亡细胞阳性率均显着增多(P<0.05),而与HTK浸泡组,CO高压干燥保存组的心肌组织凋亡细胞阳性率均显着减少(P<0.05)(4)光镜观察显示：与CO高压干燥组和HTK浸泡组相比,空白对照组间质水肿较为明显,心肌细胞断裂、溶解较少,细胞核多为饱满、圆状。而与CO高压干燥组相比,HTK浸泡组可见更多的溶解、断裂的心肌细胞,且胞质水肿、细胞核固缩、溶解及消失更明显。研究结论与传统的HTK浸泡保存供心方法相比,CO高压干燥保存方法更能通过抗心肌细胞凋亡从而提高供心保存效果,这通过调节Bcl-2/Bax蛋白表达比值,抑制Caspase-3的激活,从而抑制缺血再灌注后心肌细胞的凋亡,但具体机制仍有待于进一步研究。(本文来源于《南方医科大学》期刊2016-03-07）
心脏保存论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:离体心脏的保存时间和保存后心损伤程度是成功的心脏移植的一个关键问题,目前已开发出多种离体心脏保护液,以提高待移植心脏的质量,但均有各种缺点。本研究拟以新合成的线粒体复合体Ⅲ的半抑制剂3-NNMS为基础,配制出一种新型的心脏保护液,或者在已有的商品化心脏保护液中加入3-NNMS,以在保护期减缓线粒体的电子流速,有效降低线粒体ROS的产生量,从而避免细胞造成过大的氧化应激,降低线粒体损伤,保护细胞结构的稳定,防止代谢紊乱。通过对新型心脏保护液的研究,可以延长离体心脏保存时间,减轻被保存心脏的损伤程度,为今后的研究和临床应用提供理论和实验基础。方法:将49只成年雄性Wistar大鼠随机分为7组:1)对照组:不保存;2)Base组:不加3-NNMS的新型保护液;3)3-NNMS组:含有3-NNMS的新型保护液;4)HTK组:HTK solution;5)Cel组:Celsior solution;6)HN组:HTK solution+3-NNMS;7)LN组:Celsior solution+3-NNMS。每组均采用7只实验动物。构建心脏离体再灌注模型,具体方法是:大鼠麻醉取心后,将心脏固定于Langendorff灌流装置上,常温(37℃)灌注15分钟,心跳稳定后,分别以六种不同的保护液进行心脏停博,并将心脏置于不同保护液中4℃静置保存8小时;之后取出心脏重新固定于Langendorff灌流装置上,再灌注60分钟,再灌注期间采用ADINSTRUMENTS小动物压力容积测定系统实时监测心脏血流动力学变化,灌注结束后提取心肌线粒体进行线粒体力能学指标检测,评价线粒体功能;通过分析血流动力学、心肌损伤标志物(c Tn-T、CK-MB、LDH)、HE染色、MPO免疫组化、MDA等指标,评价心脏功能及心脏损伤程度;通过细胞毒性实验、细胞呼吸抑制实验验证3-NNMS的细胞毒性。结果:在心脏长时间低温静置保存过程中,3-NNMS新型心脏保护液相比HTK和Celsior保护液显着提高了心肌线粒体膜电位水平(7.62±2.99 vs 2.99±1.52,7.62±2.99 vs 3.58±1.86,p<0.05),且将3-NNMS加入到Celsior中可提高ATPase活力;在心脏收缩功能上3-NNMS新型保护液具备与HTK和Celsior同等效力的保存效果;3-NNMS组和HN组灌流液上清中心肌酶水平显着下降,将3-NNMS加入Celsior中可显着提高心肌组织水平c Tn-T和CK-MB浓度,表明3-NNMS可有效减轻心肌损伤;将3-NNMS加入HTK中,HN组心肌组织ROS水平显着下降。细胞毒性实验和细胞呼吸测定结果证实,在不同浓度条件下3-NNMS均未影响细胞活性,不会导致细胞明显死亡,且将3-NNMS浓度提高到100μg/ml时,其对H9C2细胞呼吸抑制效率达到50%。结论:3-NNMS可有效提高线粒体膜电位水平,维持线粒体正常功能,并可降低较长时间下离体保存的大鼠心肌损伤发生及氧化水平。将3-NNMS应用于HTK保护液和Celsior保护液中,均可以在不同水平提高心肌保护效果;细胞实验证明,在各种浓度水平3-NNMS对H9C2细胞均无细胞毒性作用。因此,3-NNMS可能作为一种安全有效的线粒体抑制剂应用于临床心脏保护中,并有望有效延长心脏离体保存时间。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
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