导读:本文包含了通用转移载体论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:山羊痘病毒,转移载体,重组,tk基因
通用转移载体论文文献综述
李继东,才学鹏[1]（2016）在《重组山羊痘病毒通用转移载体的构建》一文中研究指出为了便于山羊痘病毒(goat pox virus,GPV)活载体疫苗的研究,本试验拟构建能够用于GPV重组的通用转移载体。用DNA合成和PCR方法构建含有启动子p7.5和p11的质粒pTKpp,以绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)为报告基因,构建含有p7.5/p11-GFP表达盒的重组质粒pTKpp-GFP和通用转移质粒pTKpgigp,转染已感染GPV的羔羊睾丸(lamb testis,LT)细胞,观察GFP的表达情况;同时在pTKpgigp中插入外源基因FMDVVP1,构建重组转移质粒pTKpgigp-VP1,与GPV共转染LT细胞,产生并筛选重组GPV,验证外源基因的表达情况。结果显示,重组质粒中的启动子p7.5和p11能够启动GFP的表达;以重组转移质粒pTKpgigp-VP1进行的GPV重组成功获得了rGPV。最终证明通用转移载体pTKpgigp构建成功,能够用于重组GPV的相关研究。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2016年12期）
黄红亮,何玲,任常宝,谢小雨,佘峥[2]（2016）在《独立表达双基因的伪狂犬病毒通用转移载体的构建》一文中研究指出为了构建能同时独立表达双基因的重组伪狂犬病毒通用转移载体,试验采用前期构建的p UC19-g E/HEK为骨架,将设计合成的独立表达双基因的表达盒(p CMV+MCS1+p CMV+MCS2+BGH p A)克隆至其XbaⅠ位点,获得通用转移载体pg E-CMV2,以多克隆位点限制性内切酶单酶切,并将EGFP基因克隆至MCS1的SpeⅠ/PstⅠ位点、DsRed基因克隆至MCS2的KpnⅠ/XhoⅠ位点,转化BHK-21细胞同时观察荧光。结果表明:多克隆位点限制性内切酶单酶切pg E-CMV2呈现单一条带,EGFP和DsRed均呈现目标荧光,且将两种荧光蛋白分别克隆至同一分子的MCS1与MCS2,两种荧光蛋白均能有效表达。说明pg E-CMV2构建正确,且能独立有效表达双基因,可用于实现将两个或多个外源基因一次重组入PRV基因组中,实现"一针多防"。(本文来源于《黑龙江畜牧兽医》期刊2016年19期）
韩静芳,陈瑞爱,邵定勇,唐满华,梁桂益[3]（2009）在《伪狂犬病毒TK基因缺失通用转移载体的构建及初步应用》一文中研究指出以伪狂犬病毒为载体表达其他病原体抗原蛋白是伪狂犬病疫苗研究的一个重要方向。根据已发表的伪狂犬病毒(PRV)Ra株TK基因序列设计2对引物,用PCR方法得到同源左右臂,克隆入PUC19载体中。利用平末端连接的方法将绿色荧光蛋白(EGFP)的基因表达盒插入到缺失位点,并在下游引入1个多克隆位点,构建缺失通用转移载体PUC19TK-EGFP。用脂质体转染试剂盒将PUC19TK-EGFP和PRV-Ra株的基因组共转染BHK细胞,以EGFP为标记基因,用噬斑法得到纯化的重组病毒,命名为TK/EGFP,为研制以伪狂犬病毒为载体的二价或多价基因工程疫苗奠定了物质基础。(本文来源于《现代农业科技》期刊2009年15期）
邵长春,张强,吴国华,颜新敏,李健[4]（2009）在《表达小反刍兽疫病毒H基因的山羊痘病毒通用转移载体的构建及鉴定》一文中研究指出[目的]研制小反刍兽疫羊痘活载体疫苗。[方法]利用PCR技术扩增小反刍兽疫病毒H基因,克隆到pGEM-Teasy载体,NheⅠ和HindⅢ双酶切重组质粒,将目的片段插入到真核表达载体pEGFP-N1-P7.5中,得到重组载体pEGFP-N1-P7.5-H,重组载体HindⅢ、NheⅠ双酶切片段EGFP-P7.5-H平末端连接到KpnⅠ酶切后的载体pUC119-TK中,得到通用转移载体pUC119-TK-EGFP-P7.5-H。[结果]经酶切鉴定及PCR扩增检测,表明构建栽体正确。pUC119-TK-EGFP-P7.5-H转染羊痘病毒感染的BHK21细胞,48 h后报告基因表达。[结论]该研究为研制小反刍兽疫基因工程活载体疫苗奠定基础。(本文来源于《安徽农业科学》期刊2009年20期）
邵长春,张强,吴国华,颜新敏,李健[5]（2009）在《表达小反刍兽疫病毒H基因的山羊痘病毒通用转移载体的构建及鉴定(英文)》一文中研究指出[Objective] This study was to develop a live vector vaccine of goat pox virus of Peste des petits ruminants(PPR). [Method] Using PCR amplification technique, PPR H gene was obtained, then ligated into pGEM-T easy vector; the recombinants were digested by Nhe Ⅰ and Hind Ⅲ, and ligated into pEGFP-N1-P7.5, yielding the recombinant vector pEGFP-N1-P7.5-H; next the expression cassette EGFP-N1-P7.5-H was first released from recombinant vector pEGFP-N1-P7.5-H by double digestion of Hind Ⅲ and Nhe Ⅰ and ligated into pUC119-TK that was digested by Kpn Ⅰ, yielding the transfer vector pUC119-TK-EGFP-P7.5-H. [Result] Identification and double enzyme digestion showed that the transfer vector pUC119-TK-EGFP-P7.5-H was correctly constructed. From the transfer vector transfected BHK-21 cells which infected GTPV AV41, specific fluorescence was observed at 48th h of transfection. [Conclusion] The construction of goat poxvirus live vector laid a foundation for the live vector vaccine of PPR vaccine.(本文来源于《Agricultural Science & Technology》期刊2009年03期）
郭巍,曲娟娟,相文华,李一经[6]（2008）在《通用山羊痘病毒TK基因缺失转移载体的构建》一文中研究指出用PCR方法克隆了山羊痘病毒疫苗株(GTPV-TY)的TK基因,根据TK基因结构,设计了2对引物分别扩增得到与TK基因部分相邻的长度约1 kb的同源重组臂序列,分别插入到pGEM-T easy载体,通过SmaⅠ位点重新连接,并在此位点插入CMV启动子、多克隆位点、BGH polyA信号以及LacZ基因,构建了通用山羊痘病毒TK基因缺失转移载体pdTK。此转移载体为改造GTPV-TY株以及开发二价或多价基因工程疫苗奠定了基础。(本文来源于《吉林农业大学学报》期刊2008年05期）
郭巍,曲娟娟,相文华,李一经[7]（2008）在《通用山羊痘病毒P32基因缺失转移载体的构建》一文中研究指出为了构建GTPVP32基因缺失的通用GTPV转移载体,试验根据山羊痘病毒疫苗株(GTPV-TY)的P32基因结构设计了2对引物,分别扩增得到与P32基因部分相邻的长度约为1kb的同源重组臂序列并插入到pGEM-Teasy载体上,通过SmaⅠ位点重新连接,并在此位点插入CMV启动子、多克隆位点、BGHpolyA信号以及LacZ基因。结果表明,试验成功构建了通用山羊痘病毒P32基因缺失转移载体pdP32,此转移载体为改造GTPV-TY株以及开发二价或多价基因工程疫苗提供了有力工具。(本文来源于《黑龙江畜牧兽医》期刊2008年08期）
王艳丽,李俊辉,姜永萍,夏俊,裴磊[8]（2008）在《以GPT和GFP为双重筛选标记的禽痘病毒通用转移载体的构建及鉴定》一文中研究指出禽痘病毒作为活载体已经得到广泛的应用,转移栽体的构建是重组禽痘病毒构建的重要环节。本研究构建了禽痘病毒通用转移载体pSY681-gfp-gpt,该载体含有gfp和gpt两个报告基因及背对的痘苗病毒晚期启动子P11和早期启动子P7.5,P11启动gfp和gpt两个基因,P7.5用于启动外源基因,在早期启动子P7.5下游引入NotⅠ和AflⅡ两个酶切位点,用于外源基因的插入。为检测禽痘病毒通用转移载体pSY681-gfp-gpt的效果,将H9亚型禽流感病毒A/Chicken/Shanghai/10/01(H9N2)的HA基因插入到此载体构建了转移载体pSY681-gfp-gpt-HA,应用TransIT-LT1 Transfection Reagent将此转移载体转染已感染禽痘病毒S-FPV-017的鸡胚成纤维细胞,利用gfp和gpt同时进行双重筛选、数轮蚀斑纯化构建了重组病毒rFPV-gpt-gfp-HA9,通过PCR、Western blot鉴定,结果证明,获得了能稳定表达AIV HA蛋白的重组禽痘病毒r-FPV-gpt-gfp-HA9。(本文来源于《中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会论文集》期刊2008-07-01）
刘召明,张丽萍,王秀丽,赵冬凤,刘新文[9]（2008）在《重组马立克病毒通用转移载体的构建及初步应用》一文中研究指出本实验以独立启动子控制的增强型绿色荧光基因(GFP)作为报告基因,同时将CMV启动子及其多克隆位点与之连接,构成外源基因表达盒,插入到马立克病毒(MDV)复制非必需区基因(短独特区US2等)构成的同源臂中,构建成重组马立克病毒的通用载体。鉴定正确后,将转移载体与提取的MDV基因组共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),同源重组获得具有感染性的重组病毒,待病毒蚀斑出现后,荧光显微镜下观察,可见到明显的绿色荧光病毒蚀斑,经叁次筛选,初步分离到重组病毒。结果表明,转移载体与MDV基因组共转染可获得感染性病毒,US2基因可作为重组病毒构建中的外源基因插入位点,证实通用转移载体的构建是可行的,为重组马立克病毒新型疫苗的研究奠定物质基础。(本文来源于《中国动物检疫》期刊2008年01期）
鞠厚斌,张强,郑海学,施程洪,韩若婵[10]（2007）在《山羊痘病毒通用转移载体的构建及鉴定》一文中研究指出转移载体的构建是重组羊痘病毒构建的重要环节,在分析羊痘病毒基因组的基础上,以TK基因为插入靶序列,经PCR、酶切鉴定,获得了带有EcoRⅠ、BamHⅠ酶切位点的TK基因片段。将此片段与经相同酶切的pUC119载体连接,构建转移载体pUC119-TK,并且以此为基础构建表达绿色荧光蛋白山羊痘病毒转移载体pTK-P7.5-GFP。将pTK-P7.5-GFP转染羊痘病毒感染的BHK21细胞,48 h后报告基因得到表达,这为羊痘病毒载体系统的进一步开发奠定了基础。(本文来源于《中国兽药杂志》期刊2007年02期）
通用转移载体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为了构建能同时独立表达双基因的重组伪狂犬病毒通用转移载体,试验采用前期构建的p UC19-g E/HEK为骨架,将设计合成的独立表达双基因的表达盒(p CMV+MCS1+p CMV+MCS2+BGH p A)克隆至其XbaⅠ位点,获得通用转移载体pg E-CMV2,以多克隆位点限制性内切酶单酶切,并将EGFP基因克隆至MCS1的SpeⅠ/PstⅠ位点、DsRed基因克隆至MCS2的KpnⅠ/XhoⅠ位点,转化BHK-21细胞同时观察荧光。结果表明:多克隆位点限制性内切酶单酶切pg E-CMV2呈现单一条带,EGFP和DsRed均呈现目标荧光,且将两种荧光蛋白分别克隆至同一分子的MCS1与MCS2,两种荧光蛋白均能有效表达。说明pg E-CMV2构建正确,且能独立有效表达双基因,可用于实现将两个或多个外源基因一次重组入PRV基因组中,实现"一针多防"。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
通用转移载体论文参考文献
[1].李继东,才学鹏.重组山羊痘病毒通用转移载体的构建[J].中国兽医学报.2016
[2].黄红亮,何玲,任常宝,谢小雨,佘峥.独立表达双基因的伪狂犬病毒通用转移载体的构建[J].黑龙江畜牧兽医.2016
[3].韩静芳,陈瑞爱,邵定勇,唐满华,梁桂益.伪狂犬病毒TK基因缺失通用转移载体的构建及初步应用[J].现代农业科技.2009
[4].邵长春,张强,吴国华,颜新敏,李健.表达小反刍兽疫病毒H基因的山羊痘病毒通用转移载体的构建及鉴定[J].安徽农业科学.2009
[5].邵长春,张强,吴国华,颜新敏,李健.表达小反刍兽疫病毒H基因的山羊痘病毒通用转移载体的构建及鉴定(英文)[J].AgriculturalScience&Technology.2009
[6].郭巍,曲娟娟,相文华,李一经.通用山羊痘病毒TK基因缺失转移载体的构建[J].吉林农业大学学报.2008
[7].郭巍,曲娟娟,相文华,李一经.通用山羊痘病毒P32基因缺失转移载体的构建[J].黑龙江畜牧兽医.2008
[8].王艳丽,李俊辉,姜永萍,夏俊,裴磊.以GPT和GFP为双重筛选标记的禽痘病毒通用转移载体的构建及鉴定[C].中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会论文集.2008
[9].刘召明,张丽萍,王秀丽,赵冬凤,刘新文.重组马立克病毒通用转移载体的构建及初步应用[J].中国动物检疫.2008
[10].鞠厚斌,张强,郑海学,施程洪,韩若婵.山羊痘病毒通用转移载体的构建及鉴定[J].中国兽药杂志.2007