导读:本文包含了泛素蛋白酶体途径论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:蛋白酶,途径,抑制剂,氯化铝,溶酶体,蛋白,磷酸化。
泛素蛋白酶体途径论文文献综述
董慧琳,聂红明,梅昭荷,赵彬彬,姜煜资[1]（2019）在《泛素蛋白酶体途径的应用研究进展》一文中研究指出泛素蛋白酶体途径(UPP)是一种依赖ATP进行的,具有高度特异性和选择性的蛋白质降解途径,其在真核细胞中广泛存在,在细胞周期调控、信号转导、抗原提呈、免疫应答等生物学功能中发挥着重要作用。目前已知,该途径与神经退行性变、病毒感染、肿瘤、心血管等方面都有着密切联系,一旦UPP异常,影响α-synuclein、Parkin蛋白功能,就会导致帕金森病的发生。SCF蛋白复合物中Skp2、E3泛素连接酶c-Cbl、泛素结合酶E2C等均与肿瘤的发生发展有关。HCMV病毒等多种病毒都会攻击或利用UPP来逃避免疫攻击。此外,还有许多疾病的发生也均有报道与UPP有关,但目前我们对该体系知之甚少,对此的相关研究也远远不够,还需更多探索。(本文来源于《中国医药导报》期刊2019年29期）
李云海[2]（2019）在《PSMD2通过调控p21和p27的泛素蛋白酶体降解途径影响乳腺癌细胞周期进程》一文中研究指出第一部分蛋白酶体亚基PSMD2在乳腺癌中的表达情况目的:分析泛素蛋白酶体系统相关基因在乳腺癌中的差异表达谱,筛选出具有显着表达差异的目标基因进行验证,并分析其与乳腺癌临床病理特征相关性及预后价值。方法:利用TCGA数据库,分析泛素蛋白酶体系统797个相关基因在乳腺癌中的表达差异。筛选出具有显着表达差异的基因PSMD2进行RT-qPCR和IHC验证。利用卡方检验分析PSMD2的表达与乳腺癌患者临床病理特征之间的关系。利用生存曲线和Cox比例风险模型分析PSMD2与乳腺癌预后的相关性。结果:差异基因分析发现,相比于正常组织,在乳腺癌组织中有208个基因表达显着上调,239个基因表达下调。在所有异常表达的26S蛋白酶体核心成分中,PSMD2在癌组织中的表达水平最高。利用RT-qPCR,在32对乳腺癌和正常组织中证实PSMD2的mRNA水平在乳腺癌组织中的表达显着高于正常组织。利用IHC证实,PSMD2的蛋白表达水平在癌组织中的表达同样要明显高于正常组织。高表达PSMD2与患者年龄(p=0.031)、肿瘤大小(p=0.006)、腋窝淋巴结转移(p=0.023)和TNM分期(p=0.016)密切相关。PSMD2高表达的患者总体生存期OS和无远处转移生存期DMFS更差,但PSMD2与无复发生存期RFS无明显相关性。多因素COX回归分析发现,PSMD2可作为OS(HR=3.15,95%CI:1.08-9.23,p=0.036)和DMFS(HR=3.16,95%CI:1.29-7.72,p=0.012)的独立预后因素。结论:相比于正常组织,PSMD2在乳腺癌组织中的表达显着上调。PSMD2的表达与乳腺癌的预后密切相关,并可作为乳腺癌的独立预后因素。第二部分PSMD2对乳腺癌细胞功能的影响及初步机制探讨目的:研究PSMD2在乳腺癌中的生物学功能,并初步探讨PSMD2发挥生物学功能的相关机制。方法:利用GSEA基因富集分析,预测PSMD2在乳腺癌中的潜在的生物学功能。通过siRNA干扰技术,利用CCK-8、克隆形成、裸鼠成瘤等实验手段,检测PSMD2对乳腺癌细胞增殖、肿瘤生长的影响;利用流式细胞术检测PSMD2对乳腺癌细胞周期和凋亡的影响。应用western blot检测在干扰PSMD2条件下,细胞周期相关蛋白CDK4、CDK6、cyclin D1、E2F1、Rb、p Rb、p21、p27和凋亡相关蛋白caspase-7、cleaved caspase-7、cleaved caspase-9的变化。利用免疫荧光检测干扰PSMD2条件下p21和p27定位改变。在干扰PSMD2的同时,敲低p21和/或p27,通过流式分析p21和p27在PSMD2细胞周期调控中的作用。结果:GSEA分析发现,PSMD2与细胞增殖、细胞周期和凋亡密切相关。细胞功能试验证实干扰PSMD2后,乳腺癌细胞在增殖水平受到了明显的抑制。裸鼠成瘤实验发现,敲低PSMD2可显着抑制肿瘤生长。此外,干扰PSMD2可导致乳腺癌细胞G0/G1期的比例显着增加,S期的细胞比例显着减少。Western blot结果显示,敲低PSMD2之后,CDK4、CDK6、cyclin D1、E2F1和p Rb均出现显着下调,而p21和p27的表达则显着升高。干扰PSMD2还可促进乳腺癌细胞的凋亡,并伴随凋亡相关蛋白cleaved caspase-7和cleaved caspase-9的上调。免疫荧光和胞核胞浆蛋白分离实验发现上调的p21和p27主要位于细胞核内。干扰p21和/或p27,可明显逆转PSMD2敲低引起的细胞周期阻滞。结论:干扰PSMD2可抑制乳腺癌细胞增殖、促进凋亡、抑制肿瘤生长,并导致乳腺癌细胞G0/G1期阻滞。在一定程度上,PSMD2是通过p21和/或p27影响的乳腺癌细胞周期进程。第叁部分PSMD2调控p21和p27表达的分子机制研究目的:深入研究PSMD2调控p21和p27表达的分子机理,阐明PSMD2影响乳腺癌细胞周期进程的具体机制。方法:利用蛋白酶体活性检测试剂盒检测PSMD2敲低对蛋白酶体活性的影响。Western blot分析PSMD2敲低后p21和p27半衰期的改变。应用免疫沉淀实验分析PSMD2对泛素化形式的p21和p27表达水平的影响。利用乳腺癌病例石蜡样本连续切片,研究PSMD2与p21和p27在组织中蛋白表的相关性。免疫共沉淀实验检测PSMD2与p21和p27的蛋白质结合。免疫荧光分析PSMD2与p21和p27在乳腺癌细胞中的共定位。应用免疫共沉淀和GST pull-down实验,验证USP14与PSMD2结合情况。siRNA干扰USP14之后,western blot检测p21和p27表达以及泛素化水平的变化。结果:PSMD2与p21和p27在m RNA水平无明显相关性。敲低PSMD2,可导致蛋白酶体的活性明显下降,总的泛素化蛋白水平上调。敲低PSMD2可显着延长p21和p27的半衰期,并且p21和p27的泛素化水平也出现了明显的升高。50例乳腺癌病例石蜡样本连续切片免疫组化结果显示,PSMD2与p21和p27在蛋白表达水平呈显着负相关性。共转染和免疫共沉淀实验证实PSMD2可与p21和p27结合。共定位分析发现PSMD2与p21和p27主要共定位于细胞核。免疫共沉淀和GST pull-down实验证实USP14可与PSMD2结合。敲低USP14后p21和p27的蛋白水平明显升高,但对PSMD2并无影响。免疫沉淀实验发现,p21和p27的泛素化水平也出现明显升高。结论:PSMD2可与p21和p27结合。USP14很可能参与了PSMD2介导的p21和p27降解。(本文来源于《重庆医科大学》期刊2019-05-01）
张琳婧[3]（2019）在《基于泛素蛋白酶体途径研究牵正散合大补阴丸对体外帕金森模型的影响》一文中研究指出目的:用蛋白酶体抑制剂(Proteasome inhibitor,PSI)诱导PC12细胞,建立体外大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞(pheochromocy-toma cells,PC12)帕金森病模型,以细胞增殖周期、凋亡、SOD活性和MDA水平以及泛素蛋白酶体途径为研究切入点,探讨牵正散合大补阴丸对细胞增殖周期、凋亡、SOD活性和MDA水平以及泛素蛋白酶体途径中相关因子TBP1-19、PA28α在蛋白表达水平的影响,从细胞和分子水平上明确牵正散合大补阴丸对PC12细胞的影响,从而确定牵正散合大补阴丸对帕金森(颤证)的作用。方法:利用MTT法检测牵正散水煎剂及大补阴丸水煎剂对PC12细胞的细胞毒性作用;采用DAPI染色及伊红染色相结合的方法,利用倒置荧光显微镜观察确定PSI诱导PC12细胞形成的帕金森病细胞模型的合适剂量;利用HE染色观察PSI诱导PC12细胞的体外帕金森病模型的嗜酸性小体;利用MTT法确定牵正散水煎剂及大补阴丸水煎剂对PSI诱导PC12细胞的体外帕金森病模型增殖的影响;采用流式细胞术检测牵正散合大补阴丸水煎剂干预48h时PSI诱导的PC12细胞模型周期变化情况以及细胞死亡情况;Annexin V/FITC流式细胞分析法检测细胞凋亡率;采用SOD、MDA检测法测定牵正散合大补阴丸水煎剂干预48h对PSI诱导的PC12细胞模型的细胞内SOD值与MDA值的影响;利用Western Blot技术测定牵正散合大补阴丸水煎剂在有无PSI诱导时时对细胞内相关因子TBP1-19、PA28α蛋白表达的影响。结果:MTT结果显示,不同浓度的牵正散、大补阴丸对细胞增殖有不同的影响:作用细胞48h时,牵正散水煎剂从6 mg/ml浓度开始显示出对细胞增殖的抑制作用,12及24mg/ml浓度的抑制率分别为61%及91%;大补阴丸水煎剂从0.125mg/ml浓度开始显示出对细胞增殖的抑制作用,0.25、0.5、1及2mg/ml浓度的抑制率分别为14%、9.8%、0.64%及26.46%;不同浓度的牵正散水煎剂及大补阴丸水煎剂均可改善PSI对PC12细胞增殖的抑制作用。用SPSS Statistics 20软件计算出药物相应IC0、IC25及IC50,牵正散水煎剂对大鼠嗜铬细胞瘤细胞PC12细胞作用48h的ICO为0.2 mg/ml、IC25为12.292 mg/ml、IC50为22.652 mg/ml,大补阴丸水煎剂对大鼠嗜铬细胞瘤细胞PC12细胞作用48h的IC0为0.814mg/ml、IC25为4.485mg/ml、IC50为9.004mg/ml;体外MTT法实验结果显示,12.292mg/ml(IC25)浓度的牵正散水煎剂与4.485mg/ml(IC25)浓度的大补阴丸水煎剂表现出的缓解PSI诱导的PC12细胞模型损伤较为显着。DAPI及伊红染色显示PSI在浓度为6μmol/L时,PC12细胞的形态改变及胞浆中嗜酸性小体表现最为典型;HE染色后,倒置显微镜下观察结果显示PSI作用下PC12形态及数量均发生改变。流式细胞术周期结果显示,PSI诱导大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞会影响细胞周期,但牵正散合大补阴丸未见明显改善细胞周期。Annexin V/FITC流式细胞分析法凋亡结果显示,PSI组细胞凋亡率升高,加药组不同程度降低凋亡率。SOD及MDA含量检测结果显示,PSI组与空白对照组相比大鼠嗜铬细胞瘤细胞PC12的SOD活力值下降,脂质过氧化产物MDA含量升高;加药处理后,各剂量组牵正散水煎剂与大补阴丸水煎剂与PSI组相比SOD活力升高、MDA含量下降。Western Blot结果显示,PSI诱导PC12细胞后,可增加TBP1-19、PA28α的蛋白表达量。加药处理后,与PSI组相比,各剂量组牵正散水煎剂可降低TBP1-19、PA28α蛋白表达量;各剂量组大补阴丸水煎剂能降低TBP1-19、PA28α蛋白的表达量。结论:PSI诱导的PC12体外帕金森模型具有科学意义;牵正散水煎剂、大补阴丸水煎剂及合方均可缓解PSI对PC12体外帕金森模型的抑制作用,可提高PSI诱导的PC12细胞存活率;其机制为调控PSI诱导的PC12细胞凋亡及细胞内SOD、MDA含量,此外,通过调节泛素蛋白酶体途径中相关因子TBP1-19、PA28α蛋白水平的表达来影响机体的代谢,从而发挥缓解帕金森(颤证)作用。(本文来源于《北京中医药大学》期刊2019-05-01）
林建平,王喜,刘午龙,陈艺敏,陈少清[4]（2018）在《督脉灸对衰老模型大鼠骨骼肌泛素蛋白酶体途径的影响》一文中研究指出目的探讨督脉灸改善骨骼肌衰老的泛素蛋白酶体途径机制。方法 Sprague-Dawley大鼠30只随机分为空白组、模型组和督脉灸组各10只。模型组和督脉灸组每天颈背部皮下注射D-半乳糖125 mg/kg,共6周,空白组皮下注射等量生理盐水。随后督脉灸组艾灸大椎穴至腰俞穴之间督脉,每天20 min,共20 d。剥离双侧竖脊肌,Western blotting检测泛素、肌环指蛋白1 (MuRF1)、肌萎缩F-box蛋白(MAFbx)蛋白水平。结果与空白组相比,模型组泛素、MuRF1、MAFbxD-半乳糖蛋白表达升高(P<0.05);与模型组相比,督脉灸组泛素、MuRF1和MAFbx蛋白表达下降(P<0.05)。结论督脉灸可通过对泛素蛋白酶体途径的调控,减少蛋白降解,延缓骨骼肌萎缩。(本文来源于《中国康复理论与实践》期刊2018年09期）
崔双杰[5]（2018）在《泛素—蛋白酶体途径调控铝致tau蛋白异常磷酸化的体外研究》一文中研究指出目的:1.阐明泛素-蛋白酶体途径和GSK-3β、PP2A是否参与调控叁氯化铝致tau蛋白异常磷酸化。2.研究泛素-蛋白酶体途径调控不同种属来源细胞叁氯化铝致tau蛋白异常磷酸化是否存在位点差异。方法:1.选择鼠源性N2a细胞株和人源性SH-SY5Y细胞株作为实验材料,用叁氯化铝进行染毒处理,铝离子浓度分别为0.5、1和2mmol/L,作为低剂量组、中剂量组、高剂量组,对照组不做任何处理。在细胞生长对数期进行染毒,染毒24h后光学显微镜下观察细胞形态,并利用cck-8检测细胞活力,收集细胞样品,提取细胞总蛋白,用蛋白免疫印迹法分别测定N2a和SH-SY5Y细胞的tau-5、pThr181、pThr231、pSer262、pSer396蛋白以及Hsp70和CHIP蛋白的表达量;ELISA法分别检测N2a和SH-SY5Y细胞泛素(Ub)、GSK-3β和PP2A的表达量。2.采用蛋白酶体抑制剂MG132处理N2a细胞和SH-SY5Y细胞6h,叁氯化铝染毒,实验分组为对照组、5μmol/L MG132组、1mmol/LAl~(3+)组、5μmol/L MG132+1mmol/LAl~(3+)组。用蛋白免疫印迹法分别测定N2a和SH-SY5Y细胞的tau-5、pThr181、pThr231、pSer262、pSer396蛋白以及Hsp70和CHIP蛋白的表达量;ELISA法分别检测N2a和SH-SY5Y细胞Ub的表达量。结果:1.光镜下观察显示:随着染毒剂量增加,两种细胞的细胞数量均逐渐减少,突触回缩,胞体变圆。细胞活力检测结果显示:(1)随着染铝浓度的增加,N2a细胞活力逐渐下降。中、高剂量组细胞活力明显低于对照组(P<0.05)。(2)随着染铝浓度的增加,SH-SY5Y细胞活力逐渐下降。中、高剂量组细胞活力明显低于对照组(P<0.05)。2.不同浓度叁氯化铝溶液处理两种细胞24h后,总tau和磷酸化tau蛋白检测结果显示:(1)随着染铝浓度的增加,N2a细胞tau-5(总tau)及pSer262和pSer396蛋白表达水平逐渐升高,中、高剂量组各蛋白表达水平明显高于对照组(P<0.01),高剂量组pThr231蛋白表达明显高于对照组(P<0.01);而N2a细胞pThr181蛋白表达水平随染铝浓度的增加变化不明显(P>0.05)。(2)随着染铝剂量的增加,SH-SY5Y细胞的tau-5(总tau)、pThr181、p Thr231和pSer396蛋白表达水平呈现升高趋势,中、高剂量组各蛋白表达水平明显高于对照组(P<0.05),而SH-SY5Y细胞pThr262蛋白表达水平随染铝浓度的增加变化不明显(P>0.05)。3.不同浓度叁氯化铝溶液处理两种细胞24h后,GSK-3β和PP2A检测结果显示:(1)随着染铝浓度的增加,N2a细胞GSK-3β蛋白表达变化不明显(P>0.05);而PP2A蛋白变化水平逐渐降低,高剂量组PP2A表达水平明显低于对照组(P<0.01)。(2)随着染铝浓度的增加,SH-SY5Y细胞GSK-3β蛋白表达水平逐渐升高,高剂量组GSK-3β表达水平明显高于对照组(P<0.01);而PP2A蛋白变化水平逐渐降低,中、高剂量组PP2A表达水平明显低于对照组(P<0.05),且高剂量组PP2A表达水平明显低于低剂量组(P<0.01)。4.不同浓度叁氯化铝溶液处理两种细胞24h后,泛素-蛋白酶体途径关键因子检测结果显示:(1)随着染铝浓度的增加,N2a细胞Ub、CHIP和Hsp70蛋白表达水平逐渐升高。中、高剂量组CHIP蛋白表达水平明显高于对照组(P<0.01),中、高剂量组Ub和Hsp70蛋白表达水平明显高于对照组(P<0.05)。(2)随着染铝浓度的增加,SH-SY5Y细胞Ub、CHIP和Hsp70蛋白表达水平逐渐升高。中、高剂量组各蛋白表达水平明显高于对照组(P<0.05);高剂量组CHIP和Hsp70蛋白表达水平高于低剂量组(P<0.05);中、高剂量组Ub蛋白表达水平明显高于低剂量组(P<0.01)。5.蛋白酶体的抑制剂MG132处理对数生长期的N2a细胞和SH-SY5Y细胞6h,然后再用1mmol/L Al~(3+)处理细胞24h,Western blot检测结果显示:(1)蛋白酶体抑制剂MG132处理N2a细胞后,5μmol/L MG132组tau-5、pThr231、pSer262和pSer396蛋白表达水平明显高于对照组(P<0.05),而pThr181蛋白表达水平与对照组相比变化不明显(P>0.05);5μmol/L MG132组Hsp70蛋白表达水平明显高于对照组(P<0.01),Ub、CHIP蛋白表达水平与对照组相比变化不明显(P>0.05)。5μmol/L MG132+1mmol/L Al~(3+)组tau-5、pSer262和pSer396蛋白表达水平明显高于1mmol/L Al~(3+)组(P<0.05),而pThr181、pThr231蛋白表达水平变化与1mmol/L Al~(3+)组相比,差异均没有统计学意义(P>0.05);5μmol/L MG132+1mmol/L Al~(3+)组Ub、CHIP和Hsp70蛋白表达水平明显高于1mmol/L Al~(3+)组(P<0.05)。(2)蛋白酶体抑制剂MG132处理SH-SY5Y细胞后,5μmol/L MG132组pThr181、pThr231和pSer396蛋白表达水平明显高于对照组(P<0.05),而tau-5、pSer262蛋白表达水平与对照组相比变化不明显(P>0.05);CHIP蛋白表达水平明显高于对照组(P<0.01),Ub、Hsp70蛋白表达水平明显高于对照组(P<0.05)。5μmol/L MG132+1mmol/L Al~(3+)组tau-5、pThr231和pSer396蛋白表达水平明显高于1mmol/L Al~(3+)组(P<0.05),而pThr181和pSer262蛋白表达水平变化与1mmol/L Al~(3+)组相比,差异均没有统计学意义(P>0.05);5μmol/L MG132+1mmol/L Al~(3+)组Ub、CHIP和Hsp70蛋白表达水平升高与1mmol/L Al~(3+)组相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:1、GSK-3β和PP2A参与叁氯化铝致tau蛋白异常磷酸化的合成过程。在N2a细胞以PP2A为主,而在SH-SY5Y细胞GSK-3β和PP2A均参与叁氯化铝致tau蛋白异常磷酸化的合成过程。2、泛素-蛋白酶体途径参与叁氯化铝致tau蛋白异常磷酸化的降解过程,但在不同种属来源的细胞存在位点特异性。在N2a细胞,UPP主要调控Ser262和Ser396磷酸化位点;而在SH-SY5Y细胞,UPP主要调控Thr231和Ser396磷酸化位点。该研究为后续的人群研究以及动物模型提供理论依据。(本文来源于《山西医科大学》期刊2018-06-02）
任国婧,师永红[6]（2018）在《泛素蛋白酶体途径和泛素羧基末端水解酶-3及其参与调节生物进程的研究进展》一文中研究指出泛素化是一种翻译后的编辑,泛素标记需要被降解的蛋白并被激活,使其被泛素蛋白酶体系统(UPS)识别并降解。去泛素化酶(Deubiquitinases,DUBs)可以逆转泛素蛋白酶体途径,并参与肿瘤的形成与演进。泛素羧基末端水解酶3(UCH-L3)是去泛素化酶家族中在泛素和泛素底物蛋白中发挥重要作用的蛋白水解酶,其参与肿瘤的侵袭、转移及凋亡调节等生物学活性的机制的研究目前尚不充分。本文对UPS和UCH-L3及其参与的生物学行为做如下阐述。(本文来源于《当代医学》期刊2018年16期）
高登辉[7]（2018）在《FBXO24诱导精氨酸甲基化转移酶6(PRMT6)经过泛素蛋白酶体途径降解的机制研究》一文中研究指出目的:精氨酸甲基化转移酶6(Protein arginine methyltransferase 6,PRMT6)甲基化组蛋白H3R2、H4R3和非组蛋白;PRMT6的主要功能有转录调控、RNA选择性剪切、DNA复制和细胞周期调控方面。本课题阐明了FBXO24通过结合在PRMT6的C-末端VGGRF序列来诱导其经泛素-蛋白酶体途径降解。方法和结果:构建稳定敲除PRMT6的H1299细胞株,克隆形成实验结果表明稳定株的克隆数远远少于对照组;细胞迁移与侵袭实验发现敲除PRMT6后H1299细胞的迁移侵袭能力大大降低。基于数据库发现PRMT6在癌组织中表达高于癌旁组织,生存曲线分析表明高表达PRMT6癌症患者明显低于低表达的存活率。Cycloheximide(CHX)是蛋白合成抑制剂,用CHX处理H1299细胞不同时间,PRMT6的蛋白水平不断降低,表明PMRT6存在降解。用泛素-蛋白酶体抑制剂MG132和CHX联合作用H1299不同时间,发现PRMT6的蛋白水平几乎无变化。免疫共沉淀实验结果显示PRMT6在细胞内存在多泛素化修饰,过表达HA-Ub导致PRMT6的降解;上述结果揭示PRMT6在H1299细胞内通过泛素-蛋白酶体途径降解。前期实验结果表明FBXO24能够诱导PRMT6的降解;免疫共沉淀实验发现PRMT6与FBXO24有相互作用;过表达FBXO24,发现PRMT6的蛋白水平与FBXO24表达量成反比;通过H1299细胞筛选出敲低FBXO24效果最佳的sh RNA质粒,然后转染到H1299细胞中,并用CHX处理,发现敲低FBXO24组的PRMT6蛋白水平明显高于对照组;H1299细胞中转染FBXO24,IP实验发现FBXO24可以增加PRMT6的泛素化;以上结果证明了FBXO24能够诱导PRMT6的降解。构建PRMT6的截短突变体,对转染细胞用MG132处理,分析泛素化位点为K360、K367、K369;构建PRMT6的K360、K367、K369点突变体,与FBXO24的共转染实验,发现PRMT6-K369几乎无降解;细胞中转染PRMT6点突变体,半衰期实验表明PRMT6-K369最稳定;这些结果揭示PRMT6的泛素化位点是K369;FBXO24结合在PRMT6的C末端;构建PRMT6的截短突变体,与FBXO24的免疫共沉淀实验表明,FBXO24与PRMT6的VGGRF序列结合。将PRMT6-K360、PRMT6-K367、PRMT6-K369转染到稳定敲除PRMT6的H1299细胞中,结果表明转染了PRMT6-K369的实验组的蛋白水平最高;PRMT6稳定敲除的H1299细胞中转染点突变体后检测细胞周期,结果表明PRMT6-K369组的G0/G1比例最低,并且S期比例最高;构建稳定表达FBXO24的H1299细胞株的PRMT6水平相对于空白细胞明显偏低;克隆形成实表明稳定胞株的克隆数相远低于对照组;细胞迁移和侵袭实验表明PRMT6的减少可以明显降低H1299细胞的迁移侵袭能力;以上结果证明了PRMT6的水平与H1299细胞的细胞周期、增殖、迁移、侵袭能力密切相关。结论:SCF-FBXO24与PRMT6的VGGRF序列结合诱导PRMT6在H1299细胞中通过泛素-蛋白酶体途径降解;PRMT6泛素化修饰位点位于K369残基;降低细胞内PRMT6的水平可以影响细胞周期导致细胞增殖抑、降低细胞迁移与侵袭能力。(本文来源于《暨南大学》期刊2018-04-01）
阮昕[8]（2018）在《乳源免疫调节肽通过泛素—蛋白酶体途径抑制卵巢癌耐药性及其机制研究》一文中研究指出目的:1.研究乳源免疫调节肽(PGPIPN)提高人卵巢癌细胞对化疗药物顺铂(cisplatin,DDP)的敏感性;2.研究PGPIPN与DDP联合用药使人卵巢癌细胞耐药性降低其可能的分子机制和信号通路。方法:1.培养人原代卵巢癌细胞和正常卵巢细胞,并用免疫荧光法鉴定细胞纯度;2.使用MTT法检测PGPIPN处理48 h对人正常卵巢细胞的影响;3.使用MTT法检测DDP处理48 h抑制人卵巢癌敏感细胞株(SKOV_3和COC1),耐药细胞株(SKOV_3/DDP和COC1/DDP)和原代卵巢癌细胞的半抑制浓度(IC50)和对细胞的抑制作用;4.使用MTT法检测PGPIPN联合DDP用药48 h对人卵巢癌细胞SKOV_3、SKOV_3/DDP、COC1、COC1/DDP和原代卵巢癌细胞的增殖抑制作用,并计算抑制率;5.使用RT-PCR法检测人卵巢癌细胞SKOV_3、SKOV_3/DDP、COC1、COC1/DDP和原代卵巢癌细胞在PGPIPN和DDP联合处理下,检测泛素-蛋白酶体途径(ubiquitin-proteasome pathway,UPP)的表达情况;6.Western blot法检测人卵巢癌细胞SKOV_3、SKOV_3/DDP、COC1、COC1/DDP和原代卵巢癌细胞在PGPIPN和DDP联合处理下,检测UPP的表达情况。结果:1.培养原代卵巢癌细胞和正常卵巢细胞,经免疫荧光鉴定纯度可达94%以上;2.MTT结果表明当PGPIPN为低浓度时,对人正常卵巢细胞的增殖活性没有特别显着的抑制效果;3.MTT结果表明DDP对人卵巢癌细胞SKOV_3、SKOV_3/DDP、COC1、COC1/DDP和原代卵巢癌细胞具有不同程度的抑制作用。与空白对照组相比,细胞增殖的抑制作用随着DDP浓度增大而增加,计算得出SKOV_3、SKOV_3/DDP、COC1、COC1/DDP以及原代卵巢癌细胞的48 h的平均IC50值为(3.759±0.790)μmol/L、(9.092±1.738)μmol/L、(4.997±0.437)μmol/L、(21.819±2.644)μmol/L、(17.266±7.454)μmol/L。4.MTT结果表明,IC50浓度的DDP联合低、中、高浓度PGPIPN作用于人卵巢癌细胞SKOV_3、SKOV_3/DDP、COC1、COC1/DDP和原代卵巢癌细胞,与对照组相比,联合组细胞增殖抑制率显着高于单独使用DDP组和PGPIPN组,细胞增殖的抑制作用也随着PGPIPN浓度的增大而增大,且人卵巢癌细胞耐药株联合用药组的抑制率变化大于敏感株。5.PCR数据可知,与空白对照组相比,加药后,UPP的相关基因SIAH、PSMA1的mRNA表达量增加,β-catenin的mRNA表达降低;与单独使用DDP组和PGPIPN组相比,随着PGPIPN浓度增大,联合用药组的SIAH、PSMA1的mRNA表达量有不同程度的增大,β-catenin的mRNA表达量降低。6.Western blot数据可知,与空白对照组相比,加药后,UPP的相关基因SIAH、PSMA1的蛋白表达量增加,β-catenin的蛋白表达量降低;与单独使用DDP组和PGPIPN组相比,随着PGPIPN浓度增大,联合用药组的SIAH、PSMA1的蛋白表达量有不同程度的增加,β-catenin的蛋白表达量降低。结论1.DDP可以抑制卵巢癌细胞的增殖,与PGPIPN联合使用后,增强了卵巢癌细胞对DDP的敏感度。低浓度PGPIPN对正常卵巢细胞没有明显抑制作用。2.联合用药后,SIAH、PSMA1的基因和蛋白表达量增加,β-catenin的基因和蛋白表达量降低,说明PGPIPN逆转卵巢癌细胞对顺铂的耐药性的可能与UPP有关。(本文来源于《安徽医科大学》期刊2018-03-01）
王洋,金一[9]（2018）在《泛素蛋白酶体途径及其在体外受精中的作用研究进展》一文中研究指出泛素蛋白酶体途径(ubiquitin proteasome pathway,UPP)是生物体内最主要的蛋白质降解途径,与多种疾病有关,在生物体内具有十分重要的作用,主要降解错误折迭的、多余的蛋白质。UPP是一个循环途径,其主要作用起始于泛素(ubiquitin,Ub)的激活,是受泛素激活酶(ubiquitin-activating enzyme,E1,酵母菌中是UbE1)、泛素结合酶(ubiquitin-conjugating enzyme,E2,UbE2)、泛素连接酶(ubiquitin-protein ligase,E3,UbE3)和去泛素化酶(deubiquitinating enzymes,DUBs)调控的级联过程,最终使被多聚泛素化(polyubiquitination,polyubiquitination,PolyUb)标记的蛋白底物在UPP的蛋白水解核心——26S蛋白酶体内被降解成寡肽,寡肽可以进入新的蛋白循环,Ub则由DUBs去除进入下一个UPP循环。UPP在海鞘类和一些哺乳类体外受精(in vitro fertilization,IVF)过程中具有十分重要的作用,能够参与精子获能和顶体反应(acrosomal reaction,AR),促进精子顶体胞吐,在精卵结合时降解透明带(zona pellucida,ZP)蛋白,辅助精子穿透卵母细胞ZP,促进精子与卵母细胞ZP的融合,从而促使IVF的成功。通过在IVF液中添加一些UPP相关的抗体或抑制剂能够抑制IVF过程中的多精入卵,提高IVF率。作者综述了UPP的主要组成成分及其对IVF的辅助作用及相关抗体的研究进展,以期为今后研究UPP循环在生物体内的作用机制、与生物体内各种疾病的关系、在IVF过程中的作用机制及抑制多精入卵等提供一定的理论依据。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2018年02期）
方方,陈恬,彭云滔,李和[10]（2017）在《枸杞多糖通过泛素蛋白酶体途径降解突变亨廷顿蛋白》一文中研究指出目的探讨枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharide,LBP)降解突变亨廷顿蛋白(mutant huntingtin,mHtt)的途径。方法在稳定表达mHtt 160Q的HEK293细胞中使用不同浓度LBP,CCK8法检测细胞活力,caspase-3活性酶标法检测caspase-3活性;使用荧光显微镜检测、Image Pro Plus 6.0分析LBP对HEK293-160Q细胞中mHtt的影响并同时使用RT-PCR法检测LBP是否影响其mRNA水平;使用LBP、MG132及氯喹,分组处理HEK293-160Q细胞,通过Western Blot法检测不同组细胞中mHtt的变化。结果 LBP能提高HEK293-160Q细胞活力,降低caspase-3活性;LBP能减少细胞中mHtt且不改变其mRNA;不同药物处理HEK293-160Q细胞后,发现与只使用LBP相比,同时使用LBP与MG132会显着降低mHtt的降解,而同时使用LBP与氯喹则对mHtt的降解没有影响。结论 LBP能通过泛素蛋白酶体途径降解mHtt,减轻mHtt所引起的细胞毒性继而提高细胞活力、抑制细胞凋亡。(本文来源于《中国临床解剖学杂志》期刊2017年06期）
泛素蛋白酶体途径论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
第一部分蛋白酶体亚基PSMD2在乳腺癌中的表达情况目的:分析泛素蛋白酶体系统相关基因在乳腺癌中的差异表达谱,筛选出具有显着表达差异的目标基因进行验证,并分析其与乳腺癌临床病理特征相关性及预后价值。方法:利用TCGA数据库,分析泛素蛋白酶体系统797个相关基因在乳腺癌中的表达差异。筛选出具有显着表达差异的基因PSMD2进行RT-qPCR和IHC验证。利用卡方检验分析PSMD2的表达与乳腺癌患者临床病理特征之间的关系。利用生存曲线和Cox比例风险模型分析PSMD2与乳腺癌预后的相关性。结果:差异基因分析发现,相比于正常组织,在乳腺癌组织中有208个基因表达显着上调,239个基因表达下调。在所有异常表达的26S蛋白酶体核心成分中,PSMD2在癌组织中的表达水平最高。利用RT-qPCR,在32对乳腺癌和正常组织中证实PSMD2的mRNA水平在乳腺癌组织中的表达显着高于正常组织。利用IHC证实,PSMD2的蛋白表达水平在癌组织中的表达同样要明显高于正常组织。高表达PSMD2与患者年龄(p=0.031)、肿瘤大小(p=0.006)、腋窝淋巴结转移(p=0.023)和TNM分期(p=0.016)密切相关。PSMD2高表达的患者总体生存期OS和无远处转移生存期DMFS更差,但PSMD2与无复发生存期RFS无明显相关性。多因素COX回归分析发现,PSMD2可作为OS(HR=3.15,95%CI:1.08-9.23,p=0.036)和DMFS(HR=3.16,95%CI:1.29-7.72,p=0.012)的独立预后因素。结论:相比于正常组织,PSMD2在乳腺癌组织中的表达显着上调。PSMD2的表达与乳腺癌的预后密切相关,并可作为乳腺癌的独立预后因素。第二部分PSMD2对乳腺癌细胞功能的影响及初步机制探讨目的:研究PSMD2在乳腺癌中的生物学功能,并初步探讨PSMD2发挥生物学功能的相关机制。方法:利用GSEA基因富集分析,预测PSMD2在乳腺癌中的潜在的生物学功能。通过siRNA干扰技术,利用CCK-8、克隆形成、裸鼠成瘤等实验手段,检测PSMD2对乳腺癌细胞增殖、肿瘤生长的影响;利用流式细胞术检测PSMD2对乳腺癌细胞周期和凋亡的影响。应用western blot检测在干扰PSMD2条件下,细胞周期相关蛋白CDK4、CDK6、cyclin D1、E2F1、Rb、p Rb、p21、p27和凋亡相关蛋白caspase-7、cleaved caspase-7、cleaved caspase-9的变化。利用免疫荧光检测干扰PSMD2条件下p21和p27定位改变。在干扰PSMD2的同时,敲低p21和/或p27,通过流式分析p21和p27在PSMD2细胞周期调控中的作用。结果:GSEA分析发现,PSMD2与细胞增殖、细胞周期和凋亡密切相关。细胞功能试验证实干扰PSMD2后,乳腺癌细胞在增殖水平受到了明显的抑制。裸鼠成瘤实验发现,敲低PSMD2可显着抑制肿瘤生长。此外,干扰PSMD2可导致乳腺癌细胞G0/G1期的比例显着增加,S期的细胞比例显着减少。Western blot结果显示,敲低PSMD2之后,CDK4、CDK6、cyclin D1、E2F1和p Rb均出现显着下调,而p21和p27的表达则显着升高。干扰PSMD2还可促进乳腺癌细胞的凋亡,并伴随凋亡相关蛋白cleaved caspase-7和cleaved caspase-9的上调。免疫荧光和胞核胞浆蛋白分离实验发现上调的p21和p27主要位于细胞核内。干扰p21和/或p27,可明显逆转PSMD2敲低引起的细胞周期阻滞。结论:干扰PSMD2可抑制乳腺癌细胞增殖、促进凋亡、抑制肿瘤生长,并导致乳腺癌细胞G0/G1期阻滞。在一定程度上,PSMD2是通过p21和/或p27影响的乳腺癌细胞周期进程。第叁部分PSMD2调控p21和p27表达的分子机制研究目的:深入研究PSMD2调控p21和p27表达的分子机理,阐明PSMD2影响乳腺癌细胞周期进程的具体机制。方法:利用蛋白酶体活性检测试剂盒检测PSMD2敲低对蛋白酶体活性的影响。Western blot分析PSMD2敲低后p21和p27半衰期的改变。应用免疫沉淀实验分析PSMD2对泛素化形式的p21和p27表达水平的影响。利用乳腺癌病例石蜡样本连续切片,研究PSMD2与p21和p27在组织中蛋白表的相关性。免疫共沉淀实验检测PSMD2与p21和p27的蛋白质结合。免疫荧光分析PSMD2与p21和p27在乳腺癌细胞中的共定位。应用免疫共沉淀和GST pull-down实验,验证USP14与PSMD2结合情况。siRNA干扰USP14之后,western blot检测p21和p27表达以及泛素化水平的变化。结果:PSMD2与p21和p27在m RNA水平无明显相关性。敲低PSMD2,可导致蛋白酶体的活性明显下降,总的泛素化蛋白水平上调。敲低PSMD2可显着延长p21和p27的半衰期,并且p21和p27的泛素化水平也出现了明显的升高。50例乳腺癌病例石蜡样本连续切片免疫组化结果显示,PSMD2与p21和p27在蛋白表达水平呈显着负相关性。共转染和免疫共沉淀实验证实PSMD2可与p21和p27结合。共定位分析发现PSMD2与p21和p27主要共定位于细胞核。免疫共沉淀和GST pull-down实验证实USP14可与PSMD2结合。敲低USP14后p21和p27的蛋白水平明显升高,但对PSMD2并无影响。免疫沉淀实验发现,p21和p27的泛素化水平也出现明显升高。结论:PSMD2可与p21和p27结合。USP14很可能参与了PSMD2介导的p21和p27降解。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
泛素蛋白酶体途径论文参考文献
[1].董慧琳,聂红明,梅昭荷,赵彬彬,姜煜资.泛素蛋白酶体途径的应用研究进展[J].中国医药导报.2019
[2].李云海.PSMD2通过调控p21和p27的泛素蛋白酶体降解途径影响乳腺癌细胞周期进程[D].重庆医科大学.2019
[3].张琳婧.基于泛素蛋白酶体途径研究牵正散合大补阴丸对体外帕金森模型的影响[D].北京中医药大学.2019
[4].林建平,王喜,刘午龙,陈艺敏,陈少清.督脉灸对衰老模型大鼠骨骼肌泛素蛋白酶体途径的影响[J].中国康复理论与实践.2018
[5].崔双杰.泛素—蛋白酶体途径调控铝致tau蛋白异常磷酸化的体外研究[D].山西医科大学.2018
[6].任国婧,师永红.泛素蛋白酶体途径和泛素羧基末端水解酶-3及其参与调节生物进程的研究进展[J].当代医学.2018
[7].高登辉.FBXO24诱导精氨酸甲基化转移酶6(PRMT6)经过泛素蛋白酶体途径降解的机制研究[D].暨南大学.2018
[8].阮昕.乳源免疫调节肽通过泛素—蛋白酶体途径抑制卵巢癌耐药性及其机制研究[D].安徽医科大学.2018
[9].王洋,金一.泛素蛋白酶体途径及其在体外受精中的作用研究进展[J].中国畜牧兽医.2018
[10].方方,陈恬,彭云滔,李和.枸杞多糖通过泛素蛋白酶体途径降解突变亨廷顿蛋白[J].中国临床解剖学杂志.2017
论文知识图
