导读:本文包含了异源启动子论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:启动子,碱性蛋白酶,异源表达,酶活力
异源启动子论文文献综述
史超硕,李登科,曹雪,袁航,张钰文[1]（2019）在《两个不同启动子及其组合对碱性蛋白酶AprE异源表达的影响》一文中研究指出背景:碱性蛋白酶(alkaline protease)是一种具有广泛用途的工业酶制剂,其发酵活力目前仍不能满足工业生产需要。目的:旨在通过优化启动子及其组合来提高Bacillus subtilis WB600中碱性蛋白酶AprE的产量。方法:以Bacillus subtilis WB600为出发菌株,成功构建了含有4种不同类型启动子(P1、P2、P-1-2、P-2-1)的碱性蛋白酶AprE表达菌株。结果:含不同启动子的4株重组菌均可成功表达碱性蛋白酶,发酵48h,含单一启动子P2的重组菌株表达碱性蛋白酶的活力为4 041U/ml,是P1的1. 23倍。双启动子重组菌B. subtilis WB600/P-2-1-aprE表达的酶活性最高,是双启动子P-1-2的1. 35倍,达到了6 125U/ml。结论:为工业化高产碱性蛋白酶提供了一种有效策略。(本文来源于《中国生物工程杂志》期刊2019年10期）
张勇,胡晓晴,李豆,刘雪梅[2]（2019）在《白桦BpSPL8启动子的克隆及异源过表达BpSPL8对拟南芥耐旱性的影响》一文中研究指出【目的】目前对植物SPL8的基因功能研究主要集中在开花和育性方面,而其在干旱胁迫响应中的作用却鲜有报道。本文克隆、分析了白桦BpSPL8启动子,并研究了BpSPL8基因在拟南芥中响应干旱胁迫的功能。【方法】通过PCR克隆技术得到了白桦BpSPL8启动子;利用PLACE和PlantCARE软件对BpSPL8启动子顺式作用元件进行了预测。构建了BpSPL8启动子驱动GUS(β-葡萄糖苷酸酶编码基因)的植物表达载体,并采用浸花法将其转化至拟南芥中;继而利用GUS染色分析了BpSPL8启动子的组织表达模式;同时对BpSPL8在PEG处理下的表达水平进行了qRT-PCR分析。最后,以过表达BpSPL8拟南芥为材料来探究BpSPL8在干旱胁迫下的生物学功能。【结果】启动子元件分析显示,BpSPL8启动子中含有组织特异表达、光响应、激素响应及多个胁迫响应元件。GUS染色结果表明,BpSPL8启动子可在拟南芥的下胚轴、叶片、叶柄、根和花序中启动GUS基因表达。BpSPL8基因在PEG处理下的野生型白桦的根和叶片中均呈现先上调后下调的表达趋势。干旱胁迫下,过表达BpSPL8拟南芥的存活率和脯氨酸含量均显着低于野生型,丙二醛含量显着高于野生型;两个已知的抗逆基因DR29B和P5CS1在干旱处理后的野生型和转基因拟南芥中均上调表达;但在转基因拟南芥中呈现出延迟上调的表达模式。【结论】异源过表达白桦BpSPL8能够降低拟南芥的耐旱性,并在干旱胁迫下影响抗性基因DR29B和P5CS1的表达模式。(本文来源于《北京林业大学学报》期刊2019年08期）
谢芝玲,陈汉娜,钟林,徐佳莹,李演[3]（2019）在《叁种组成型启动子调控的鼠李糖脂基因在防御假单胞菌中的异源表达及活性研究》一文中研究指出本研究利用Red/ET DNA重组技术对实验室已有的含鼠李糖基转移酶基因RhlAB的分泌表达载体pBBR1-genta-RhlAB进行修饰,将3种不同强度组成型启动子(P_(apra)、P_(tac)和P_(rhaB))成功替换了RhlAB基因在铜绿假单胞菌中的原始启动子,成功获得了表达载体pBBR1-genta-P_(apra)-RhlAB,pBBR1-kan-P_(tac)-RhlAB和pBBR1-kanP_(rhaB)-RhlAB,并将这些表达载体分别在防御假单胞菌Pf-5中异源表达,通过LB培养基发酵42 h后,Pf-5/pBBR1-genta-RhlAB的鼠李糖脂产量为17. 56 mg/L,而Pf-5/pBBR1-genta-P_(apra)-RhlAB,Pf-5/pBBR1-kan-P_(tac)-RhlAB和Pf-5/pBBR1-kan-P_(rhaB)-RhlAB分别是11. 135 mg/L,441. 135 mg/L,557. 764 mg/L,启动子优化后产量分别是原始启动子的0. 63,25. 12和31. 76倍。对发酵产物进行高效液相色谱-质谱联用技术分析,共检出相对含量变化的4类质核比不同的鼠李糖脂同系物。并通过实时荧光定量PCR检测RhlAB基因的表达量,发现启动子替换为P_(tac)和P_(rhaB)后RhlAB基因表达量分别是原始启动子的2. 16和2. 77倍。本研究初步实现了RhlAB基因在Pf-5中的表达,发现组成型启动子P_(tac)和P_(rhaB)比RhlAB的原始启动子表达效率更高,可为异源合成鼠李糖脂提供重要参考。(本文来源于《激光生物学报》期刊2019年03期）
崔潇文[4]（2018）在《启动子串联及关键基因过表达对异源表达菌株中埃博霉素产量影响研究》一文中研究指出粘细菌是具有卓越次级代谢产物合成能力的革兰氏阴性细菌,被认为是开发合成新药物重要来源。纤维堆囊菌(Sorangium cellulosum)属于堆囊菌亚目,它可以将自然界中的纤维素作为碳源来满足自身的生长需求。由于其可以产生多种具有生物活性的次级代谢产物,因此纤维堆囊菌成为药用微生物的研究热点,其中埃博霉素就是由纤维堆囊菌产生的一种具有抗肿瘤活性且具有细胞毒性的大环内酯类化合物,与紫杉醇具有相似的抗肿瘤机制。但纤维堆囊菌本身代时长、遗传背景不清晰、操作手段不成熟,不利于进一步的基因改造。黄色粘球菌与纤维堆囊菌具有相似的遗传背景且基因操作手段比较成熟,因此,将次级代谢基因簇进行异源表达成为解决这些问题更佳的方法。本实验室前期将埃博霉素基因簇及其上下游序列随机插入到在黄色粘球菌Mxanthus DZ2中,得到的异源表达ZE系列菌株,但获得的最高产量仅为1mg/L,与本源菌相差甚远无法满足工业生产需要。因此,本论文尝试采用基因工程的方法对异源表达菌株进行改造。截至目前,埃坡霉素启动子改造的报道较少,对于如何选择和设计有效的启动子以改善埃博霉素生产的研究仍然缺乏。首先,根据实验室前期对埃博霉素基因簇启动子进行的预测及解析结果,构建了 1-3个核心区(EP及SP)启动子簇,并以GFP为报告基因检测了启动子簇活性,分析比较了不同启动子核心区串联个数对启动子活性的影响。结果显示,随着启动子串联个数的增加,无论是EP启动子簇还是SP启动子簇,其活性均呈现上升趋势。之后将上述构建的启动子簇插入到异源表达菌株ZE9、ZE10及KE17中的埃博霉素基因簇前端,在原始启动子上进行串联重复,以检测该方法对黄色粘球菌异源表达菌株中埃博霉素产生的影响。其中9-1SP、9-1EP和10-3SP叁株菌的埃博霉素产量分别增加了 13%、72%和113%。其中以10-3SP产量最高,高达20 mg/L 左右。此外,底物供应也可能是限制埃博霉素生物合成的关键点。通过过表达酯酰辅酶A合成酶基因(ACS)和S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因(SAMs),除菌株状态发生变化的10-3SP-19-ACS外,过表达菌株中埃博霉素产量与对应过表达酶含量发生了同步上升,因此可以初步判断ACS和SAMs对埃博霉素的生物合成可能起到积极促进作用,过表达该基因会提高埃博霉素的产量。(本文来源于《山东大学》期刊2018-05-23）
钟传青,王静,宗工理,姜天翼,曹广祥[5]（2018）在《积磷小月菌调控蛋白Mlp21700的异源表达及其与多聚磷酸盐(Poly-P)代谢基因启动子的结合》一文中研究指出【背景】积磷小月菌(Microlunatus phosphovorus)是重要的聚磷微生物,在好氧条件下积累聚磷酸盐并在厌氧条件分解聚磷酸盐,这个过程可能受到精细的基因调控。【目的】利用凝胶迁移实验(EMSA)分析调控蛋白Mlp21700结合的多聚磷酸盐(Poly-P)代谢基因启动子,找到Mlp21700可能的调控靶点。【方法】以积磷小月菌JN459菌株的基因组DNA为模板,PCR扩增Mlp21700编码序列,构建重组质粒p ET28a-21700并转化到大肠杆菌Transetta(DE3)菌株,诱导表达后采用非变性方法纯化获得Mlp21700融合蛋白。利用PCR方法分别扩增各个Poly-P代谢基因的启动子,用生物素标记后作为探针。采用EMSA分析Mlp21700在试验条件下是否结合启动子以及结合强度。【结果】DNA测序和酶切验证表明p ET28a-21700携带正确的Mlp21700编码序列。SDS-PAGE分析显示试验条件下Transetta(DE3)菌株大量表达可溶性Mlp21700,纯化的重组Mlp21700蛋白纯度大于90%,含量为0.64 mg/mL。EMSA分析表明在试验条件下Mlp21700能够结合Mlp26610基因ppgk和Mlp44770基因ppx的启动子。【结论】调控蛋白Mlp21700可能参与Mlp26610和Mlp44770基因的转录调控,进而调控Poly-P的分解过程。(本文来源于《微生物学通报》期刊2018年04期）
金晓媚,马雁冰[6]（2015）在《用于异源基因表达的毕赤酵母启动子研究进展》一文中研究指出甲醇营养型毕赤酵母是一个广泛使用的蛋白表达宿主系统,易于高密度发酵、具有真核细胞翻译后加工修饰特点,适于异源蛋白分泌表迭。转录调控是控制蛋白高效表达的关键环节,启动子是其中重要的元件。毕赤酵母表达系统中应用最为广泛的是甲醇诱导型A0X1启动子和组成型的GAP启动子,已成功用于一些异源蛋白的表达。近年来,发现了其他一些可供利用的启动子,包括来自管家基因的启动子如TEF、PGK1,以及具有特殊调控机制的启动子如FLD、PH089等。此外,通过对启动子进行序列改造,构建启动子文库,实现了对启动子的精细调控。不同的启动子具有各自独特的调控机制与特点,就毕赤酵母启动子在异源蛋白表达应用中的相关研究进展进行综述。(本文来源于《微生物学杂志》期刊2015年03期）
许兰珍,彭爱红,何永睿,姚利晓,雷天刚[7]（2014）在《异源韧皮部特异启动子在转基因枳中的表达》一文中研究指出为了筛选在柑橘韧皮部中特异表达的启动子,构建GRP、Rolc、RSSl异源韧皮部特异启动子控制GUS报告基因的植物表达载体,转化枳[Poncirus trifoliata(L.)Raf.]上胚轴。GUS组织化学染色分析表明,3个启动子均显示了维管束组织特异性。其中,GRP启动子活性强,且具有严格的韧皮部组织特异性;Rolc启动子活性最强,在根和茎中呈组成型表达;RSSl启动子活性最弱。Real-time RT-PCR和GUS酶活性分析进一步证明了GRP启动子具有较强的韧皮部组织特异性,该启动子有望应用于柑橘抗黄龙病基因工程育种。(本文来源于《园艺学报》期刊2014年01期）
朱蒙蒙[8]（2014）在《基于同异源表达及缺失分析的青蒿ADS启动子研究》一文中研究指出青蒿素（artemisinin）是从青蒿（Artemisia annua L.）中提取出的一种倍半萜内酯，目前被广泛应用于疟疾的治疗。青蒿素在青蒿体内的含量很低，为了满足市场的需求，迫切需要提高青蒿体内青蒿素的含量。青蒿素特异地在青蒿的油性腺毛中合成并贮存，腺毛特异性启动子对于青蒿素腺毛代谢工程具有重要的应用价值。青蒿紫穗槐二烯合成酶（Amorpha-4,11-diene Synthase, ADS）是青蒿素合成途径的关系酶，其在青蒿油性腺毛（不包括T字型腺毛）中特异表达。因此，能够启动ADS基因转录的ADS启动子是否也具有腺毛特异性则有待研究。本研究从青蒿中克隆了全长2935bp的ADS启动子，借助于GUS报告系统，通过将该启动子在青蒿中进行同源表达、在拟南芥（Arabidopsis thaliana）中进行异源表达以及缺失分析后，得到以下研究结果及结论：一、ADS启动子在青蒿及拟南芥中均具有腺毛特异性。青蒿和拟南芥的腺毛在结构及功能上均有较大差别：青蒿的腺毛为多细胞油性腺毛，而拟南芥的为单细胞非油性腺毛。尽管如此，GUS染色结果表明，转ADS启动子的青蒿及拟南芥中GUS染色均特异地局限于腺毛中，而在叶片的其他部位观察不到任何染色。这一结果与ADS基因在青蒿的腺毛中特异表达这一现象吻合，同时说明ADS启动子的腺毛特异性具有跨物种性。二、ADS启动子转录起始位点上游-350bp至-300bp这一区段可能含有决定ADS启动子腺毛特异性的关键元件。ADS启动子全长2935bp，而将其从5’端缺失到转录起始位点上游-350bp处时，缺失后片段在拟南芥中仍然保持着腺毛特异性；但当继续缺失到-300bp时，腺毛特异性消失，取而代之的是其下游报告基因在整个叶片中都有表达。由此可推测，-350bp至-300bp这一区段可能含有决定ADS启动子腺毛特异性的关键顺式作用元件。叁、与全长ADS启动子相比，缺失ADS启动子片段的转基因拟南芥腺毛特异性表达植株率明显降低。本研究中，对于全长ADS启动子或一个缺失ADS启动子片段，其转基因拟南芥植株中呈现出腺毛特异性表达的植株数与所有阳性植株总数的比值为其转基因拟南芥腺毛特异性表达植株率。研究发现，与全长ADS启动子相比，缺失ADS启动子片段的转基因拟南芥腺毛特异性表达植株率都有明显的降低：全长的植株率为70%左右，而缺失片段中Δ-800和Δ-550的仅有约1/5，其中植株率最高的Δ-400也仅有45.83%。这一结果表明ADS启动子腺毛特异性的背后有着未知且复杂的调控机制。四、缺失ADS启动子片段的启动活性普遍高于全长ADS启动子的启动活性。通过对转基因拟南芥进行GUS活性定量检测，研究发现Δ-800、Δ-600、Δ-550、Δ-500、Δ-450、Δ-400和Δ-350这7种腺毛特异性缺失ADS启动子片段转基因拟南芥的GUS活性均显着性高于全长ADS启动子转基因拟南芥的GUS活性，其中Δ-350的最高，为全长ADS启动子的3.27倍，而Δ-400的最低，为2.09倍；另外Δ-350转基因拟南芥的GUS活性也显着高于Δ-400的。这一结果说明ADS启动子-800bp的上游可能存在负调控的区域，另外-400bp至-350bp之间也可能存在负调控区域。本研究通过对ADS启动子的分析，得到一系列缺失ADS启动子片段，其中最短的仅417bp（Δ-350）。这些片段的启动活性均高于全长ADS启动子，但仍然保持着腺毛特异性，它们对于深入研究腺毛特异性表达的机制、构建腺毛特异性超级启动子以及腺毛代谢工程育种都有着重要的意义。(本文来源于《上海交通大学》期刊2014-01-01）
唐玮,李键,陈军,杨晟[9]（2012）在《大肠杆菌异源生产丁醇途径组装及启动子优化》一文中研究指出启动子优化是合成生物学研究的重要工具,可以通过不同强度的启动子调控基因转录水平以优化生物途径。丁醇是一种多用途的基础化工原料,目前有很多代谢工程手段应用在大肠杆菌的丁醇异源表达中,但是并没有进行启动子的精细调控。文中以大肠杆菌为宿主构建异源丁醇合成途径,通过DNA assembler的方法一步组装不同强度启动子组合的丁醇合成途径以优化丁醇合成。以强启动子Alper PLTetO1或弱启动子Alper BB转录硫解酶,以强启动子Braatsch 20或弱启动子Braatsch 10转录丁醇合成操纵子,共构建成4种不同质粒。结果表明以AlperPLTetO1转录硫解酶,Braatsch 10转录丁醇合成操纵子的组合获得最高的丁醇产量28 mg/L,与其他组合相比丁醇产量提高了3~5倍。(本文来源于《生物工程学报》期刊2012年11期）
邹晓威,李宏伟,刘芬,郑岩[10]（2012）在《异源启动子诱导eGFP与RFP在玉米丝黑穗菌中的表达差异》一文中研究指出本研究比较了含有3种不同异源的启动子表达载体在玉米丝黑穗菌中分别表达eGFP及RFP效果。将异源启动子otef、hsp70(莴苣霜霉菌的hsp70基因)启动子和mig2-5(玉米黑粉菌mig2-5基因)启动子与eGFP连接构建真核表达载体;以构建成功的含异源启动子的eGFP的表达载体为基体构建含异源启动子的RFP的表达载体。利用原生质体遗传转化法,将构建成功的表达载体转入玉米丝黑穗菌菌株内,将转化成功的菌株进行玉米侵染实验,观察eGFP及RFP在玉米植株内的表达情况。通过倒置荧光显微镜观察,3种异源启动子均能使eGFP及RFP在玉米丝黑穗菌菌株内正常表达,且荧光性稳定,但表达强度均不如含mig2-5启动子的转化菌株;当玉米叶片出现病斑时,运用倒置荧光显微镜,我们发现3种异源启动子均能够诱导eGFP及RFP在玉米植株内表达,并且在无病斑的叶片部位也能够观察到绿色荧光蛋白及红色荧光蛋白的表达,进而观察到玉米丝黑穗菌在玉米植株内的分布情况。含mig2-5启动子的转化菌株诱导eGFP及RFP在玉米植株内的表达强度明显高于含otef、hsp70启动子的转化菌株。通过本研究得到了能够诱导eGFP及RFP在玉米丝黑穗菌中及侵染后在玉米植株中均能够高效表达的mig2-5启动子。(本文来源于《中国植物病理学会2012年学术年会论文集》期刊2012-07-20）
异源启动子论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
【目的】目前对植物SPL8的基因功能研究主要集中在开花和育性方面,而其在干旱胁迫响应中的作用却鲜有报道。本文克隆、分析了白桦BpSPL8启动子,并研究了BpSPL8基因在拟南芥中响应干旱胁迫的功能。【方法】通过PCR克隆技术得到了白桦BpSPL8启动子;利用PLACE和PlantCARE软件对BpSPL8启动子顺式作用元件进行了预测。构建了BpSPL8启动子驱动GUS(β-葡萄糖苷酸酶编码基因)的植物表达载体,并采用浸花法将其转化至拟南芥中;继而利用GUS染色分析了BpSPL8启动子的组织表达模式;同时对BpSPL8在PEG处理下的表达水平进行了qRT-PCR分析。最后,以过表达BpSPL8拟南芥为材料来探究BpSPL8在干旱胁迫下的生物学功能。【结果】启动子元件分析显示,BpSPL8启动子中含有组织特异表达、光响应、激素响应及多个胁迫响应元件。GUS染色结果表明,BpSPL8启动子可在拟南芥的下胚轴、叶片、叶柄、根和花序中启动GUS基因表达。BpSPL8基因在PEG处理下的野生型白桦的根和叶片中均呈现先上调后下调的表达趋势。干旱胁迫下,过表达BpSPL8拟南芥的存活率和脯氨酸含量均显着低于野生型,丙二醛含量显着高于野生型;两个已知的抗逆基因DR29B和P5CS1在干旱处理后的野生型和转基因拟南芥中均上调表达;但在转基因拟南芥中呈现出延迟上调的表达模式。【结论】异源过表达白桦BpSPL8能够降低拟南芥的耐旱性,并在干旱胁迫下影响抗性基因DR29B和P5CS1的表达模式。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
异源启动子论文参考文献
[1].史超硕,李登科,曹雪,袁航,张钰文.两个不同启动子及其组合对碱性蛋白酶AprE异源表达的影响[J].中国生物工程杂志.2019
[2].张勇,胡晓晴,李豆,刘雪梅.白桦BpSPL8启动子的克隆及异源过表达BpSPL8对拟南芥耐旱性的影响[J].北京林业大学学报.2019
[3].谢芝玲,陈汉娜,钟林,徐佳莹,李演.叁种组成型启动子调控的鼠李糖脂基因在防御假单胞菌中的异源表达及活性研究[J].激光生物学报.2019
[4].崔潇文.启动子串联及关键基因过表达对异源表达菌株中埃博霉素产量影响研究[D].山东大学.2018
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[8].朱蒙蒙.基于同异源表达及缺失分析的青蒿ADS启动子研究[D].上海交通大学.2014
[9].唐玮,李键,陈军,杨晟.大肠杆菌异源生产丁醇途径组装及启动子优化[J].生物工程学报.2012
[10].邹晓威,李宏伟,刘芬,郑岩.异源启动子诱导eGFP与RFP在玉米丝黑穗菌中的表达差异[C].中国植物病理学会2012年学术年会论文集.2012