全文摘要
本发明公开了一种产维生素B12的菌株，该菌株的保藏号为GDMCCNo.60674。本发明还公开了所述的产维生素B12的菌株GDMCCNo.60674用于生产微生素B12的应用。所述的产维生素B12的菌株GDMCCNo.60674通过液体静置培养可以发酵生产维生素B12，且该菌株属于Lysinibacillus属，而目前没有Lysinibacillus属产维生素B12的报道，因此菌株GDMCCNo.60674具有良好的工业化应用价值。
主设计要求
1.一种产维生素B12的菌株，其特征在于，所述的产维生素B12的菌株的保藏号为GDMCCNo.60674。
设计方案
1.一种产维生素B12<\/sub>的菌株，其特征在于，所述的产维生素B12<\/sub>的菌株的保藏号为GDMCCNo.60674。
2.如权利要求1所述的产维生素B12<\/sub>的菌株GDMCC No.60674用于生产维生素B 12<\/sub>的应用。
设计说明书
技术领域
本发明属于生物工程的技术领域，具体的说，是关于一种产维生素B12<\/sub>的菌株及其应用。
背景技术
维生素B12<\/sub>又称为钴胺素(cobalamin)，是一类含钴的咕啉类化合物的总称，羟基钴胺素(hydroxycobalamin)、氰基钴胺素(cyanocobalamin)、脱氧腺苷钴胺素(deoxyadenosylcobalamin)和甲基钴胺素 (methylcobalamin)是维生素B 12<\/sub>的主要存在形式。维生素B12<\/sub>是自然界中由生物合成的最为复杂的小分子物质，它参与人体细胞代谢，影响DNA的合成与调节，还参与脂肪酸的合成和能量的生成。
由于高等动物和植物自身不能合成维生素B12<\/sub>，虽然ESCHENMOSER等在 1973年完成了维生素B 12<\/sub>的全化学合成(ESCHENMOSER A.Organische Naturstoffsynthese heuteVitamin B 12<\/sub> als Beispiel[J]. Naturwissenschaften,1974,61(12):513-525)，但由于化学合成法过于复杂且成本昂贵，因此维生素B 12<\/sub>几乎都是借助于微生物的发酵来获得。目前，工业上发酵生产维生素B12<\/sub>主要是利用费氏丙酸杆菌(P. freudenreichii)和谢氏丙酸杆菌(P.shermanii)的厌氧发酵，以及利用脱氮假单胞菌(P.denitrificans)进行的好氧发酵进行维生素B 12<\/sub>的工业生产(SCOTT A I.Discovering nature's diverse pathways tovitamin B 12<\/sub>:a 35-year odyssey[J].J Org Chem,2003,68(7):2529-2539)。例如：针对脱氮假单胞菌好氧合成维生素B 12<\/sub>的特性，通过基因工程的手段，对菌株进行改造，使得该菌株在50L发酵罐中最终产量达到239.7mg\/L(施慧琳.脱氮假单胞菌基因工程菌构建及维生素B12<\/sub>发酵过程优化[D].2016.)。又如：利用膜分离技术将费氏丙酸杆菌菌体细胞分离，将发酵液浓缩4倍，中间体Abo-cbi转化率达78.8％，维生素B12<\/sub>产量为53.9mg\/L(徐国霞,杜崴, 王自强,et al.细胞膜分离费氏丙酸杆菌离位转化合成维生素B 12<\/sub>[J].过程工程学报,2016(2).)。
Lysinibacillus属目前包括16个被描述的种：L.bronitoleram， L.sphaericus，L.fusiformis，L.parviboronicapiens，L.xylanilyticus， L.massiliensis，L.odysse，L.sinduriensis，L.macroides， L.mangiferihumi，L.meyeri，L.contaminans，L.chungkukjangi， L.manganicus，L.pakistanensis，L.tabacifolii。
Lysinibacillus属的细胞呈直杆状，常以成对或链状排列，具圆端或方端。细胞染色大多数在幼龄培养时呈现革兰氏阳性，以周生鞭毛运动。每个细胞产一个芽孢，能适应许多不良环境。好氧或兼性厌氧。化能异养菌，具有发酵或呼吸代谢类型。Lysinibacillus属的物种分离自土壤，人类脑脊髓液，宇宙飞船表面，潮滩沉积物等各种环境。该属的所有菌种共同特点为能够产生孢子，运动杆状。Lysinibacillus属的菌株的极性脂组分有双磷脂酰甘油(DPG)、磷脂酰甘油(PG)、磷脂酰乙醇胺(PE)和磷酸类脂(PL)。国内前人报道过有关Lysinibacillus属一些菌株的生物降解作用的研究，此类研究显示这些菌株具有一定的降解甲酚、硫化钠等污染物的作用。但是，在现有文献中，未见有关Lysinibacillus属产维生素 B 12<\/sub>的报道。
发明内容
本案发明人在长期的发酵食品研发过程中，对发酵食品中的微生物了进行分离，从分离株中筛选得到一株产维生素B12<\/sub>的菌株，并将其进行了保藏，保藏号为GDMCCNo.60674。同时通过分子生物学鉴定，确定该菌株为 Lysinibacillus属。
因此，本发明的第一个方面，提供了一种产维生素B12<\/sub>的菌株，其保藏号为GDMCCNo.60674。
本发明的第二个方面，提供了所述的产维生素B12<\/sub>的菌株GDMCC No.60674用于发酵生产维生素B 12<\/sub>的应用。
本发明的有益效果：本发明提供的产维生素B12<\/sub>的菌株GDMCC No.60674，其遗传性状稳定。该菌株GDMCC No.60674通过液体静置培养，发酵液中的维生素B 12<\/sub>的含量可达2.07μg\/100ml。该菌株属于Lysinibacillus属，但目前未有Lysinibacillus属产维生素B12<\/sub>的报道，因此本发明发现该 Lysinibacillus属具有产维生素B 12<\/sub>的能力，具有潜在的工业化应用价值。
附图说明
图1为维生素B12<\/sub>定性实验结果图。
图2为维生素B12<\/sub>的含量测定。
图3为酶联免疫法测定维生素B12<\/sub>含量的实验结果图。
图4为分离株与相关菌株的系统发育树。
具体实施方式
以下结合具体实施例，对本发明作进一步说明。应理解，下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或厂商提供的条件进行。
本发明对臭腐乳中的微生物进行分离，并利用建立的维生素B12<\/sub>定性筛选的方法，从分离株中筛选得到具有产生维生素B12<\/sub>能力的分离株。通过分子生物学鉴定，分离株主要聚集在Lysinibacillus属中。利用酶联免疫法验证了分离株具有产生维生素B12<\/sub>的能力。同时，对产维生素B12<\/sub>的菌株C5-1 进行了传代实验，证明该菌株具有稳定的产生维生素B 12<\/sub>能力，并对该菌株 C5-1进行了保藏，保藏号为GDMCC No.60674。
1、以下实施例所用的试验设备、试验试剂和菌株
(1)试验设备
GI6-2电热恒温培养箱、Seven Easy酸度计、TECAN M200全波长多功能微孔板分析系统、Merck Millipore超纯水机、Thermo离心机、1200超高压液相色谱仪、6410B三重四极杆质谱仪、C 18<\/sub>色谱柱、ME215P电子天平、 PHB-4pH计、HC-2517高速离心机。
(2)试验试剂
维生素B12<\/sub>(Vitamin B 12<\/sub>或Cyanocobalamin)标准品C63<\/sub>H88<\/sub>CoN14<\/sub>O14<\/sub>P纯度≥99％；乳酸杆菌琼脂培养基(Difco)；乳酸杆菌肉汤培养基(Difco)；维生素B12<\/sub>测定用培养基(Difco)；MRS固体培养基(陆桥)、MRS液体培养基 (陆桥)， 申请码:申请号:CN201910571273.4 申请日:2019-06-28 公开号:CN110373349A 公开日:2019-10-25 国家:CN 国家/省市:31(上海) 授权编号:授权时间:主分类号:C12N 1/20 专利分类号:C12N1/20;C12P19/42;C12R1/01 范畴分类:18H; 申请人:上海市质量监督检验技术研究院 第一申请人:上海市质量监督检验技术研究院 申请人地址:200233 上海市徐汇区苍梧路381号 发明人:徐琼;刘洋;俞漪;曲勤凤;窦同海;赵磊;张娜娜;钟江;陈羽菲;翁史昱 第一发明人:徐琼 当前权利人:上海市质量监督检验技术研究院 代理人:缪利明;赵孟琴 代理机构:31104 代理机构编号:上海华工专利事务所(普通合伙) 优先权:关键词:当前状态:审核中 类型名称:外观设计 标签：维生素论文; 设计图
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