韦桂雪
（日照市结核病防治所检验科，山东276800）
【摘要】目的：探讨应用两种培养基分离鉴定结核杆菌的不同效果。方法：2009年1月-2014年12月，我们收集我院患者640份临床送检标本，分别划线接种于罗氏培养基与丙酮酸钠培养基上，分离鉴定结核杆菌效果。结果：罗氏培养基与丙酮酸钠培养基对白色念珠菌和热带念珠菌分离鉴定效果差异有显著性（P<0.05），而罗氏培养基与丙酮酸钠培养基对其它结核杆菌生长阳性率鉴定差异无显著性（P<0.05）。结论：罗氏培养基和丙酮酸钠培养基都有较好的分离结核杆菌的鉴别效果，丙酮酸钠培养基在分离鉴定酵母样菌中操作简便、抑杂菌强，又优于罗氏培养基。
【关键词】罗氏培养基；丙酮酸钠培养基；白色念珠菌；热带念珠菌；结核杆菌；分离鉴定
结核病是感染结核分枝杆菌引起的慢性疾病，是严重危及全球的公共卫生问题之一。结核分枝杆菌的快速检出在结核病的诊断中起着重要作用[1]。而结核分枝杆菌在普通的培养基上生长缓慢，因此培养基的选择直接影响着疾病诊断的快慢[1]。为了提高其诊断率和治愈率，临床急需新技术代替传统的常规鉴定方法[2]。丙酮酸钠培养基是一种新型的分离和鉴定的培养基，近年来应用日益广泛。本研究采用此培养基与传统的罗氏培养基对结核杆菌的分离鉴定进行比较，取得了预期的诊断效果，现将有关结果分析报告如下：
1资料与方法
1.1一般实验资料
2009年1月-2014年12月期间，我们收集在我院住院及门诊结核病患者临床送检的痰液、咽拭子、呼吸道分泌物等标本共640例。丙酮酸钠培养基我们购自山东济南博赛生物研究所，罗氏培养基我们按照《全国临床检验操作规程》中的规定进行自配。
1.2培养方法
首先我们将选取的标本接种于罗氏培养基上，30℃培养48h。然后挑取可疑菌落经涂片，革兰染色确定为结核杆菌后，同时作碳源同化实验、芽管实验等进行鉴定，将结核杆菌鉴定至种。7d不生长者为报告阴性。同时我们接种至丙酮酸钠培养基上，30℃培养48h后，依据菌落显示的颜色进行菌种鉴定。
1.3统计学处理
采用SPSS13.0统计软件进行统计分析和总结，各项指标均以均数±标准差（?x±s）表示，分类资料统计分析采用χ2检验，p<0.05表示两者差异有统计学意义。
2结果
2.1菌种分布及两种培养基对结核杆菌分离鉴定结果比较
经48h细菌培养结果显示罗氏培养基与丙酮酸钠培养基上结核杆菌生长阳性率有统计学意义（P<0.05）。结核杆菌分布及两种培养基对结核杆菌分离鉴定结果比较详见表1。
2.2两种培养基中菌落形态的差异比较
结核杆菌的菌落在丙酮酸钠培养基上明显偏大，容易观察研究；而在罗氏培养基上则明显细小，两者的差异性易于观察和做比较分析。
3讨论
近年来，我国结核病疫情呈明显回升态势，究其原因比较复杂。主要原因包括诊断治疗的延误、流动人口的增加、抗结核药物的不规范治疗，病人体内的结核菌发生基因突变以及对多种抗结核药物发生耐受性等等。国外学者Stonebrink曾提出在改良罗氏基中加入丙酮酸能明显促进耐异烟肼的人型结核分枝杆菌生长。之后，国内有关文献[4]报道证实在改良罗氏培养基中加入丙酮酸钠或用丙酮酸钠替代原培养基中的甘油后对结核分枝杆菌的培养均优于改良罗氏培养基，但报道仅仅局限于丙酮酸钠能促进结核分枝杆菌的生长，并没有涉及丙酮酸钠培养基是否能提高临床送检标本的结核分枝杆菌阳性培养率[3]，这应引起临床医生的重视，在对患者治疗效果不佳时，应考虑到真菌感染的可能。因此微生物实验室要加强真菌检测，及时发现菌群失调，减少抗生素相关腹泻的发生。
本研究也对几种抗结核杆菌药物对结核杆菌的耐药率进行了观察，乙胺丁醇耐药率较低，在10%以下，链霉素耐药率最高，在20%以上，异烟肼对结核杆菌耐药率已达30%左右，其他药物耐药性也有所增加，出现了较多中度敏感株。本研究结果表明初治病人耐单药或2药居多。复治病例，耐药率明显高于初治病例，耐2，3，4种药的明显增加，治疗难度增加。数据显示，我院近年来初治与复治病人的耐药率还较高，与前几年相比无明显下降趋势，一方面与收治的病人难治及复治结核较多有关，另一方面也说明近年来结核病疫情未得到有效控制，仍存在治疗不及时、治疗方案不合理、督导管理不利等诸多问题。这些必须引起广大医生和微生物工作者的高度重视，加强临床医生和临床检验人员之间的联系，合理使用抗结核杆菌药物，以延缓和防止结核杆菌耐药性的进一步发展。
随着近年来结核杆菌的不断变异，结核杆菌引起的感染呈逐年增多趋势，因而对结核杆菌做出快速鉴定具有十分重要的意义。本研究采用丙酮酸钠培养基，其最大的优点是简便快速，分离培养的同时即可鉴定。直接从临床标本中分离和鉴定出肺结核杆菌，可在48h内作出正确判断，经生化试验确认其符合率为90%～100%[4]，但结核杆菌其他种类的菌落颜色不一，稳定性一般，还需要按常规方法进一步确认。丙酮酸钠培养基对标本中杂菌抑制作用明显优于罗氏培养基。如在1例尿液样品中，用丙酮酸钠培养基分离出肠结核杆菌，而在罗氏培养基生长出了其它结核杆菌，因此罗氏培养基尚需改进本身质量。丙酮酸钠培养基特别适合肺结核杆菌较多的标本的检测，尤其是在检测混合结核杆菌感染上，能弥补传统培养基的不同[5]。
综上所述，本研究通过两种培养基的对比试验显示，丙酮酸钠培养基优于罗氏培养基，能够更快速简便的分离鉴定临床常见结核杆菌，为临床提供了可靠的科学依据。
【参考文献】
[1]奚莹，王莉．301例肺结核患者痰培养阳性菌株耐药情况分析[J]．中国医师杂志，2010，，12(11)：1561—1563．
[2]张正，赵素蕊，庞良锦，等．临床标本分离475株结核杆菌调查分析[J]．中华医学检验杂志，2006，19(5)：267~269．
[3]孙亚红．1207例结核杆菌耐药分析[J]．广西医学，2011，33(11)：1492—1493．
[4]谢国艳,蔡志昌,周建华,等．临床感染深部真菌的分离鉴定和药敏结果分析[J]．检验医学，2007，19(2)：122-124．
[5]段慧萍，杨顺利，郭东菊．160例肺结核痰结核菌耐药情况分析[J]．山西医科大学学报，2009，36(11)：88-89．